武曉雨,鄧百萬,2,*,陳文強,2,解修超,2
(1.陜西理工大學 生物科學與工程學院,陜西 漢中 723000; 2.陜西省食藥用菌工程技術研究中心,陜西 漢中 723000)
紫外誘變選育耐高溫香菇新品種
武曉雨1,鄧百萬1,2,*,陳文強1,2,解修超1,2
(1.陜西理工大學 生物科學與工程學院,陜西 漢中 723000; 2.陜西省食藥用菌工程技術研究中心,陜西 漢中 723000)
為通過紫外誘變育種技術選育香菇耐高溫新品種,以野生耐高溫香菇品種XG-1為出發(fā)菌株,采用不同紫外照射時間和強度篩選耐高溫香菇新品種,并對綜合性狀較好的誘變菌株進行栽培試驗。結果顯示:在誘變時間25~30 s,誘變強度為12~16 W時,篩選出誘變菌株XG-5,定名為金西1號;其出菇溫度可達38 ℃,屬耐高溫品種;斜靠栽培每袋(規(guī)格17 cm×33 cm的聚乙烯袋)可產(chǎn)1.013 kg,生物轉化率達92.09%。
高溫香菇;紫外誘變;誘變時間;誘變溫度;生物轉化率
香菇(Lentinusedodes)是產(chǎn)于北半球溫帶與亞熱帶地區(qū)的一種腐生真菌,不僅營養(yǎng)豐富,而且具有較高的保健價值,自古以來深受人們的喜愛。我國香菇主產(chǎn)于河南、山東、福建、浙江等地區(qū)。代料栽培是我國20世紀80年代興起的香菇生產(chǎn)新技術,該技術用工農業(yè)生產(chǎn)的廢料或下腳料代替?zhèn)鹘y(tǒng)的段木栽培香菇,具有原料來源廣,產(chǎn)量高,周期短,經(jīng)濟效益好等特點[1]。近年來,受全球氣候變暖的影響,特別是夏季高溫給香菇栽培帶來新的挑戰(zhàn)。每年7—8月份,高溫對全國各大香菇產(chǎn)區(qū)造成很大的影響,出現(xiàn)病蟲害發(fā)生嚴重,香菇產(chǎn)量下降,市場供應量減少等問題,給菇農造成很大的經(jīng)濟損失[2]。因此,選育香菇高溫品種用于栽培具有十分現(xiàn)實的意義。
食用菌的育種方法主要有人工選擇育種、雜交育種、原生質體融合育種、誘變育種、基因工程育種等,它們都曾在食用菌的菌種改良方面發(fā)揮了巨大的作用[3]。況丹等[4]利用紫外誘變技術選育出高產(chǎn)量的杏鮑菇,選育出的菌株較原始菌株產(chǎn)量提高35%和34%。王連會等[5]利用原生質體紫外誘變技術篩選出對5′-FOA敏感性較高的香菇‘L26’菌株。陸佩麗等[6]利用紫外誘變技術篩選出誘變菌株Tm-3-21,為胞內多糖發(fā)酵的優(yōu)質菌株,其胞內多糖產(chǎn)量達0.67 mg·mL-1,得率是9.41%,比出發(fā)菌株提高1.19倍。本研究利用誘變育種技術,采用不同紫外照射時間和強度來篩選誘變菌株;同時對誘變菌株進行栽培試驗,并對其生物學特性進行分析。
目前,鑒定新品種的分子技術中,利用PCR擴增真菌核糖體轉錄間隔區(qū)(internal transcribed spacers,ITS)進行真菌鑒定技術取得迅猛發(fā)展。真菌rDNA的ITS區(qū)段既具保守性,又在科、屬、種水平上具有特異性序列,且進化速率較快,已被廣泛用于生物種內變異和種間、近親屬間的分子系統(tǒng)學研究[7-8]。本研究對選育菌株進行ITS序列鑒定,闡明其系統(tǒng)發(fā)育過程,旨在為香菇新品種的初步鑒定提供理論依據(jù)。
1.1.1 供試菌株
在陜西省漢中市西鄉(xiāng)縣進入夏季高溫期階段,從高川采集野生香菇子實體1個,標記為XG-1。香菇18、香菇808、香菇9608、香菇931、香菇290、香菇241-6、香菇602、滬農1號、Chamsongi、渝化2號、渝化3號、森立8號、森立15號、韓8、臺香8號、高溫香菇由陜西省資源生物重點實驗室食藥用菌菌種保藏中心提供。武香1號由食用菌研究所提供,南山1號由福建三明真菌研究所提供。
高溫型香菇:南山1號、武香1號、高溫香菇、臺香8號、香菇931;中低溫型香菇:香菇808、香菇290、香菇241-6、香菇602、Chamsongi、森立8號、韓8;普通型香菇:香菇18、香菇9608、滬農1號、渝化2號、渝化3號、森立15號。
1.1.2 培養(yǎng)基
CPDA綜合培養(yǎng)基:馬鈴薯200.0 g,葡萄糖20.0 g,瓊脂8.0~15.0 g,MgSO43.0 g,KH2PO40.5 g,蛋白胨5.0 g,水1 000 mL。
CPDA液體培養(yǎng)基:馬鈴薯200.0 g,葡萄糖20.0 g,MgSO43.0 g,KH2PO40.5 g,蛋白胨5.0 g,水1 000 mL。
栽培培養(yǎng)基配方:闊葉木屑78.0%,麥麩16.0%,蔗糖1.0%,石膏l(xiāng).0%,石灰1.0%,豆餅粉1.5%,玉米粉1.5%,含水量(58±5)%。
1.1.3 主要儀器及設備
無菌潔凈工作臺(型號:SW-CJ-2D),蘇州安泰空氣技術有限公司;生化培養(yǎng)箱(型號:5PX-250B5H-Ⅱ),上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司;高壓蒸汽滅菌鍋(型號:LDZX-50KBS),上海申安醫(yī)療器械廠;恒溫培養(yǎng)振蕩器(型號:ZHWY-B2112B),上海志城分析儀器制造有限公司;超低溫冷凍冰箱(型號:MDF-U32V),日本三洋電器集團;精密電子天平(型號:BSA8201),北京賽多利科學儀器有限公司;水平電泳儀(型號:DYCZ-22A),北京六一廠;生物顯微電腦圖像分析系統(tǒng)(型號:GEL-RAD),上海志城分析儀器制造有限公司。
1.2.1 分離方法
選擇野生高溫香菇XG-1,將香菇子實體去除菌柄,移入無菌操作臺,用0.1% HgCl2溶液表面消毒30 s,75%乙醇擦拭,無菌水沖洗2~3次,用無菌濾紙吸干表面水分后正放在培養(yǎng)皿上,蓋上玻璃鐘罩,置于有漫射光照射、溫度21~26 ℃條件下。1~2 d后收集孢子,無菌水稀釋后制成100 mL的孢子懸浮液,4 ℃冰箱保存?zhèn)溆肹9]。
1.2.2 紫外誘變
將保存于冰箱的孢子懸液適當稀釋,吸取300 μL涂布于CPDA培養(yǎng)基,共涂布60個,每10個為1組。打開培養(yǎng)皿蓋,放入已預熱15 min的紫外燈下分別照射5、10、15、20、25、30 s(黑暗條件下操作),將平板置于28 ℃恒溫培養(yǎng)箱中黑暗培養(yǎng)7~15 d,觀察并記錄再生情況。每組以長勢較好的3個培養(yǎng)皿菌落數(shù)的平均值作為該組的菌落數(shù),計算不同照射時間梯度下的致死率,多次重復試驗,求平均值后繪制致死曲線。篩選出最佳照射時間后,在此基礎上采用相同方法篩選最佳紫外強度(0、4、8、12、16、20 W)[10]。
致死率=(未經(jīng)誘變處理菌落數(shù)-誘變處理后菌落數(shù))/未經(jīng)誘變處理菌落數(shù)×100%。
1.2.3 拮抗反應
采用拮抗反應方法檢測誘變菌株,將親本菌株與誘變菌株接種到CPDA培養(yǎng)基上,28 ℃培養(yǎng)10~15 d,觀察拮抗反應。親緣關系較近的菌株之間拮抗較弱或無拮抗現(xiàn)象,親緣關系較遠的菌株之間則有明顯的拮抗現(xiàn)象[11]。
1.2.4 栽培試驗
將武香1號、南山1號2個高溫型代料香菇品種,與誘變獲得的菌株及原始菌株進行品種比較試驗。采用袋栽方式,每袋(規(guī)格:17 cm×33 cm的聚乙烯袋)裝干料1.1 kg,常壓滅菌,冷卻后接種。試驗采用隨機區(qū)組設計,每1個品種為1個處理,每個處理10袋,設3次重復,觀察記錄不同品種菌絲生長及出菇產(chǎn)量情況。
以誘變育種中綜合性狀較好的誘變菌株為試驗材料進行栽培試驗,采用袋栽方式(方法同上)。試驗采用隨機區(qū)組設計,分別采用覆沙、斜靠、架式3種出菇方式。每個品種做3個處理,每個處理200袋,設3次重復。觀察記錄不同品種的子實體性狀、產(chǎn)量及生物轉化率,同時觀察記錄不同出菇方式的子實體性狀、產(chǎn)量及生物轉化率[12],分別對每一茬出菇的品種及出菇方式進行詳細記錄,最后進行匯總。
1.2.5 遺傳穩(wěn)定性試驗
將出菇試驗中綜合性狀優(yōu)良的XG-5誘變株連續(xù)傳代10次,觀察其遺傳穩(wěn)定性。
1.2.6 生物學特性
觀察XG-5誘變株的菌絲特征、子實體特征。以菌絲體每2 d的生長速度為衡量標準,利用單因素試驗對其培養(yǎng)溫度、pH進行篩選。在pH自然的條件下,設置22、24、26、28、30 ℃共5個溫度梯度,篩選最佳培養(yǎng)溫度;在最佳培養(yǎng)溫度下,設置4.40、4.60、4.80、5.00、5.20、5.40、5.60、5.80、6.00、6.20、6.40、6.60共12個pH梯度,篩選最佳pH。
1.2.7 DNA分子指紋圖譜鑒定
采用CTAB法提取菌絲體基因組總DNA,選用通用引物:ITS1 (5-TCCGTAGGTGAACCTGC-3),ITS4 (5’-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3’)。PCR擴增程序:94 ℃ 5 min;94 ℃ 45 s,56 ℃ 45 s,72 ℃ 1 min,33個循環(huán);72 ℃ 10 min。反應結束后進行瓊脂糖凝膠電泳檢測,擴增出的16S rDNA基因片段送至生工生物工程(上海)股份有限公司測序,將測序結果提交至NCBI比對并獲取登錄號。選擇同源性較高的21株真菌的16S rDNA序列,利用MEGA 5.0通過最大似然值法和進化距離陣法等進行近鄰結合(Neigh-bor-Joining)聚類,1 000個重復作Bootstrap值分析構建系統(tǒng)發(fā)育樹。
1.2.8 酯酶(EST)同工酶分析
將試驗所用各菌株菌絲體1 g置于研缽中,加液氮充分研磨后,4 ℃ 30 000g離心20 min,上清液為酶液。采用垂直板聚丙烯酰胺凝膠電泳法[13],配制5%濃縮膠,10%分離膠,電極緩沖液為Tris-Glycine系統(tǒng),pH值8.3。上樣量:酶液6 μL,溴酚藍指示劑2 μL,10%蔗糖5 μL。濃縮膠電壓80 V,室溫電泳45 min;分離膠電壓120 V,4 ℃電泳4 h。取下凝膠,置于α、β-乙酸萘酯和堅牢藍配制的染色液中,37 ℃輕微振蕩,染色25 min。將出現(xiàn)紅褐色酶帶的凝膠置于7%醋酸溶液中脫色、保存,掃描照相。
2.1.1 紫外誘變條件的選擇
圖1 XG-1紫外誘變效應曲線Fig.1 UV mutagenesis curve of XG-1
香菇孢子紫外誘變效應曲線及誘變致死率如圖1所示。在紫外強度為8 W的基礎上,隨著紫外照射的延長,菌落數(shù)逐漸減少,誘變致死率越來越高。紫外誘變時間為25 s時,菌落數(shù)為5,誘變致死率83%;紫外誘變時間為30 s時,菌落數(shù)為0,誘變致死率為100%(圖1-A)。紫外照射時間為25 s時,隨著紫外強度的不斷增強,菌落數(shù)逐漸減少,誘變致死率越來越高。紫外強度為12 W時,菌落數(shù)為9,誘變致死率為70%;紫外強度為16 W時,菌落數(shù)為5,誘變致死率為83%;紫外強度為20 W時,菌落數(shù)為0,誘變致死率達100%(圖1-B)。因此,為了獲得較高的正誘變率,本研究選擇致死率為70%~83%,即誘變時間25~30 s,誘變強度12~16 W的照射劑量作為誘變條件。
2.1.2 耐高溫誘變菌株的獲得
拮抗反應試驗結果表明,30株誘變菌株與親本菌株中間的拮抗線較明顯,分別為誘變菌株XG-2、XG-3、XG-4、XG-5、XG-6、XG-7、XG-8、XG-9、XG-10、XG-11、XG-12、XG-13、XG-14、XG-15、XG-16、XG-17、XG-18、XG-19、XG-20、XG-21、XG-22、XG-23、XG-24、XG-25、XG-26、XG-27、XG-28、XG-29、XG-30、XG-31,其中XG-3、XG-5、XG-14、XG-23、XG-29與親本拮抗效果最明顯,拮抗效果分別為較弱、明顯、較弱、較弱、明顯。
由表1可知,在品種比較試驗中,XG-5菌株的菌絲生長速度最快,平均為0.313 cm·d-1。武香1號、南山1號及XG-5在30 ℃以上可以正常出菇,而且XG-5最高出菇溫度可達38 ℃,XG-1出菇溫度為15~29 ℃。其中,XG-5的轉色期最早,南山1號、XG-5的出菇期最早。XG-5的產(chǎn)量最高,為0.975 kg·袋-1,生物轉化率達88.64%,達到香菇新品種選育標準。
通過測定菌絲生長速度、菌齡、出菇溫度等指標,從5個誘變菌種中篩選出可以在30 ℃以上正常出菇,且菇形好、產(chǎn)量高、抗逆性強的XG-5菌株,定名為金西1號。該菌株菌齡期60 d以上,培養(yǎng)溫度降低菌齡延長,屬高溫型早熟品系。進一步分析了不同出菇方式對金西1號農藝性狀及產(chǎn)量的影響,結果(表2)表明:性狀上,覆沙栽培最好,其次是斜靠栽培,架式栽培最差;產(chǎn)量上,斜靠栽培最高,覆沙栽培其次,架式栽培最低。金西1號子實體單生、肉質厚,菌柄粗,平均每袋產(chǎn)量為0.975 kg;出菇溫度范圍更廣,在38 ℃條件下,西鄉(xiāng)縣其他香菇品種已不能出菇,金西1號仍能正常出菇。因此,金西1號是夏季袋料香菇中表現(xiàn)較好的品種之一。
將栽培試驗中綜合性狀表現(xiàn)優(yōu)良的誘變菌株金西1號連續(xù)傳代10次,然后38 ℃熱激3 h。結果表明,不同代誘變菌株的耐高溫能力并未發(fā)生大的變異,說明金西1號遺傳特性較穩(wěn)定(表3)。潔白,不易產(chǎn)生褐色色素(圖2)。其中,金西
表1不同菌株菌絲生長及出菇產(chǎn)量比較
Table1Comparison of mycelium growth and fruiting yield of different bacterial strains
菌株Bacterialstrains菌絲生長速度Myceliagrowthrate/(cm·d-1)點種日期Sowingdate/(month?day)轉色期Turncolordate/(month?day)出菇期Fruitingdate/(month?day)出菇溫度Fruitingtemperature/℃產(chǎn)量Yield/(kg·bag-1)生物轉化率Bioconver?sionrate/%武香1號029302?2005?0806?1315~3209178336南山1號026402?2005?0306?1014~3509558682XG?1021302?2005?0306?1515~2907807091XG?3022702?2005?0406?1514~2808297536XG?5031302?2005?0106?1012~3809758864XG?14027502?2005?0606?1415~2507837118XG?23021002?2005?0306?1113~2808247491XG?29024902?2005?0206?1514~2907767055
表2金西1號不同出菇方式的農藝性狀及產(chǎn)量
Table2Agronomic traits and yield of Jinxi 1 under different fruiting ways
出菇方式Fruitingways傘徑Umbrellapath/cm傘厚Umbrellathick/cm柄徑Handlediameter/cm柄長Handlelong/cm產(chǎn)量Yield/(kg·bag-1)生物轉化率Bioconversionrate/%覆沙栽培Coversandcultivation6818183009868964斜靠栽培Leaningcultivation6514133710139209架式栽培Shelfcultivation6413124009278427
表3XG-1與金西1號傳代培養(yǎng)對比試驗
Table3Comparison of subculture of XG-1 and Jinxi 1
菌株Strains菌絲平均生長速度Myceliagrowthrate/(cm·d-1)第7代7thgeneration第8代8thgeneration第9代9thgeneration第10代10thgenerationXG?10215020501850190金西1號0312031103230311
2.4.1 菌絲特征
原始菌株XG-1與誘變菌株金西1號菌絲均潔白,不易產(chǎn)生褐色色素(圖2)。其中金西1號母種菌絲濃密、潔白、粗壯,并向四周延伸,氣生菌絲旺盛,日生長量達4 mm。
A,金西1號;B,XG-1A, Jinxi 1; B, XG-1圖2 原始菌株XG-1與誘變菌株金西1號的菌絲Fig.2 Mycelia of original strain XG-1 and mutant strain Jinxi 1
2.4.2 子實體特征
栽培試驗表明:金西1號子實體單生,形態(tài)圓整;菌蓋呈半球形,直徑4~7 cm,表面顏色棕褐色;肉質厚1.3~2.0 cm,組織致密,菌柄較粗,平均長度3.5 cm。與原始菌株XG-1的子實體相比,金西1號菌蓋表面無明顯褶皺,較光滑,且肉質較厚,顏色更偏向于棕色(圖3)。
2.4.3 不同溫度、pH對金西1號菌株生長的影響
自然pH值條件下,金西1號生長的最適宜溫度為26 ℃,菌絲體長度達0.450 cm(圖4-A);在26 ℃培養(yǎng)條件下,最適宜pH為4.8,此時,菌絲體長度達0.428 cm(圖4-B)。表明金西1號屬高溫型菌類,適宜在偏酸性環(huán)境中生長。
A,金西1號;B,XG-1;C,金西1號(覆沙栽培)A, Jinxi 1; B, XG-1; C, Jinxi 1(Cover sand cultivation)圖3 原始菌株XG-1和誘變菌株金西1號的子實體Fig.3 Fruiting bodys of original strain XG-1 and mutant strain Jinxi 1
圖4 溫度(A)和pH(B)對金西1號菌絲體生長的影響Fig.4 Effects of different temperature (A) and pH (B) on the mycelium growth of Jinxi 1
2.4.4 香菇新品種的進化分析
利用Bankit在NCBI上獲取金西1號的登錄號為KF707519,構建金西1號菌株和部分栽培種的系統(tǒng)發(fā)育樹。結果(圖5)表明,金西1號、香菇808、香菇602、香菇290、森立8號、Chamsongi聚為一個分支,屬于中低溫型香菇;渝化3號、香菇18以及渝化2號聚為一個分支,屬于普通型香菇;高溫香菇、南山1號聚為一個分支,屬于高溫型香菇。其中金西1號與香菇602、香菇290、Chamsongi聚在同一分支,其遺傳距離小,相似性大,說明其親緣關系較近。金西1號與香菇808以及森立8號的遺傳距離較大,相似性較小,說明其親緣關系相對較遠。
2.4.5 香菇不同菌株酯酶(EST)同工酶檢測
通過聚丙烯酰胺凝膠電泳得到香菇15個不同菌株的酯酶(EST)同工酶譜(圖6)。香菇不同菌株酯酶同工酶除共有的酶帶和酶帶顏色深淺存在差異外,還均具有特異性譜帶;其中,編號3、4、6、8、13、14為高溫菌株特征條帶。對15個香菇菌株的酯酶同工酶譜進行分析還發(fā)現(xiàn),金西1號、南山1號、香菇290、香菇931的酶帶比較集中,而森立15號、香菇241-6、森立8號與其他菌株的酶帶數(shù)量及顏色相差較大。15種香菇菌株的酯酶同工酶譜帶數(shù)均比較穩(wěn)定,表現(xiàn)出相似的遺傳學基礎,但又各不相同。因此,可作為香菇種以下單位或品種鑒定的依據(jù)。
Lentinula edodes(AB286064),香菇290;Lentinula edodes(AB286065),香菇602;Lentinula edodes(AB286067),Chamsongi;Lentinula edodes(JN790683),森立8號;Lentinula edodes(KF757011),香菇808Lentinula edodes(AB286064), xianggu 290; Lentinula edodes(AB286065), xianggu 602; Lentinula edodes(AB286067), Chamsongi; Lentinula edodes (JN790683), senli 8; Lentinula edodes(KF757011), xianggu 808圖5 金西1號菌和部分栽培種的系統(tǒng)發(fā)育樹Fig.5 Phylogenetic tree of Jinxi 1 and some cultivars
1,森立15號;2,香菇602,3,金西1號;4,南山1號;5,韓8;6,高溫香菇;7,香菇290;8,臺香8號;9,香菇9608;10,滬農1號;11,香菇241-6;12,森立8號;13,武香1號;14,香菇931;15,Chamsongi1, Senli 15; 2, Xianggu 602; 3, Jinxi 1; 4, Nanshan 1; 5, Han 8; 6, Gaowenxianggu; 7, Xianggu 290; 8, Taixiang 8; 9, Xianggu 9608; 10, Hunong 1; 11, Xianggu 241-6; 12, Senli 8; 13, Wuxiang 1; 14, Xianggu 931; 15,Chamsongi圖6 十五種香菇菌株酯酶同工酶電泳譜圖Fig.6 Electrophoresis profiles of lipase isoenzymes from 15 different strains of Lentinus edodes
食用菌的育種方法中,與雜交育種、原生質體融合育種、基因工程育種相比,紫外誘變育種操作更加簡單,便于新品種的技術推廣。本研究利用紫外誘變育種技術篩選出最高出菇溫度可達38 ℃的耐高溫香菇新品種——金西1號,其營養(yǎng)菌絲體生長溫度為5~35 ℃,最適24~28 ℃;子實體形成溫度為12~38 ℃,最適為18~28 ℃;子實體生長最適溫度26 ℃,pH范圍4.4~6.6,最適pH為4.80。金西1號在NCBI中的登錄號為KF707519,系統(tǒng)發(fā)育樹分析表明,金西1號與香菇290、香菇602、Chamsongi親緣關系較近。酯酶同工酶譜分析發(fā)現(xiàn),金西1號、南山1號、香菇290、香菇931的酶帶比較集中,進一步確定了它們是相近種。栽培試驗表明,金西1號具有耐高溫,產(chǎn)量高,遺傳性狀穩(wěn)定,生物學轉化效率高,子實體品質好等優(yōu)點,可作為優(yōu)勢菌種進行市場推廣。
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Breedingthermo-tolerantstrainsofLentinulaedodesbyUVmutation
WU Xiaoyu1, DENG Baiwan1,2,*, CHEN Wenqiang1,2, XIE Xiuchao1,2
(1.SchoolofBiologicalScienceandEngineering,ShaanxiSci-TechUniversity,Hanzhong723000,China; 2.ShaanxiEngineeringResearchCenterofEdibleandMedicinalFungi,Hanzhong723000,China)
In order to breed new varieties ofLentinusedodeswhich can bear high temperature by UV mutation, a wild high temperature resistantL.edodessample XG-1 was used as the starting strain. New varieties of high temperature resistantL.edodeswere screened by different UV irradiation time and intensity, and the cultivated strains with better comprehensive characters were cultivated. Mutant XG-5, known as Jinxi 1 was screened when the mutation time was 25~30 s and mutation intensity was 12~16 W; Its fruited temperature was up to 38 ℃, so it belonged to high temperature resistant varieties. In leaning cultivation mode, the field of Jinxi 1 could reach 1.013 kg per bag (polyethylene bag size 17 cm × 33 cm), and the biotransformation rate reached 92.09%.
high temperatureLentinulaedodes; UV mutagenesis; mutagenesis time; induced temperature; bioconversion rate
浙江農業(yè)學報ActaAgriculturaeZhejiangensis, 2017,29(12): 2015-2022
http://www.zjnyxb.cn
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10.3969/j.issn.1004-1524.2017.12.09
2017-06-05
陜西省教育廳科研計劃項目(13JS021)
武曉雨(1991—),男,河北張家口人,碩士研究生,研究方向為微生物資源保育及開發(fā)利用。E-mail: 793063822@qq.com
*通信作者,鄧百萬,E-mail: 2210309868@qq.com
S646.1+2
A
1004-1524(2017)12-2015-08
(責任編輯侯春曉)