李玉琴+王英+李燕燕+李福玲

摘 要：目的：探討核桃分心木提取物總黃酮、總皂苷對(duì)家兔心肌缺血再灌損傷的影響。方法：30只家兔隨機(jī)分為5組，假手術(shù)組 單純?nèi)毖M，缺血再灌組 分心木治療A組 B組。結(jié)果：核桃分心木提取物總皂苷治療A組、B組與再灌注組相對(duì)比，血清中MDA含量明顯減少，SOD活性明顯增高，A組與B組相比，血清MDA含量和SOD活性差異不顯著。討論：提示核桃分心木提取物總皂苷可通過某種機(jī)制抑制脂質(zhì)過氧化過程，提高內(nèi)源性抗氧化酶活性；而減輕心肌缺血一再灌注中產(chǎn)生的自由基對(duì)心肌細(xì)胞的損傷，具有抗氧化作用。

關(guān)鍵詞：核桃分心木提取物總皂苷；心肌再灌損傷；抗氧化

近年來，心血管疾病成為威脅人類健康的主要原因，而心肌梗阻的發(fā)病率亦呈上升趨勢(shì)，作為治療理想的手段：溶栓、血管擴(kuò)張及血管再造，可以有效提高心臟功能，但再灌損傷也越來越被醫(yī)務(wù)工作者關(guān)注。尋找新的安全有效的藥物用于防止心肌缺血再灌損傷成為醫(yī)學(xué)研究的一個(gè)重要內(nèi)容。而對(duì)于再灌注損傷研究發(fā)現(xiàn)：缺血再灌過程中，缺血區(qū)會(huì)產(chǎn)生大量自由基是缺血再灌注損傷的重要機(jī)制之一——自由基損傷學(xué)說。核桃分心木別名胡桃衣、胡桃夾、胡桃隔、核桃芯，為胡桃科植物胡桃JuglansregiaL果核的干燥木質(zhì)隔膜，功效固腎澀精，臨床主要用于遺精滑泄、遺溺尿頻、崩中、帶下。目前對(duì)于該藥材的研究文獻(xiàn)較少。隨著經(jīng)濟(jì)作物在我國(guó)的推廣，核桃在全國(guó)范圍內(nèi)的種植也越來越多，人們對(duì)核桃分心木的研究也重視起來?，F(xiàn)代科學(xué)對(duì)核桃分心木的有效成分進(jìn)行了深入的研究，證實(shí)其中含有的總皂苷、總黃酮均有較強(qiáng)的抗氧化作用。許多動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床研究已經(jīng)證明：核桃分心木中的總皂苷和總黃酮，有較強(qiáng)的抗氧化活性，可以清除自由基、超氧離子。本實(shí)驗(yàn)利用家兔心肌缺血一再灌注模型，模擬人類的急性心肌梗死（acute myocardial infacction AMI）后的溶栓過程，通過檢測(cè)血清丙二醛（MDA）含量和超氧化歧化酶（SOD）活性，觀察其在心肌缺血-再灌注損傷的作用，以此來研究開發(fā)核桃分心木及連翹的新的藥用價(jià)值。

一、 材料與方法

1. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：成年家兔、體重2200-2900克、普通喂養(yǎng)、購(gòu)自本地家兔養(yǎng)殖戶。

2. 實(shí)驗(yàn)設(shè)備與主要試劑：DH145型小型動(dòng)物呼吸機(jī)、巴比妥鈉、核桃分心木、SOD試劑盒、MDA試劑盒（南京建成生物工程研究所）。

3. 實(shí)驗(yàn)方法：

（1） 核桃分心木中總皂苷的提取依據(jù)文獻(xiàn)[3]方法提取核桃分心木中的總皂苷。

（2） 動(dòng)物準(zhǔn)備。

（3） 缺血-再灌注模型建立：

建立家兔冠脈左前降支（LAD）缺血-再灌注模型：按文獻(xiàn)方法[4]。

①30只家兔耳緣靜脈注射2%或巴比妥鈉（45mg/kg）麻醉后仰位固定家兔固定臺(tái)上。

②行氣管切開術(shù)，并予以人工機(jī)械呼吸（嚙類動(dòng)物呼吸機(jī)，南京醫(yī)療設(shè)備公司DH145型）潮氣量30ml/次，呼吸頻率為40次/mim，吸入室內(nèi)空氣。

③沿胸骨左（3-5肋）開胸，剪開心包，暴露心臟＼＼于肺動(dòng)脈圓錐及左心房間找出LAD，在LAD下掛0號(hào)線以備可逆性結(jié)扎。

④分離左側(cè)頸內(nèi)靜脈，以備注藥。

⑤于腹主動(dòng)脈插管，以備取血清MDA含量及SOD活性測(cè)定。

二、 實(shí)驗(yàn)分組

將30只家兔經(jīng)上述處理后隨機(jī)分為5組，每組6只，分組如下：

（1） 假手術(shù)組，僅置線不結(jié)扎LDA，270 min后結(jié)束實(shí)驗(yàn)。

（2） 單純?nèi)毖M，結(jié)扎LDA 30 min后結(jié)束實(shí)驗(yàn)。

（3） 缺血-再灌組，結(jié)扎LDA 30 min后，再灌240 min結(jié)束實(shí)驗(yàn)。

（4） 核桃分心木總皂苷治療A組，結(jié)扎前20 min于頸內(nèi)靜脈緩慢注射（10 mg/kg體重）結(jié)扎30 min后，再灌240 min結(jié)束實(shí)驗(yàn)。

（5） 核桃分心木總皂苷治療B組，結(jié)扎LDA 5 min后，于頸內(nèi)靜脈緩慢注射分心木總皂苷（10 mg/kg體重），結(jié)扎30 min后，再灌240 min結(jié)束實(shí)驗(yàn)。

假手術(shù)組、單純?nèi)毖M、缺血再灌組：分別于左側(cè)頸內(nèi)靜脈注射相應(yīng)量生理鹽水作對(duì)照。

1. 觀測(cè)指標(biāo)：

再灌注240 min末，動(dòng)物心臟取血3 ml，以3500 r/min離心15 min，分離血清，-20℃保存待測(cè)。嚴(yán)格按試劑盒說明書，用硫代巴比妥酸法測(cè)定MDA含量，用黃嘌呤氧化酶法測(cè)SOD活性。

2. 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均用（x±s）表示，采用SPSS140統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，多組間比較用方差分析，P<0.05為差異有顯著性，P<0.01為差異有極顯著性。

3. 結(jié)果：

核桃分心木總皂苷對(duì)血清MDA含量及SOD活性的影響

各組在實(shí)驗(yàn)臨結(jié)束前于腹主動(dòng)脈取血清測(cè)血清MDA含量及SOD活性。

結(jié)果顯示：

缺血再灌注組與假手術(shù)組，單純?nèi)毖M相比，血清MDA含量明顯增加，而SOD活性明示降低（P<0.01）核桃分心木總皂苷治療A組與缺血再灌注組相比，血清MDA含量明顯減少，而SOD活性明示增高（P<0.05）；核桃分心木總皂苷治療A組與B組相比，血清MDA含量和SOD活性無差異（P>0.05），具體結(jié)果見表1：

三、 討論

如何減輕并防止心肌缺血再灌損傷是目前缺血性疾病防治過程中急需解決的一個(gè)難題，對(duì)心肌缺血再灌損傷的作用研究表明，心肌缺血再灌損傷的重要機(jī)制之一：是氧自由基的生成增多，使脂質(zhì)過氧化損傷導(dǎo)致脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物丙二醛（MDA）生成增多，SOD活性降低。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：心肌缺血再灌損傷后血清MDA含量明顯增加，SOD活性明顯降低，提示缺血再灌可產(chǎn)生的自由基引起心肌缺血再灌損傷，本治療后明顯降低血清MDA含量，提高血清SOD活性，提示核桃分心木提取物總皂苷有抗氧化作用，可使脂質(zhì)過氧化受抑制，同時(shí)提高內(nèi)源性抗氧化酶活性而減輕氧自由基對(duì)心肌的損傷.此抗氧化作用可能是其減輕心肌缺血再灌損傷的機(jī)制之一.與文獻(xiàn)報(bào)道【10】一致.治療組A與B相比，血清MDA含量和SOD活性無顯著差異，表明核桃分心木總皂苷用于心肌缺血前預(yù)防和心肌缺血再灌注前給藥均有效，提示核桃分心木總皂苷可能不僅能減輕心肌缺血再灌注損傷，且對(duì)心肌缺血再灌損傷有預(yù)防性作用。

總之，核桃分心木總皂苷在心血管疾病治療中具有一定的療效，但具體機(jī)制仍需進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)：

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