羅成群

（重慶市涪陵區(qū)焦石鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，重慶 408000）

不同方法檢測布魯氏菌抗體的比較分析

羅成群

（重慶市涪陵區(qū)焦石鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，重慶 408000）

隨機采集重慶市涪陵區(qū)各鄉(xiāng)鎮(zhèn)的規(guī)模養(yǎng)殖戶和散養(yǎng)農(nóng)戶14085份牛、羊血清，采用RBPT、SAT和ELISA 方法對布病非免疫抗體進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示，采用RBPT方法檢測出陽性81份，陽性率為0.57%，SAT檢測出陽性78份，陽性率為0.55%，ELISA檢測出陽性73份，陽性率為0.52%。結(jié)果表明SAT和ELISA檢測方法具有較高的敏感性，在實際工作中，可采用RBPT方法對布病進(jìn)行初篩，SAT和ELISA檢測方法進(jìn)行確診，本研究為本地區(qū)牛、羊布病防控、凈化工作提供了依據(jù)。

布魯氏菌 檢測方法 RBPT SAT ELISA

布魯氏菌病（brucellosis）以下簡稱“布病”，是由布魯氏菌引起的一種廣泛分布于世界各地的人畜共患的傳染病，以生殖器官和胎膜發(fā)炎、母畜流產(chǎn)、不孕和公畜睪丸炎為主要臨床特征。據(jù)報道，在全世界現(xiàn)有的200多國家地區(qū)中，有布病報到的就有170個，30多個國家尚未報告有布病發(fā)生，還有16個國家和地區(qū)宣布沒有或已經(jīng)控制布病，而美國目前人間發(fā)病率仍在1/10萬以上，對畜牧業(yè)生產(chǎn)和人類健康造成了很大危害。

近年來，國內(nèi)外對布病系統(tǒng)性的研究有近150年的歷史，其間開發(fā)了許多布病體外和體內(nèi)診斷方法，這些診斷方法服務(wù)于不同的應(yīng)用目的，例如：證實疫情發(fā)生、全國性普查、確診、國際貿(mào)易檢測以及“無布病”地區(qū)的布病監(jiān)測等等，如何選擇診斷策略取決于布病的流行狀況及檢測的目的。目前常用的檢測方法有：平板凝集試驗（PAT）、虎紅平板凝集試驗（RBPT）、補體結(jié)合試驗（CFT）、試管凝集試驗（SAT）、酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）、聚合酶鏈反應(yīng)試驗（PCR）等。

本研究采用虎紅平板凝集試驗（RBPT）、試管凝集試驗（SAT）、酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）等常用的血清學(xué)檢測方法對布病非免疫抗體進(jìn)行檢測，以明確不同方法檢測的敏感性和特異性，以便以后針對性地選擇使用檢測方法提供依據(jù)，從而為我區(qū)布病的防控、凈化工作提供技術(shù)支撐。

1 材料與方法

1.1 材料

（1）試驗試劑 布病虎紅平板凝集抗原、布病陽性血清、布病試管凝集抗原，青島易邦生物工程有限公司生產(chǎn)：布病競爭酶聯(lián)免疫吸附試驗抗體檢測試劑盒，哈爾濱平河生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品。

（2）血清來源14085份血清均為2014年～2016年5月采自重慶市涪陵區(qū)各鄉(xiāng)鎮(zhèn)規(guī)模養(yǎng)殖場和散養(yǎng)農(nóng)戶。

1.2 方法

（1）虎紅平板凝集試驗（RBPT）、試管凝集試驗（SAT）

（2）競爭酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）按照試劑盒說明書進(jìn)行

2 試驗結(jié)果

2.1 布病陽性檢測率

14085份牛、羊血清樣品，采用RBPT方法檢測出陽性81份，陽性率為0.57%，SAT方法檢測出陽性78份，陽性率為0.55%，ELISA方法檢測出陽性73份，陽性率為0.52%。具體監(jiān)測結(jié)果見表1。

表1 不同檢測方法對布病的陽性檢測率

2.2 不同檢測方法的符合率

14085份血清樣品，采用RBPT、SAT、競爭ELISA方法檢測，采用RBPT方法檢測出陽性81份；SAT檢測出陽性78份，其中3份為RBPT檢測的陽性血清樣品；競爭ELISA檢測出陽性73份，其中8份為RBPT檢測的陽性血清樣品，5份為SAT檢測的陽性血清樣品。結(jié)果顯示SAT和RBPT檢測方法的結(jié)果符合率為96.3%，競爭ELISAR和BPT結(jié)果符合率為90.1%，競爭ELISA和SAT結(jié)果符合率為93.59%。

3 討論

本試驗通過對14085份牛、羊血清布病非免疫抗體進(jìn)行檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)三種檢測方法中，ELISA敏感性最高，而SAT檢測方法的敏感性也優(yōu)于PBPT。

血清學(xué)試驗：主要檢測血清或乳中的布魯氏菌抗體。平板凝集試驗（PAT）是布病血清學(xué)診斷的常規(guī)方法之一，通常用于布病普查的初篩，但PAT法有時可出現(xiàn)非特異性凝集，在基層獸醫(yī)檢測中已經(jīng)不適用PAT方法；目前RBPT是許多國家布病普查的常規(guī)方法之一，RBPT法檢出率與PAT基本一致，略低于SAT檢查感染動物血清的陽性率，但一般來說，RBPT 并不能與 SAT、PAT、補體結(jié)合試驗（CFT）等相互替代，最好采取綜合診斷，主要用于布病早期診斷。

SAT一直是許多國家布病診斷的常規(guī)血清學(xué)方法，我國家畜布病檢測標(biāo)準(zhǔn)就是用SAT作為復(fù)核診斷方法。但單獨應(yīng)用SAT，可能出現(xiàn)假陽性或假陰性反應(yīng)，同時并不是所有感染動物都出現(xiàn)具有診斷意義的抗體水平，因而易造成誤診和漏診。

ELISA是目前比較通用的血清學(xué)檢測方法，特異性、敏感性強，是國際貿(mào)易指定試驗。實驗證實ELISA試驗較SAT敏感性高10～100倍，是布病診斷中不可缺少的方法之一。

在實際操作過程中，RBPT操作簡便并且用時短，SAT出現(xiàn)結(jié)果時間較長，是實驗員肉眼觀察判定結(jié)果，具有很大的主觀性，ELISA方法監(jiān)測布病，操作便捷，敏感性高，結(jié)果更為準(zhǔn)確，因此在實際檢測過程中應(yīng)把三種方法結(jié)合起來運用，互補優(yōu)劣。先用RBPT篩選，對疑似陽性樣品再用SAT以及ELISA復(fù)檢進(jìn)行確診，從而達(dá)到布病防控和凈化的目的。

[1] 黎銀軍.我國布魯氏菌病時空分布及風(fēng)險預(yù)測研究[D].中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院，2013.