郭文博，沈源源，楊俊花，范 楷，趙志輝，韓 錚

（上海市農(nóng)業(yè)科學院農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量標準與檢測技術(shù)研究所，上海市設施園藝技術(shù)重點實驗室，上海市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全評價技術(shù)服務平臺，上海農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全工程技術(shù)研究中心，上海 201403）

玉米中伏馬毒素產(chǎn)生菌的分離鑒定及其產(chǎn)毒條件的研究

郭文博，沈源源，楊俊花，范 楷，趙志輝，韓 錚*

（上海市農(nóng)業(yè)科學院農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量標準與檢測技術(shù)研究所，上海市設施園藝技術(shù)重點實驗室，上海市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全評價技術(shù)服務平臺，上海農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全工程技術(shù)研究中心，上海 201403）

從發(fā)霉的玉米中分離鑒定產(chǎn)生伏馬毒素B1（Fumonisin B1，F(xiàn)B1）和伏馬毒素B2（Fumonisin B2，F(xiàn)B2）的真菌菌株并對其產(chǎn)毒條件（培養(yǎng)基、溫度、時間、水分含量）進行考察，揭示伏馬毒素的發(fā)生規(guī)律。將發(fā)霉玉米的提取液接種至PDA培養(yǎng)基，利用平板劃線法分離獲得產(chǎn)毒菌株，通過形態(tài)學觀察和rDNA-ITS序列分析分別進行真菌形態(tài)學和種屬鑒定；將產(chǎn)毒菌株接種在不同培養(yǎng)基上并選擇不同條件（溫度、時間、水分含量）培養(yǎng)，利用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（HPLC-MS/MS）對不同培養(yǎng)條件下各種培養(yǎng)基中FB1、FB2進行定量檢測。BLAST結(jié)果表明，分離得到的菌株DNA序列與NCBI數(shù)據(jù)庫中登錄號為KC709665.1、KR020684.1和KR052812.1的擬輪生鐮孢菌（Fusarium verticillioides）序列同源性均為100%，證明分離得到的產(chǎn)毒菌株為F.verticillioides。接種試驗表明，F(xiàn).verticillioides的最佳產(chǎn)毒條件為玉米培養(yǎng)基，40%水分含量，28℃黑暗條件下培養(yǎng)28 d，F(xiàn)B1、FB2產(chǎn)量分別達到821.08 mg/kg、339.50 mg/kg。本研究玉米中伏馬毒素產(chǎn)毒菌株主要為F.verticillioides，且伏馬毒素的產(chǎn)生與培養(yǎng)基、溫度、時間和水分含量等環(huán)境因素密切相關(guān)。

伏馬毒素；擬輪生鐮孢菌；分離；產(chǎn)毒條件；玉米

伏馬毒素主要是由擬輪生鐮孢菌（Fusarium verticillioides）、層生鐮孢菌（F.proliferatum）和硫色鐮孢菌（F.sulphureum）在一定溫度和濕度條件下產(chǎn)生的一組水溶性次級代謝產(chǎn)物［1-2］，主要污染玉米及其制品，在世界范圍內(nèi)特別是玉米產(chǎn)區(qū)廣泛分布［3］。常見的伏馬毒素主要為伏馬毒素B1（Fumonisin B1，F(xiàn)B1）和伏馬毒素B2（Fumonisin B2，F(xiàn)B2），是一類由不同的多氫醇和丙三羧酸組成的結(jié)構(gòu)類似的雙酯化合物，其結(jié)構(gòu)與人和動物體內(nèi)的神經(jīng)鞘氨醇極為相似，在神經(jīng)鞘脂代謝過程中可競爭性地結(jié)合神經(jīng)鞘氨醇N-2?；D(zhuǎn)移酶，從而抑制神經(jīng)鞘氨醇的生物合成、阻礙鞘脂類代謝，引發(fā)各種疾?。?］，如馬的大腦白質(zhì)軟化癥（Equine leucoencephalomalacia，ELEM）［5］、豬肺水腫綜合征（Porcine pulmonary edema，PPE）［6］、嚙齒類動物的肝臟和腎臟損傷等［7］。此外，伏馬毒素還具有很強的細胞毒性［8］和免疫毒性［9］，與人類食道癌的發(fā)生密切相關(guān)［10-12］。

伏馬毒素的產(chǎn)生與鐮刀菌種屬及其生長的環(huán)境條件密切相關(guān)，不同種屬的鐮刀菌在不同的條件下產(chǎn)生伏馬毒素的種類和能力均存在差異［13-14］。其中，溫度、水分含量、培養(yǎng)時間、基質(zhì)等是影響伏馬毒素產(chǎn)量的主要因素。目前，國內(nèi)對伏馬毒素發(fā)生規(guī)律的報道主要集中在馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基（PD）、馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基（PS）、察氏培養(yǎng)基（Czapek）和理查德培養(yǎng)基（Richard）等常規(guī)培養(yǎng)基。研究結(jié)果表明，在馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基中F.verticillioides的最佳產(chǎn)毒條件為pH 9、12 h光暗交替、25℃、培養(yǎng)10 d［15］；在Richard培養(yǎng)基的最佳產(chǎn)毒條件為25℃、pH 5、培養(yǎng)10 d［16］。但對玉米、大米等實際高產(chǎn)毒培養(yǎng)基的產(chǎn)毒條件如溫度、水分含量等影響因素缺乏系統(tǒng)的考察，限制了伏馬毒素標準品的研制及動物毒理學的研究和發(fā)展。

本研究首先從發(fā)霉的玉米中分離鑒定獲得伏馬毒素的主要產(chǎn)毒菌株，將其分別接種在馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA）和馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基（PD）、玉米和大米四種培養(yǎng)基質(zhì)上，采用LC-MS/MS技術(shù)分析不同培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時間和水分含量下伏馬毒素的產(chǎn)生量，構(gòu)建不同培養(yǎng)基中伏馬毒素的產(chǎn)生量與溫度、時間和水分含量的非線性回歸模型，旨在揭示伏馬毒素的發(fā)生規(guī)律，對防控伏馬毒素污染、保證農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 試驗材料與培養(yǎng)基

優(yōu)質(zhì)玉米、大米、土豆，均購自上海某超市，發(fā)霉玉米（10份）收集于上海某農(nóng)貿(mào)市場。

馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA）和馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基（PD）［17］。大米培養(yǎng)基：稱取50 g優(yōu)質(zhì)大米至250mL三角瓶，加入20 mL蒸餾水混勻，用透氣封口膜密封瓶口，浸泡過夜，121℃滅菌30min，冷卻后將大米搖散待用。玉米培養(yǎng)基：稱取50 g優(yōu)質(zhì)玉米至250 mL三角瓶，加入20 mL蒸餾水混勻，用透氣封口膜密封瓶口，浸泡過夜，121℃滅菌30 min，冷卻后將玉米搖散待用。

1.2 試劑與儀器

FB1、FB2標準品（德國Sigma公司）；葡萄糖、瓊脂（上海源葉生物科技有限公司）；甲醇、乙腈（色譜純，美國Merck公司）；甲酸（色譜純，中國Aladdin公司）。真菌基因組DNA小量制備試劑盒、DNA凝膠回收試劑盒（美國AXYGEN公司）；Taq DNA聚合酶（上海桑尼生物科技有限公司）；DNA marker［Takara，寶生物工程（大連）有限公司］。

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜：TSQ Quant配 Surveyor液相操作系統(tǒng)（美國 Thermo Fisher Scientific公司）；Eppendorf 5804R離心機（德國Eppendorf公司）；Applied Biosystems 2720 PCR儀、Applied Biosystems 3730-XL測序儀（美國Applied Biosystems公司）；Tanon 2500凝膠成像系統(tǒng)（上海天能科技有限公司）；Thermo Scientific Heraguard ECO超凈臺（美國Thermo Fisher Scientific公司）；霉菌培養(yǎng)箱（上海精宏實驗設備有限公司）；SX-500高壓滅菌鍋（日本TOMY公司）。

1.3 方法

1.3.1 菌株分離方法

稱取10 g伏馬毒素含量超標的發(fā)霉玉米，加入100 mL無菌水震蕩提取30 min，分別取10-1、10-2、10-3的稀釋液200μL涂布于PDA培養(yǎng)基平板上，28℃培養(yǎng)，48 h后利用平板劃線法逐步分離得到單菌落，將分離得到的單一菌落接種于PDA培養(yǎng)基上28℃黑暗培養(yǎng)7 d，備用。

1.3.2 產(chǎn)毒菌株的分子生物學鑒定

對于大多數(shù)真核生物來說，核糖體內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)（ITS）序列分析被廣泛應用于真菌物種的分子鑒定以及屬內(nèi)物種間或種內(nèi)差異較明顯的菌群間的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系分析。本試驗利用特異性的引物進行PCR擴增，確定產(chǎn)毒菌的種類。引物由上海派森諾生物科技股份有限公司合成，序列如下：ITS1：TCCGTAGGTGAACCTGCGC，ITS4：TCCTCCGCTTATTGATATGC。PCR擴增反應體系包括：DNA（20 ng/μL）1.0μL，10×Buffer（含2.5×10-3mol/LMg2+）5μL，Taq聚合酶（5 U/μL）1.0μL，dNTP（1×10-5mol/L）1.0μL，ITS1引物（1×10-5mol/L）1.5μL，ITS4引物（1×10-5mol/L）1.5μL，ddH2O 39.0μL。PCR擴增程序：95℃預變性5 min；95℃變性30 s，58℃退火30 s，72℃延伸1 min，共35個循環(huán)；最后72℃延伸7 min。反應完成后，PCR產(chǎn)物進行1%瓊脂糖凝膠電泳檢測，確認PCR擴增片段。PCR產(chǎn)物經(jīng)膠回收后用ABI3730-XL測序儀進行堿基序列測定，將拼接后的序列與NCBI核酸數(shù)據(jù)庫進行比對，得到待測菌株的菌種信息。

1.3.3 培養(yǎng)條件與方法

將分離獲得的產(chǎn)毒菌株接種于PDA培養(yǎng)基，28℃黑暗條件下培養(yǎng)7 d后，備用。用無菌打孔器從PDA培養(yǎng)基上取直徑為0.5 cm的菌絲塊，分別將菌絲塊接種至PDA、PD、玉米、大米培養(yǎng)基中，每份接種3塊菌絲塊，用無菌透氣封口膜密封，搖勻，28℃黑暗條件下培養(yǎng)4周。接種第1周，每天振蕩三角瓶1次，使菌絲與培養(yǎng)基充分接觸，避免玉米、大米培養(yǎng)基凝結(jié)成塊，培養(yǎng)結(jié)束后，40℃烘干，待用。

1.3.4 產(chǎn)毒條件優(yōu)化

①不同培養(yǎng)基：將分離獲得的產(chǎn)毒菌株分別接種于PDA、PD、玉米、大米培養(yǎng)基，28℃、40%水分含量條件下培養(yǎng)28 d，每7 d重復取樣3份；②培養(yǎng)時間：將分離獲得的產(chǎn)毒菌株接種于玉米培養(yǎng)基，28℃、40%水分含量條件下培養(yǎng)35 d，每7 d重復取樣3份；③培養(yǎng)溫度：將分離獲得的產(chǎn)毒菌株接種于玉米培養(yǎng)基，20℃、25℃、28℃、30℃、35℃，40%水分含量培養(yǎng)28 d，每7 d重復取樣3份；④水分含量：在250 mL的三角瓶中裝入50 g玉米，然后分別加入10 mL、15 mL、20 mL、25 mL、30 mL水，即調(diào)節(jié)水分含量為20%、30%、40%、50%、60%，接種分離得到的產(chǎn)毒菌株，28℃培養(yǎng)28 d，每7 d重復取樣3份。

1.3.5 樣品處理

液體培養(yǎng)基：PD培養(yǎng)液渦旋振蕩5 min，取2 mL于10 mL離心管中加入2.0 mL乙腈，渦旋混合1 min，超聲1 h，4 000 r/min離心10min，取上清液過0.22μm濾膜后用乙腈-水（50∶50，v/v）稀釋100倍后上機測定。

固體培養(yǎng)基：將3種固體培養(yǎng)基粉碎混勻后準確稱?。?.00±0.01）g樣品于10 mL離心管中，加入5.0 mL乙腈-水（50∶50，v/v）提取，渦旋混合1min，超聲1 h，4 000 r/min離心10min，取上清液過0.22μm濾膜后用乙腈-水（50∶50，v/v）稀釋104倍后上機測定。

1.3.6 LC-MS/MS檢測條件

Thermo C18色譜柱（2.1 mm×100 mm，5μm）；流動相A為甲醇，流動相B為0.1%甲酸水；線性梯度洗脫程序：0 mim（40%A），1 min（60%A），7 min（100%A），8 min（100%A），8.2 min（40%A），9.0 min（40%A）；流速為300μL/min；進樣量5μL；柱溫30℃。

采用正離子模式的電噴霧（ESI+）離子源，多反應監(jiān)測模式（MRM）采集；FB1和FB2的母離子、子離子、碰撞能量等參數(shù)見表1；噴霧電壓為3.5 kV；碎裂電壓為1.5 V；毛細管溫度為350℃；霧化氣壓力3 500 Pa；輔助氣壓 15 Pa；鞘氣壓 45 Pa。

表1 伏馬毒素B1、B2質(zhì)譜條件參數(shù)Table 1 M ass spectrometry parameters for FB1 and FB2

2 結(jié)果與分析

2.1 伏馬毒素含量測定

本試驗利用HPLC-MS/MS技術(shù)，采用多反應監(jiān)測模式（MRM），建立測定玉米培養(yǎng)基中FB1和FB2含量的分析方法。試驗結(jié)果表明：玉米培養(yǎng)基樣品中FB1和FB2在1—200μg/kg之間線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)（R2）均大于0.999，定量限為0.3μg/kg，檢出限為0.1μg/kg；采用空白基質(zhì)加標的方法，考察方法的回收率和精密度，得到低、中、高濃度加標回收率為88.6%—95.3%，精密度（RSD%）范圍是2.9%—6.8%。通過方法學考察，表明采用的方法靈敏、準確、可靠，滿足本試驗中對PDA、PD、玉米和大米中FB1和FB2的準確定量。標準溶液和玉米產(chǎn)毒培養(yǎng)基中FB1、FB2色譜圖如圖1。

圖1 伏馬毒素B1、B2色譜圖Fig.1 Chromatograms of FB1 and FB2 in standard solution（A）and maizemedium（B）

2.2 伏馬毒素產(chǎn)生菌的鑒定

利用微生物稀釋分離法和平板劃線法，將分離得到的產(chǎn)伏馬毒素的菌株接種于PDA培養(yǎng)基，28℃黑暗條件下培養(yǎng)7 d，由圖2可見：菌落為棉絮狀平鋪PDA培養(yǎng)基中，氣生菌絲為白色，基內(nèi)菌絲為淺粉色，培養(yǎng)基反面呈淡黃色；在顯微鏡下觀察到大型分生孢子呈鐮刀形，數(shù)量較少，而小型分生孢子呈橢圓形，數(shù)量較多且多為棒形、無分隔。根據(jù)《真菌鑒定手冊》《常見鐮孢霉鑒定手冊》《中國真菌志》等工具書，初步鑒定為鐮刀菌［18-20］。

提取菌株DNA后，用IST1和IST4引物進行PCR擴增，得到550 bp左右的目的條帶（圖2），對純化后的PCR產(chǎn)物進行序列測定后，與NCBI數(shù)據(jù)庫中已知菌株信息比對，結(jié)果表明：試驗菌株與數(shù)據(jù)庫中登錄號為KC709665.1、KR020684.1和KR052812.1的F.verticillioides序列同源性均為100%。最終，本試驗經(jīng)過形態(tài)學鑒定和rDNA-ITS序列分析，共獲得8株產(chǎn)伏馬毒素的F.verticillioides，并利用Fum-1進行最佳產(chǎn)毒條件的優(yōu)化。

圖2 分離菌株的形態(tài)特征及PCR鑒定結(jié)果Fig.2 Morphological characteristics and PCR identification of isolates

2.3 培養(yǎng)時間對F.verticillioides產(chǎn)毒量的影響

由圖3可見，F(xiàn).verticillioides在不同培養(yǎng)基上產(chǎn)毒量隨時間的延長呈動態(tài)變化，本試驗將PDA、PD、玉米和大米培養(yǎng)基培養(yǎng)時間設為35 d。在0—7 d，PDA和PD培養(yǎng)基中FB1、FB2含量逐漸升高，在第14天達到最大；在0—28 d，玉米和大米培養(yǎng)基中FB1、FB2含量逐漸增加，在第28天達到最大。當培養(yǎng)基中伏馬毒素含量達到最大后，隨著培養(yǎng)時間的繼續(xù)增加，4種培養(yǎng)基中FB1、FB2含量均略微下降。

不同研究表明，F(xiàn).verticillioides的產(chǎn)毒能力與培養(yǎng)基密切相關(guān)［15-16，21］。本試驗中4種培養(yǎng)基均能產(chǎn)生伏馬毒素，但產(chǎn)毒量存在明顯差異。PDA與PD培養(yǎng)基中FB1、FB2含量極低，大米培養(yǎng)基中FB1、FB2含量分別為598.03 mg/kg、284.01mg/kg，玉米培養(yǎng)基中FB1、FB2含量分別為821.08mg/kg、339.50mg/kg，均遠遠高于PDA與PD。

圖3 培養(yǎng)時間對擬輪生鐮孢菌產(chǎn)毒的影響Fig.3 Effect of incubation time on toxin-producing ability of F.verticillioides

2.4 培養(yǎng)溫度對F.verticillioides產(chǎn)毒量的影響

將接種F.verticillioides的玉米培養(yǎng)基分別在20℃、25℃、28℃、30℃、35℃，40%水分含量條件下培養(yǎng)28 d，結(jié)果見圖4。結(jié)果表明：當培養(yǎng)溫度低于28℃時，伏馬毒素產(chǎn)量隨溫度的增加而增加；當培養(yǎng)溫度高于28℃時，伏馬毒素產(chǎn)量隨溫度的增加而降低。本試驗中28℃條件下玉米中FB1和FB2含量最高，分別達到817.08 mg/kg、329.01 mg/kg。因此，本試驗最終選擇28℃作為最佳培養(yǎng)溫度。

2.5 水分含量對F.verticillioides產(chǎn)毒量的影響

將F.verticillioides分別接種在水分含量在20%、30%、40%、50%、60%的玉米培養(yǎng)基，28℃培養(yǎng)28 d，結(jié)果見圖5。結(jié)果表明：水分含量從20%到40%，F(xiàn)B1和FB2產(chǎn)量不斷增加，水分含量為40%時，伏馬毒素含量達到最大，分別為808.21 mg/kg、321.15 mg/kg，當水分含量超過40%時，伏馬毒素含量逐漸下降。因此，最終將培養(yǎng)基水分含量定為40%。

圖4 培養(yǎng)溫度對擬輪生鐮孢菌產(chǎn)毒的影響Fig.4 Effect of incubation tem perature on toxin-producing ability of F.verticillioides

圖5 水分含量對擬輪生鐮孢菌產(chǎn)毒的影響Fig.5 Effect of water content on toxin-producing ability of F.verticillioides

3 討論

F.verticillioides是一類世界性分布的真菌，它不僅可以存在于土壤及動植物體內(nèi)，還可侵染多種重要經(jīng)濟作物，引起苗枯、根腐、莖腐和穗腐等病害［22］，其生長產(chǎn)毒與地域環(huán)境、耕作制度、氣候條件等有關(guān)，不同國家和地區(qū)分布存在明顯差異。關(guān)于玉米致病菌群的研究表明，北美洲以F.verticillioides和禾谷鐮孢菌（F.graminearum）為優(yōu)勢菌株［23］，南美洲則以 F.proliferatum為優(yōu)勢菌菌［24］；我國北方玉米中，F(xiàn).graminearum為主要致病菌，F(xiàn).verticillioides較少［25］。本研究從發(fā)霉玉米中共分離得到14株鐮孢菌，經(jīng)過形態(tài)學和分子生物學鑒定，伏馬毒素產(chǎn)生菌主要為F.verticillioides，占54%，與其他關(guān)于玉米中真菌污染的調(diào)查分析結(jié)果一致［22，26-27］，均表明F.verticillioides能夠引起玉米霉變并產(chǎn)生伏馬毒素的污染。

F.verticillioides產(chǎn)毒量與培養(yǎng)基種類、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時間、水分含量等因素密切相關(guān)。本試驗結(jié)果表明F.verticillioides的最佳產(chǎn)毒條件為玉米培養(yǎng)基，40%水分含量，28℃黑暗條件下培養(yǎng)28 d。隨著培養(yǎng)時間的延長，四種培養(yǎng)基中伏馬毒素產(chǎn)量均呈先增加后下降趨勢，此結(jié)果與李俊霞等［16］研究結(jié)果一致，由此表明F.verticillioides產(chǎn)毒量與菌絲的旺盛生長期相關(guān)，隨著培養(yǎng)時間延長，菌絲逐漸老化，溶氧量降低，同時其他抑制性作用代謝產(chǎn)物增加，造成毒素總量下降。另外，伏馬毒素降解及本身作為碳源被F.verticillioides利用也可能是伏馬毒素含量下降的原因［28］。當培養(yǎng)溫度為20—28℃時，F(xiàn).verticillioides生長迅速，伏馬毒素產(chǎn)量逐漸增加；當培養(yǎng)溫度高于30℃時，F(xiàn).verticillioides生長變緩慢，產(chǎn)毒量逐漸降低，說明較高的培養(yǎng)溫度能夠抑制F.verticillioides產(chǎn)毒，與師雯等［29］研究結(jié)果一致。水分含量也是影響微生物生長的重要因素，當水分含量為20%時，由于培養(yǎng)基表面干化，F(xiàn).verticillioides生長緩慢，造成培養(yǎng)基利用率不高，伏馬毒素產(chǎn)量較低；當培養(yǎng)基水分含量為40%，玉米培養(yǎng)基中菌絲生長迅速，伏馬毒素產(chǎn)量最高；而當水分含量大于40%時，培養(yǎng)基結(jié)塊成團，使培養(yǎng)基溶氧量不足，從而造成菌絲生長不良，不利于F.verticillioides產(chǎn)毒，伏馬毒素的產(chǎn)生量降低。

4 結(jié)論

伏馬毒素在世界范圍內(nèi)廣泛分布，不僅嚴重影響農(nóng)作物品質(zhì)，還對人和動物健康造成潛在的危害。本研究在已有報道的基礎上［30-31］，從發(fā)霉玉米中分離鑒定產(chǎn)伏馬毒素的F.verticillioides，系統(tǒng)地研究了其在不同培養(yǎng)基、溫度、時間、水分含量條件下產(chǎn)生伏馬毒素的量，揭示了伏馬毒素的產(chǎn)生規(guī)律，對F.verticillioides和伏馬毒素污染防控具有重要意義。

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Isolation and identification of fumonisin-producing strains from maize and research on their toxin-producing conditions

GUOWen-bo，SHEN Yuan-yuan，YANG Jun-hua，F(xiàn)AN Kai，ZHAO Zhi-hui，HAN Zheng*
（Institute of Agro-Food Quality Standards and Testing Technology，Shanghai Key Laboratory of Protected Horticultural Technology，Shanghai Service Platform of Agro-Products Quality and Safety Evaluation Technology，Shanghai Engineering Research Center of Agro-Products Quality and Safety，Shanghai Academy of Agricultural Sciences，Shanghai201403，China）

To isolate and identify the fungi producing fumonisins B1 and B2（FB1 and FB1）from moldy maize and investigate the conditions（medium，temperature，incubation time and water content）for the fungi to produce fumonisins，the extract ofmoldy maize were inoculated on PDA medium，and the toxigenic strains were isolated by plate streak approach.The species of the strains were identified respectively by morphologic observation and rDNA-ITS analysis，then the strains were inoculated on different media and cultured under different temperatures，incubation times and water contents，and finally the FB1 and FB2 were quantitatively determined by high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry（HPLC-MS/MS）.The BLAST showed that the isolated strains and the Fusarium verticillioides KC709665.1，KR020684.1 and KR052812.1 in the NCBIwere 100%in DNA sequence homology，demonstrating the isolated strain to be F.verticillioides.The inoculation experiment showed that the optimal conditions for fumonisins production were 40%water content and maizemedium at28℃ in dark for 4 weeks，and the FB1 and FB2 yields could be up to 821.08 mg/kg and 339.50 mg/kg respectively.The fumonisin-producing strains in the testedmaizeweremainly F.verticillioides，and the fumonisins production was closely related to such environmental factors as culturemedium，temperature，time and water content.

Fumonisin；Fusarium verticillioides；Isolation；Toxin-producing conditions；Maize

Q93-331

A

1000-3924（2017）06-078-07

2016-09-08

上海市科技興農(nóng)重點攻關(guān)項目［滬農(nóng)科攻字（2015）第6-3-2號］

郭文博（1988—），男，碩士，研究實習員，研究方向：農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全。E-mail：guo1103bo＠126.com，Tel：021-67131637

*通信作者：韓錚（1983—），男，博士，研究員，研究方向：農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全。E-mail：hanzheng_ok＠163.com，Tel：021-37196975

程智強）