劉立軒

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宮血凈顆粒中藥物薄層色譜法鑒別

劉立軒

目的：探討宮血凈顆粒中藥物的質量標準。方法：采用薄層色譜(TLC)法鑒別宮血凈顆粒中的黃芪、茜草、枳殼、益母草四味中藥。結果：TLC法可以鑒別出黃芪、茜草、枳殼、益母草的特征斑點，專屬性強。結論：TLC結果可靠，簡便易行，可作為宮血凈顆粒的質量控制依據(jù)。

宮血凈顆粒； 薄層色譜法； 黃芪； 茜草； 枳殼； 益母草

宮血凈顆粒為醫(yī)院制劑由北劉寄奴、續(xù)斷、黃芪、益母草、馬齒莧、茜草等九味藥物組成，主要用于月經(jīng)不調(diào)，月經(jīng)過多。陳梅等[1]曾報道宮血凈顆粒治療月經(jīng)過多56例，療效較好。本實驗采用TLC法鑒別宮血凈顆粒中的黃芪、茜草、枳殼、益母草四味中藥，結果表明該方法操作簡便易行、重復性好，可作為宮血凈顆粒質量控制的重要依據(jù)，現(xiàn)報告如下。

1 儀器與材料

CQ-939全自動薄層制板機(北京恒奧德儀器儀表有限公司)；WFH-201紫外投射儀(上海精科)；KZW-G型儀表恒溫不銹鋼水浴鍋(上海)；SB-3200DTS超聲波清洗機(寧波新芝)；梅特勒電子天平(萬分子一)；薄層層析硅膠G(青島裕寶精細化工有限公司)；大葉茜草素對照品(批號為：110884-200604)、黃芪甲苷對照品(批號為：110781-201314)、茜草對照藥材(批號為：1049-200301)、柚皮苷(批號為：110722-201111)、鹽酸水蘇堿對照品(批號為：110712-201111)均購自中國藥品生物制品檢定所；水為純凈水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 黃芪的鑒別[2-3](1)供試品溶液的制備：取宮血凈顆粒三批各5g，研細，加50ml水使溶解，用水飽和正丁醇分3次提取，每次30ml，合并3次正丁醇提取液，再用1%氫氧化鈉溶液每次50ml分2次提取，棄去氫氧化鈉提取液，然后再用正丁醇飽和的水每次50ml洗滌2次，棄去水液，將正丁醇液用水浴蒸干，再加甲醇1ml使殘渣溶解，制成供試品溶液。(2)對照品溶液的制備：用甲醇溶解黃芪甲苷對照品制成1mg/ml的對照品溶液。(3)陰性對照溶液的制備：按處方比例以宮血凈顆粒制備工藝制成不含黃芪的陰性樣品，以2.1.1方法制成陰性對照溶液。

2.1.1 色譜條件 薄層板：以0.3%羧甲基纖維素鈉為黏合劑制備厚度0.5mm的硅膠G板，于105℃活化30min。展開劑：氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水(10：20：11：5)10℃以下放置的下層溶液。

2.1.2 鑒別方法 照薄層色譜法(《中國藥典》2010版一部附錄VIB)試驗，取供試品溶液、對照品溶液、陰性對照溶液各10μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，展開，取出，涼干，噴以10%硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜在與對照品色譜相應的位置上顯相同顏色的斑點；置紫外光燈(365nm)下檢視，現(xiàn)相同的橙黃色熒光斑點。見圖1。

2.2 茜草的鑒別[2-3](1)供試品溶液、茜草對照藥材溶液的制備:取宮血凈顆粒3批各10g，研細，加甲醇40ml，超聲處理30min，濾過，將濾液蒸干，用1ml甲醇使殘渣溶解，制成供試品溶液。取茜草對照藥材3g，加甲醇20ml，按供試品溶液同法制成對照藥材溶液。(2)對照品溶液的制備：用甲醇溶解大葉茜草素對照品制成2mg/ml的對照品溶液。(3)陰性對照溶液的制備：按處方比例以宮血凈顆粒制備工藝制成不含茜草的陰性樣品，以2.2.1方法制成陰性對照溶液。

2.2.1 色譜條件 薄層板：以0.3%羧甲基纖維素鈉為黏合劑制備厚度0.5mm的硅膠G板，于105℃活化30min。展開劑：石油醚(60℃～90℃)-丙酮(4：1)。

2.2.2 鑒別方法 照薄層色譜法(《中國藥典》2010版一部附錄VIB)試驗，取供試品溶液、對照品溶液、陰性對照溶液各10μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，展開，取出，涼干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜在與對照藥材和對照品色譜相應的位置上顯相同顏色的熒光斑點。見圖2。

2.3 枳殼的鑒別[2-3](1)供試品溶液的制備：取宮血凈顆粒3批各10g，研細，加30ml水使溶解，置分液漏斗中用乙醚萃取2次，每次25ml，棄去乙醚液，水層再用乙酸乙酯每次30ml提取2次，將2次乙酸乙酯提取液合并后置水浴蒸干，加甲醇1ml使殘渣溶解，制成供試品溶液。(2)對照品溶液的制備：用甲醇溶解柚皮苷對照品制成1mg/ml的對照品溶液。(3)陰性對照溶液的制備：按處方比例以宮血凈顆粒制備工藝制成不含枳殼的陰性樣品，以2.3.1方法制成陰性對照溶液。

2.3.1 色譜條件 薄層板：以0.3%羧甲基纖維素鈉為黏合劑制備厚度0.5mm的硅膠G板，于105℃活化30min。展開劑：甲苯-乙酸乙酯-丙酮-水-甲酸 (2：2.5：5：0.5：0.5)。

2.3.2 鑒別方法 照薄層色譜法(《中國藥典》2010版一部附錄VIB)試驗，取供試品溶液和陰性對照溶液各15μl，取對照品溶液10μl，于同一硅膠G薄層板上點樣，待充分展開后，取出，涼干，噴以2%三氯化鋁甲醇溶液，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜在與對照品色譜相應的位置上顯相同顏色的熒光斑點。見圖3。

2.4 益母草的鑒別[2-3](1)供試品溶液的制備：取宮血凈顆粒3批各15g，研細，加50ml水使溶解，用2mol/l鹽酸調(diào)節(jié)pH值至1～2，酸液通過已處理好的強酸性陽離子交換樹脂(內(nèi)徑10mmm，柱高20cm)，先以水洗脫至流出液近無色，棄去水洗液，再以100ml乙醇-氨水(8：2)混合溶液洗脫，收集洗脫液，將洗脫液用水浴蒸干，加乙醇1ml使殘渣溶解，制成供試品溶液。(2)對照品溶液的制備：用甲醇溶解鹽酸水蘇堿對照品制成5mg/ml的對照品溶液。(3)陰性對照溶液的制備：按處方比例以宮血凈顆粒制備工藝制成不含益母草的陰性樣品，以2.4.1方法制成陰性對照溶液。

2.4.1 色譜條件 薄層板：以0.3%羧甲基纖維素鈉為黏合劑制備厚度0.5m的硅膠G板，于105℃活化30min。展開劑：丙酮-無水乙醇-鹽酸(10：6：1)。

2.4.2 鑒別方法 照薄層色譜法(《中國藥典》2010版一部附錄VIB)試驗，取供試品溶液和陰性對照溶液各20μl，取對照品溶液10μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，展開，取出，涼干，噴以稀碘化鉍鉀試液，加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜在與對照品色譜相應的位置上顯相同顏色的斑點。見圖4。

1、2、3為樣品，4 黃芪甲苷對照品，5 陰性對照 1、2、3為樣品，4茜草對照藥材，5大葉茜草素對照品，6陰性對照

1 、2、3為樣品，4柚皮苷對照品，5陰性對照 1、2、3樣品，4鹽酸水蘇堿對照品，5陰性對照

3 討論

宮血凈顆粒由北劉寄奴、續(xù)斷、黃芪、益母草、馬齒莧、茜草等九味藥物組成，方中北劉寄奴活血止血為君藥，益母草活血養(yǎng)血祛瘀，馬齒莧涼血散熱，貫眾炭涼血止血，黃芪補中益氣，川續(xù)斷補血生血。諸藥合用，共奏清熱涼血，化瘀止血，益氣扶正的作用。本品組方是在傳統(tǒng)中醫(yī)藥理論指導下，根據(jù)“宮血”的發(fā)病機制及演變規(guī)律，既能快速止血以治標，又能益氣扶正、固沖攝血以治本，從而有效的改善機體狀態(tài)，增強了機體的抵抗力，使臟腑功能得到有效調(diào)節(jié)，本固血充則月經(jīng)自調(diào)，使瘀血去，新血生而歸經(jīng)，以達止血之目的。

根據(jù)方中各藥材有效成分及制備工藝，結合查閱相關文獻報道，按照《中國藥典》2010年版一部附錄VI薄層色譜法，對宮血凈顆粒進行了薄層鑒別研究。經(jīng)過鑒別研究，結果表明，黃芪、茜草、枳殼、益母草采用TLC法專屬性、重復性良好，方法簡便可行,可以作為宮血精顆粒質量控制的指標。另外，對方中北劉寄奴、馬齒莧、綿馬貫眾、仙鶴草也按藥典方法進行了薄層鑒別的研究[2]，但經(jīng)過反復試驗，分離情況均不太理想，不能有效展開，Rf值偏小，重現(xiàn)性、專屬性較差，還需進一步研究，暫時不適合作為該制劑質量控制的指標。

[1] 陳梅，楊援朝，鄭敏沛.宮血凈顆粒治療月經(jīng)過多56例[J].陜西中醫(yī)，2009,30(7)：775.

[2] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S]．北京：化學工業(yè)出版社，2010.

[3] 呂武清，龍新華．中成藥中的藥材薄層色譜鑒別[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1997：36.

寧夏職業(yè)技術學院 生物與制藥系，寧夏 銀川 750021

劉立軒(1978-)，男，講師，大學。

10.14126/j.cnki.1008-7044.2017.01.038

R 917

A

1008-7044(2017)01-0088-03

2016-07-28)