岳 玲，吳海紅，李 丹

（遼寧省農(nóng)業(yè)科學(xué)院花卉研究所，遼寧沈陽 110161）

龍腦樟組織培養(yǎng)技術(shù)研究

岳 玲，吳海紅，李 丹

（遼寧省農(nóng)業(yè)科學(xué)院花卉研究所，遼寧沈陽 110161）

以龍腦樟當(dāng)年生新枝帶芽莖段為外植體材料進(jìn)行組織培養(yǎng)研究，結(jié)果表明：適宜的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為Ms＋6-BA 2.0mg／L＋NAA 0.1mg／L，適宜的愈傷組織增殖培養(yǎng)基為Ms＋6-BA 2.0mg／L＋NAA 0.2 mg／L，適宜的生根培養(yǎng)基為1／2 Ms＋NAA 0.4 mg／L＋I(xiàn)BA 0.1 mg／L，適宜的移栽基質(zhì)為純泥炭，移栽成活率可達(dá)100%，且生長(zhǎng)狀況最好。

龍腦樟；組織培養(yǎng)

龍腦樟（Cinnamomum camphora）屬樟科樟屬的一個(gè)種內(nèi)變異品種，為常綠喬木，喜溫暖濕潤(rùn)氣候，對(duì)土壤要求不嚴(yán)，較耐水濕，但不耐干旱、瘠薄和鹽堿土。龍腦樟樹葉是冰片的天然植物資源，冰片具抗炎、抗心肌缺血、抗菌、止疼、防腐等作用，亦是一種有效的透皮促進(jìn)劑［1］。現(xiàn)階段，我國(guó)對(duì)龍腦樟的開發(fā)利用也多以提取精油為主，長(zhǎng)期以來的過度采伐勢(shì)導(dǎo)致其資源的嚴(yán)重破壞，尤其是優(yōu)樹資源趨于枯竭［2］。目前，龍腦樟的繁育多采用播種繁殖或扦插育苗，但種子繁殖存在繁殖系數(shù)低、且易出現(xiàn)性狀分離、后代個(gè)體間差異大及母樹的優(yōu)良性狀難以保持等缺點(diǎn)、而扦插繁殖容易使其品質(zhì)變差［3］。因此，對(duì)龍腦樟的組織培養(yǎng)研究就顯得格外引人注目，本試驗(yàn)開展龍腦樟的組織培養(yǎng)技術(shù)研究，旨在建立高效的龍腦樟繁殖再生體系，為龍腦樟規(guī)?；a(chǎn)提供理論依據(jù)和技術(shù)支撐。

1 材料與方法

1.1 外植體材料選擇及處理

試驗(yàn)材料為栽植在遼寧省農(nóng)業(yè)科學(xué)院花卉所試驗(yàn)基地溫室中的盆栽龍腦樟。2016年4月選取生長(zhǎng)勢(shì)旺盛、強(qiáng)壯、無病蟲害的龍腦樟植株，以當(dāng)年生新生帶芽莖段為外植體。將外植體用洗衣粉浸泡，牙刷刷洗，流水沖洗1～2 h，剪成每個(gè)莖段帶有1個(gè)腋芽的小段。在超凈工作臺(tái)上用75%乙醇將外植體浸泡30 s，再用0.1%的氯化汞溶液滅菌5 min，最后用無菌水沖洗3～5次后備用。在無菌培養(yǎng)皿上將莖段切成1 cm左右的小段接種在芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中。培養(yǎng)室溫度為25±2℃；相對(duì)濕度60%～70%；光照強(qiáng)度2 000～3 000 lx；每天光照時(shí)間10～12 h。

1.2 培養(yǎng)基選擇

1.2.1 芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基

以Ms為基本培養(yǎng)基，分別添加6-BA 0.5、1.0、2.0 mg／L和 NAA 0.1、0.5、1.0 mg／L濃度的激素，設(shè)9個(gè)處理，每個(gè)處理培養(yǎng)基均加入蔗糖30 g／L，瓊脂5 g／L，pH值調(diào)為5.8，每個(gè)處理接種20瓶。

1.2.2 愈傷增殖和再分化培養(yǎng)基

以Ms作為基本培養(yǎng)基，分別添加6-BA 1.0、2.0、3.0 mg／L和 NAA 0.05、0.1、0.2 mg／L濃度的激素，設(shè)9個(gè)處理，每個(gè)處理培養(yǎng)基均加入蔗糖30 g／L，瓊脂5 g／L，pH值調(diào)為5.8，每個(gè)處理接種20瓶。

1.2.3 生根培養(yǎng)基

以1／2MS為基本培養(yǎng)基，NAA的濃度為0.1、0.2、0.4 mg／L和 IBA 0、0.1、0.2 mg／L，設(shè) 9個(gè)處理，每個(gè)處理培養(yǎng)基均加入蔗糖30 g／L，瓊脂5 g／L，pH值調(diào)為5.8，每個(gè)處理接種20瓶。

1.3 移栽基質(zhì)選擇

選擇生根4～6條、葉片5～7片的組培苗進(jìn)行移栽。移栽前先打開瓶蓋煉苗7 d后，再用鑷子將小苗取出用自來水沖洗干凈。移栽基質(zhì)選用草炭、珍珠巖、泥炭這3種基質(zhì)處理。

2 結(jié)果與分析

2.1 培養(yǎng)基的選擇

2.1.1 芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的選擇

將滅完菌的芽接種到9個(gè)處理的培養(yǎng)基中，當(dāng)6-BA的濃度相同時(shí)，NAA以低濃度的處理較好；當(dāng)NAA的濃度相同時(shí)，6-BA以較高濃度的處理較好，試驗(yàn)表明6-BA 2.0與NAA 0.1的組合生長(zhǎng)穩(wěn)定，愈傷組織長(zhǎng)勢(shì)緊密，該培養(yǎng)基對(duì)龍腦樟外植體的誘導(dǎo)非常適合（表1）。

2.1.2 愈傷增殖和再分化培養(yǎng)基的選擇

將初代誘導(dǎo)出的愈傷組織轉(zhuǎn)接到9個(gè)處理的增殖培養(yǎng)基中，高濃度的6-BA與低濃度的NAA組合有利于芽的增殖，高濃度的NAA與低濃度的6-BA組合有利于芽的生長(zhǎng)，試驗(yàn)表明6-BA 2.0＋NAA 0.2組合最佳，分化系數(shù)2.9，生長(zhǎng)速度快，植株健壯（表2）。將長(zhǎng)至3～4 cm左右的小苗切下接種到生根培養(yǎng)基上生根，將帶有不定芽的愈傷組織切塊接種到分化培養(yǎng)基，不定芽可不斷增殖。

2.1.3 生根培養(yǎng)基的選擇

以1／2Ms為基本培養(yǎng)基，將小苗分別接種到9個(gè)處理的生根培養(yǎng)基中，添加不同濃度NAA和IBA都可生根，但生根質(zhì)量存在較大差距，試驗(yàn)表明添加NAA 0.4和IBA 0.1的組合生根正常，苗健壯（表 3）。

2.2 移栽基質(zhì)的選擇

待瓶苗70%發(fā)出根系時(shí)就可進(jìn)行煉苗，煉苗7d后即可進(jìn)行移栽。移栽基質(zhì)類型對(duì)組培苗有明顯影響，試驗(yàn)表明，其中在泥炭基質(zhì)中龍腦樟組培苗移栽成活率達(dá)100%，且長(zhǎng)勢(shì)旺盛，根系發(fā)達(dá)，新葉轉(zhuǎn)綠；草炭、珍珠巖這2種基質(zhì)植株生長(zhǎng)差，不萌發(fā)新葉；草炭與珍珠巖組合雖然萌發(fā)新葉，但組培苗生長(zhǎng)慢，根系細(xì)弱。因此，選用純泥炭作為移栽基質(zhì)較為適宜（表4）。

表1 不同激素配比的龍腦樟芽誘導(dǎo)情況

表2 不同激素配比的龍腦樟增殖和分化情況

表3 不同激素配比的龍腦樟生根培養(yǎng)情況

表4 不同移栽基質(zhì)的龍腦樟生長(zhǎng)情況

3 結(jié)論與討論

本試驗(yàn)篩選出龍腦樟適宜的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為Ms基本培養(yǎng)基添加6-BA 2.0和 NAA 0.1，適宜的愈傷組織增殖培養(yǎng)基為Ms基本培養(yǎng)基添加6-BA 2.0和NAA 0.2，適宜瓶?jī)?nèi)生根培養(yǎng)基為1／2Ms培養(yǎng)基添加NAA 0.4和IBA 0.1，適宜移栽培養(yǎng)基是純泥炭，移栽成活率可達(dá)100%，且生長(zhǎng)旺盛，新葉萌發(fā)快。

龍腦樟在組培過程中出現(xiàn)大量褐變現(xiàn)象。筆者采用在外植體接種后2～3 d立即轉(zhuǎn)移到新鮮培養(yǎng)基上，經(jīng)過連續(xù)多次轉(zhuǎn)移，發(fā)現(xiàn)褐化外植體明顯減少，此現(xiàn)象得到有效控制。

木本植物在組培過程中常出現(xiàn)不同程度的褐化，本試驗(yàn)通過加速更新培養(yǎng)基以改善褐化現(xiàn)象。有研究表明，植物取材前進(jìn)行暗處理、低溫處理對(duì)減輕褐變均有一定效果，在龍腦樟的組培應(yīng)用上還需要進(jìn)一步試驗(yàn)論證。

［1］ 尹小英，李石蓉，李琴羅，等.藥用植物樟的研究概況［J］.江西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2009，21（6）：87～89.

［2］ 劉秀芳，林文革，蘇明華.龍腦樟（Cinnamomum camphora）組培快繁與苗木工廠化生產(chǎn)技術(shù)研究［J］.植物研究，2011，31（5）：569～574.

［3］ 陳美蘭.藥用植物樟化學(xué)型形成機(jī)理的基礎(chǔ)研究［D］.北京：中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院，2007.

S792.23

B

1002-1728（2017）06-0079-03

10.3969／j.issn.1002-1728.2017.06.019

2017-10-09

岳玲（1980-），女，碩士研究生，副研究員，現(xiàn)主要從事花卉遺傳育種與栽培等研究工作。通訊作者：吳海紅（1972-），女，副研究員，主要從事園藝作物組織培養(yǎng)研究工作。E-mail：1016946418＠qq.com