凌佼佼，楊芳，洪斌，邵杰

(湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬人民醫(yī)院眼科，湖北 十堰 442000)

血清及房水中VEGF、IL-6與新生血管性青光眼的相關(guān)性

凌佼佼，楊芳，洪斌，邵杰

(湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬人民醫(yī)院眼科，湖北 十堰 442000)

目的探討血清及房水中血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)與新生血管性青光眼(NVG)的關(guān)系。方法選擇2013年2月至2016年10月期間在湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬人民醫(yī)院眼科接受治療的NVG患者22眼為觀察組，同期住院原發(fā)性慢性閉角型青光眼患者25眼為對照組，同期住院白內(nèi)障患者25眼為正常組，比較三組患者血清及房水中VEGF、IL-6水平。結(jié)果觀察組患者血清與房水中VEGF、IL-6水平分別為(545.41±156.49)ng/mL、(292.23±23.65)pg/mL，明顯高于對照組的(323.21±52.32)ng/mL、(105.23±15.21)pg/mL與正常組的(175.31±19.56)ng/mL、(88.23±12.78)pg/mL，而對照組患者血清與房水中VEGF、IL-6水平明顯高于正常組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；觀察組患者僅房水中VEGF與IL-6呈顯著正相關(guān)(r=0.629，P=0.007)。結(jié)論NVG患者血清及房水中VEGF、IL-6均顯著升高，但僅房水中VEGF與IL-6呈顯著正相關(guān)，高水平的VEGF、IL-6相互作用，能夠促進(jìn)新生血管的產(chǎn)生，進(jìn)而導(dǎo)致NVG的發(fā)生。

新生血管性青光眼；血管內(nèi)皮生長因子；白細(xì)胞介素-6

新生血管性青光眼(neovascular glaucoma，NVG)是一種以難以控制的高眼壓伴劇烈眼痛為主要臨床特征的眼科疾病，該病發(fā)病原因較為復(fù)雜，具有難治性及頑固性的特點(diǎn)，致盲性較高，給患者身心帶來嚴(yán)重危害[1]。NVG的病理生理學(xué)改變主要包括虹膜的新生血管以及房角的纖維血管膜形成導(dǎo)致房角粘連、房水外流受阻、眼內(nèi)壓增高。該病多繼發(fā)于視網(wǎng)膜靜脈阻塞、糖尿病視網(wǎng)膜病變、眼缺血綜合征等眼后段廣泛缺血[2]。近年來隨著免疫學(xué)、分子生物學(xué)的發(fā)展，對該病的認(rèn)識更加深入，目前認(rèn)為NVG的發(fā)生發(fā)展與血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)、白細(xì)胞介素-6(interleukin，IL-6)等細(xì)胞因子及受體之間存在著較為密切的關(guān)系[3-4]。本研究通過檢測NVG患者血清及房水中VEGF、IL-6的含量，探討其在NVG發(fā)生與發(fā)展中的作用，現(xiàn)報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年2月至2016年10月期間湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬人民醫(yī)院眼科接受治療的NVG患者22例22眼為觀察組，其中男性10例10眼，女性12例12眼；年齡28～69歲，平均(42.3±3.9)歲。上述患者經(jīng)裂隙燈、眼壓計(jì)、前房角鏡等檢查確診NVG，且眼壓均在21 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)以上，給予常規(guī)降壓治療無效。原發(fā)疾病為糖尿病視網(wǎng)膜病變8例，視網(wǎng)膜中央靜脈阻塞7例，視網(wǎng)膜靜脈周圍炎3例，眼缺血綜合征2例，其他2例。選擇同期住院治療的原發(fā)性慢性閉角型青光眼患者25例25眼為對照組，其中男性12例12眼，女性13例13眼；年齡27～71歲，平均(45.3±3.7)歲。給予裂隙燈顯微鏡、前房角鏡、眼壓計(jì)等檢查確診。同期住院治療的白內(nèi)障患者25例25眼為正常組，其中男性9例9眼，女性16例16眼；年齡33～73歲，平均(48.3±3.9)歲，給予裂隙燈顯微鏡、前房角鏡、眼壓計(jì)等檢查確診。上述所有患者均排除合并心肺等重大臟器疾病、嚴(yán)重肝腎功能不全、腫瘤、血液系統(tǒng)疾病、年齡相關(guān)黃斑變性、既往眼部手術(shù)史等。本研究經(jīng)我院醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，患者及家屬對研究均知情同意，簽署知情同意書。三組患者在年齡、性別、基礎(chǔ)疾病等方面比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集

1.2.1.1 血清標(biāo)本采集 患者入院后抽取清晨空腹肘靜脈血3 mL入促凝管，在4℃低溫條件下于離心機(jī)內(nèi)以2 000 r/min的轉(zhuǎn)速離心10 min，取血清0.3 mL，置無菌Eppendof管內(nèi)并標(biāo)記，-20℃低溫冰箱凍存?zhèn)錅y。

1.2.1.2 房水標(biāo)本采集 所有患者給予眼科手術(shù)治療，并于術(shù)中采集房水標(biāo)本，利用25#注射器針頭在距離角膜緣內(nèi)1 mm處穿刺前房，抽取房水0.2 mL，置無菌Eppendof管內(nèi)標(biāo)記，-70℃超低溫冰箱凍存?zhèn)錅y。操作中注意避免觸及虹膜、晶狀體、角膜內(nèi)皮，同時(shí)避免反射性滲血。

1.2.2 試劑、儀器及檢測方法人VEGF檢測所用ELISA試劑盒采用美生物工程有限公司生產(chǎn)，人IL-6檢測所用ELISA試劑盒采用美國Genzyme公司生產(chǎn)，檢測儀器為奧地利ClinBio128型酶標(biāo)儀，檢測方法為酶聯(lián)免疫吸附法。根據(jù)反應(yīng)后標(biāo)本在450 nm吸光度并結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線得出濃度值，VEGF單位為ng/mL，IL-6單位為pg/mL。所有設(shè)備操作均嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x-±s)表示，兩組均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)，多組均數(shù)比較采用方差分析，兩變量相關(guān)性采用直線相關(guān)分析，均以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 三組患者血清中VEGF、IL-6水平比較 觀察組患者血清中VEGF、IL-6水平均明顯高于對照組與正常組，對照組患者血清中VEGF、IL-6水平明顯高于正常組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表1。

表1 三組患者血清中VEGF、IL-6水平比較(±s)

表1 三組患者血清中VEGF、IL-6水平比較(±s)

注：與對照組比較，at=6.695 5，dt=32.627 4，P＜0.05；與正常組比較，bt=11.738 7，ct=13.239 2，et=37.402，ft=4.278 6，P＜0.05。

組別 例數(shù)VEGF(ng/mL)IL-6(pg/mL)觀察組對照組正常組F值P值22 25 25 545.41±156.49ab 323.21±52.32c 175.31±19.56 94.476 79 0.000 0 292.23±23.65de 105.23±15.21f 88.23±12.78 955.319 6 0.000 0

2.2 三組患者房水中VEGF、IL-6水平比較 觀察組患者房水中VEGF、IL-6水平均明顯著高于對照組與正常組，對照組房水VEGF、IL-6水平高于正常組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表2。

表2 三組患者房水中VEGF、IL-6水平比較(s)

注：與對照組比較，at=66.444 8，dt=45.580 9，P＜0.05；與正常組比較，bt=81.382 8，ct=21.577 5，et=45.580 9，ft=13.171 5，P＜0.05。

組別 例數(shù)VEGF(ng/mL)IL-6(pg/mL)觀察組對照組正常組F值P值22 25 25 1 336.85±70.12ab 312.26±30.25c 165.28±15.65 4 919.134 0.000 0 691.56±52.32de 169.58±21.96f 92.11±19.56 2 151.094 0.000 0

2.3 血清及房水中VEGF與IL-6水平的相關(guān)性 觀察組患者血清及房水中VEGF與IL-6水平呈正相關(guān)(r=0.629、0.392，P＜0.05)；對照組與正常組患者血清及房水中的VEGF與IL-6水平無明顯相關(guān)性(r=0.089、0.068，P＞0.05；r=0.076、0.053，P＞0.05)。

3 討 論

NVG屬于繼發(fā)性青光眼的一種，該病主要特征即為虹膜表面、房角新生血管形成，同時(shí)伴有纖維血管膜形成，從而導(dǎo)致虹膜變紅。隨著病情進(jìn)展，小梁網(wǎng)可被新生的血管膜遮蓋并堵塞，進(jìn)而導(dǎo)致眼壓增高，繼發(fā)性開角型青光眼便由此發(fā)生。至疾病的晚期，由于新生纖維血管膜的收縮，可造成虹膜前粘連、房角閉鎖，進(jìn)而導(dǎo)致繼發(fā)性閉角型青光眼的發(fā)生[5]。NVG的主要病因，目前認(rèn)為與患者的長期眼內(nèi)的慢性炎癥以及高眼壓密切相關(guān)，上述因素所產(chǎn)生的刺激可導(dǎo)致視網(wǎng)膜循環(huán)障礙甚至缺血缺氧，而缺血缺氧則可導(dǎo)致大量細(xì)胞因子的釋放，從而使細(xì)胞因子之間的平衡被打破，進(jìn)一步促進(jìn)新生血管的生長[6]，周而復(fù)始，惡性循環(huán)，病情加重。一般來講，NVG病情多較重，且治療起來較為頑固。

VEGF又被稱為血管調(diào)理素，在目前所發(fā)現(xiàn)的內(nèi)皮生長因子中，VEGF是唯一能夠特異的對血管產(chǎn)生作用的一種[7]。研究發(fā)現(xiàn)，較高濃度的VEGF能夠誘導(dǎo)受體的基因轉(zhuǎn)錄，而其受體則在新生血管上的分布更為密集，這也就是說，VEGF能夠特異性的作用于增殖狀態(tài)下的血管內(nèi)皮細(xì)胞，同時(shí)也是目前發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)、最專一的能夠刺激內(nèi)皮細(xì)胞增生的細(xì)胞因子[8]。血管異常增殖、缺血缺氧可誘導(dǎo)VEGF高表達(dá)。研究顯示，NVG的發(fā)生與視網(wǎng)膜內(nèi)VEGF的mRNA表達(dá)增加密切相關(guān)，同時(shí)與眼內(nèi)VEGF濃度增高也存在一定關(guān)聯(lián)[9]。本研究顯示，觀察組房水VEGF明顯增高，這一結(jié)果表明，房水中異常增多的VEGF在NVG的發(fā)生過程中可能發(fā)揮了重要作用。另有研究報(bào)道，VEGF的mRNA與蛋白水平于新生血管形成之前表現(xiàn)為增高，而在新生血管退變以后則表現(xiàn)為下降，且新生血管的形成部位多在VEGF的高表達(dá)區(qū)域[10]。本研究顯示，對照組房水VEGF濃度雖然高于正常組，但低于觀察組，說明增高的眼壓可能是誘導(dǎo)眼內(nèi)VEGF濃度增高的一個(gè)重要因素。

IL-6可作為炎癥介質(zhì)參與炎癥反應(yīng)，也能夠?qū)υ煅?xì)胞的生長、分化等產(chǎn)生刺激作用。研究提示，IL-6可因低氧誘導(dǎo)產(chǎn)生，這一特點(diǎn)與VEGF相類似，同時(shí)也可作為新生血管因子在體內(nèi)發(fā)揮作用[11]。IL-6在NVG的發(fā)病機(jī)制中參與新生血管免疫球蛋白的形成。本研究顯示，觀察組IL-6明顯增高，說明IL-6在新生血管、繼發(fā)性青光眼的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮了一定的作用，同時(shí)也提示NVG的發(fā)病過程中有炎癥及免疫機(jī)制的參與。本研究通過對VEGF、IL-6兩項(xiàng)指標(biāo)的直線相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)，觀察組房水VEGF水平與IL-6水平呈顯著正相關(guān)。由此可推測，在NVG發(fā)生發(fā)展過程中，房水VEGF與IL-6可能存在著相互促進(jìn)的作用。IL-6誘導(dǎo)新生血管的生成可通過上調(diào)本VEGF的表達(dá)間接發(fā)揮作用。本研究中觀察組血清VEGF、IL-6水平均高于對照組與正常組，這一結(jié)果的出現(xiàn)可能與入選患者中糖尿病患者居多有關(guān)。2型糖尿病患者血清中VEGF、IL-6含量顯著高于正常人[12]。

綜上所述，NVG患者血清及房水中VEGF、IL-6均顯著升高，高水平的VEGF、IL-6可促進(jìn)新生血管的產(chǎn)生，其病因?qū)W、免疫學(xué)、分子生物學(xué)的研究對臨床診斷具有重要的價(jià)值。

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Relationship between serum and aqueous humor VEGF,IL-6 and neovascular glaucoma.

LING Jiao-jiao,YANG Fang,HONG Bin,SHAO Jie.Department of Ophthalmology,People's Hospital Affiliated to Hubei University of Medicine,Shiyan 442000,Hubei,CHINA

ObjectiveTo discuss the relationship of serum and aqueous humor vascular endothelial growth factor(VEGF)and IL-6 to neovascular glaucoma(NVG).MethodsA total of 22 patients with NVG,who admitted to Department of Ophthalmology of People's Hospital Affiliated to Hubei University of Medicine from February 2013 to October 2016,were selected as the observation group.Meantime,25 patients with chronic primary angle-closure glaucoma and 25 patients with cataract were respectively enrolled as the control group and the normal group.The levels of VEGFand IL-6 in serum and aqueous humor of the three groups were contrasted and analyzed.ResultsThe levels of VEGF and IL-6 in serum and aqueous humor in the observation group were(545.41±156.49)ng/mL and(292.23±23.65)pg/mL,respectively,which were significantly higher than(323.21±52.32)ng/mL and(105.23±15.21)pg/mL in the control group and(175.31±19.56)ng/mL and(88.23±12.78)pg/mL in the normal group(P＜0.05);the levels of VEGF and IL-6 in serum and aqueous humor in the control group were significantly higher than the normal group(P＜0.05).There was a significantly positive correlation between VEGF and IL-6 in aqueous humor in the observation group(r=0.629,P=0.007).ConclusionVEGF and IL-6 in serum and aqueous humor in patients with NVG are significantly increased,and there is a significantly positive correlation between VEGF and IL-6 in aqueous humor.The interaction of high levels of VEGF and IL-6 can promote angiogenesis,and lead to the occurrence of NVG.

楊芳。E-mail：18372650399@139.com

Neovascular glaucoma(NVG);Vascular endothelial growth factor(VEGF);Interleukin-6(IL-6)

R775

A

1003—6350（2017）23—3869—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2017.23.027

2017-05-23)