周恩華

摘 要：本文主要利用薄層色譜法來對口服溶液中具有的黃連、石斛物質(zhì)進行了檢測；利用RP-HPLC法將鹽酸小檗堿當作主要指標對其含量進行了詳細的檢測。無論是對定性還是對定量的檢測使用的方法都較為簡單，操作方便，并且在制劑的質(zhì)量控制方面可以得到廣泛的使用。

關(guān)鍵詞：石斛堿；RP-HPLC法；薄層色譜法

所謂清熱解讀口服液，主要是由黃連、石斛等多種中藥共同組成。本文筆者依據(jù)多年經(jīng)驗，對該口服液里面含有的黃連、石斛這兩種重要采取薄層色譜的方法進行了分別試驗，并且還使用了RP-HPLC法對該制劑里面含有的鹽酸小檗堿進行了檢測，并建立相應(yīng)的控制標準。

1 薄層色譜法定性鑒別

1.1 石斛的鑒別

實驗人員需要通過精密的稱量提取10ml的口服液，然后放入到一個為60ml的分液漏斗中對液體進行分離，這個時候需要添加4次的氯仿進行萃取，無論哪一次都需要控制在10ml的范圍。當實驗人員將萃取液進行合并以后，通過濃縮的方式得到1ml的劑量當作相應(yīng)的供試液。緊接著實驗人員需要另外提取該口服液里面存在的陰性樣品經(jīng)過加工得到相應(yīng)的陰性對照液。不僅僅如此，需要將1mg/ml的石斛堿具有的氯仿溶液當作相應(yīng)的對照品溶液。這個時候采取薄層色譜法進行試驗，分別提取的溶液含量為10μm，然后再滴入到相同的薄層板上面，這個時候?qū)⒈?氯仿-甲醇（15：10：1）當作相應(yīng)的展開劑，在經(jīng)過蒸汽充分飽和的情況下進行展開，當展開的距離在15cm的時候提取出來，并做好曬干處理。接著另外提取已經(jīng)改良成功的碘化秘鉀試劑顯色，并且會和對照品色譜位置的上面呈現(xiàn)出一樣的斑點。所獲得的結(jié)果請看圖1所示。

1.2 黃連的鑒別

實驗人員取鑒別石斛項下面的供試品液當作相應(yīng)的供試液，然后另外提取該口服液當中的陰性樣品加工成相應(yīng)的陰性對照液，并且還需要將相關(guān)的甲醇溶液當作對照品溶液。這個時候?qū)嶒炄藛T就需要利用薄層色譜法進行（同前）進行試驗。實驗人員會依據(jù)上述的方法提取三種溶液，分別提取的溶液含量為10μm，然后再滴入到相同的薄層板上面，這個時候?qū)⒄〈?醋酸-水（7：1：2）當作相應(yīng)的展開劑，當展開的距離在15cm的時候提取出來，并做好曬干處理。等到完全曬干以后，實驗人員再將其放置到紫外燈（365nm）的距離下進行觀察，這個時候就可以看到圖2A。接著，實驗人員將苯-醋酸乙酯-甲醇-異丙醇-濃氨水（6：3：1.5：1.5：0.5）當作相應(yīng)的展開劑，當經(jīng)過相關(guān)設(shè)備充分作用下展開的距離在15cm的時候提取出來，并做好曬干處理。等到完全曬干以后，實驗人員再將其放置到紫外燈（365nm）的距離下進行觀察，這個時候就可以看到圖2B。

2 制劑中鹽酸小案堿的含量測定

2.1 色譜條

色譜柱ZebaxODS-C18（4.6mmIDX250mm）；流動相：0.02mol/L，磷酸二氫鉀溶液-乙睛（60：40）用磷酸調(diào)節(jié)pH為2.3；流速：1.oml/min；檢測波長：346nm[，〕；進樣量：10“l(fā)；靈敏度：0.005AUFS；最小檢出量：1.2μg/ml。

2.2 供試品溶液的制備

取本品10ml置分液漏斗中，加氨水調(diào)節(jié)pH10.0，振搖，用水飽和的正丁醇50ml，分5次萃?。看蝜0ml）。合并萃取液，水浴蒸去正丁醇后，殘留物用甲醇溶解。溶液轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，即得供試品溶液。另取缺黃連的口服液樣品10ml，照供試品溶液制備方法同法操作，作為缺黃連的陰性對照溶液。

2.3 對照品溶液的制備

精密稱取鹽酸小檗堿對照品17.smg；置10oml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，作為對照品溶液。

2.4 專屬性試臉

分別吸取供試品溶液、缺黃連陰性對照溶液及對照品溶液10μl，按以上色譜條件分別進樣測定，結(jié)果，鹽酸小粟堿對照品的保留時間為9.8min，缺黃連陰性對照溶液在該時間無色譜峰出現(xiàn)，而供試品溶液在該保留時間有特征吸收峰。當在供試品溶液中加入鹽酸小巢堿對照品后測定，僅發(fā)現(xiàn)峰增高，峰面積增大，而未發(fā)生分裂，可以確定該峰即為該制劑中鹽酸小粟堿的特征峰，其它成分對測定無干擾。

2.5 標準曲線的制備

精密吸取鹽酸小槳堿對照品溶液1.0，2.0，4.0，6.0，10.0ml，分別置10ml量瓶中，用甲醇定容。分別進樣10μl，測定吸收峰面積。以濃度為橫座標，峰面積為縱座標繪制標準曲線。實驗表明，鹽酸小粱堿對照品在17.8一178μg/ml的濃度范圍內(nèi)與峰面積呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，實驗數(shù)據(jù)經(jīng)直線回歸，得回歸方程為A=-8437.4+7530.8C，相關(guān)系數(shù)r=0.99987（n=5）。

2.6 精密度試驗

同一份供試品溶液，重復進樣5次，測定其峰面積、結(jié)果表明，精密度良好，RSD=1.6%。

2.7 重現(xiàn)性試驗

取同一批號的口服液樣品5份。每份10ml，按供試品溶液制備項下制備，分別進樣，依法測定。結(jié)果表明，本法重現(xiàn)性良好，RSD=2.76%。

2.8 穩(wěn)定性試臉

取供試品熔液2份，每隔2h各測一次；每份測3次（n=6），峰面積積分值的RSD=2.25%。結(jié)果表明，測得數(shù)據(jù)在4h內(nèi)穩(wěn)定。

3 討論

本文實驗人員主要對清熱解毒口服液里面含有的石斛及其黃連分別進行了詳細的檢測，并且將其所存在的陰性對照液進行了對比，得到的結(jié)果并沒有受到不利影響，該試驗有著較強的專屬性，并且靈敏度也比較高。顯而易見的是，實驗人員對鹽酸小檗堿的實際含量進行了檢測，依據(jù)相關(guān)文獻可以得知：一些實驗人員曾經(jīng)使用了UV-2100類型的紫外分光光度計對其含量進行了檢測，并依據(jù)正交函數(shù)及其相關(guān)導數(shù)法做好恰當?shù)奶幚恚P(guān)于小檗堿的HPLC測量方法也存在相關(guān)報道，然而因為干擾組成因素存在一定的差異性，所以無法使用到含量檢測中。在實驗的領(lǐng)域中探索了一些滿足該制劑色譜條件的一些方法。對于小檗堿的特點來說，存在著較高的專屬特點，并且在制劑中不會受到其他成分帶來的影響，并且操作較為簡便，并且不需要上柱進行分離。所以，該方法應(yīng)用到小檗堿含量檢查中較為合適。

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