楊 滿 吳 隼 張靈秀 黃 琰 字友梅 張 媛
(新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院血液科,衛(wèi)輝 453100)
miR-143調(diào)控PAN3蛋白的表達(dá)對B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞侵襲和遷移的影響①
楊 滿 吳 隼 張靈秀 黃 琰 字友梅 張 媛
(新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院血液科,衛(wèi)輝 453100)
目的探討miR-143調(diào)控PAN3蛋白的表達(dá)對B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞侵襲和遷移的影響。方法運用qPCR實驗檢測miR-143在正常骨髓組織和淋巴瘤血液組織中的表達(dá)情況;檢測在不同種類的細(xì)胞株中miR-143的表達(dá)水平;qPCR檢測miR-143對PAN3的表達(dá)水平的影響;雙熒光素酶實驗檢測miR-143和PAN3之間的相互關(guān)系;劃痕實驗和Transwell侵襲實驗檢測miR-143表達(dá)對B細(xì)胞淋巴瘤E6-1細(xì)胞遷移和侵襲能力的影響。結(jié)果和正常骨髓組織相比,miR-143在B細(xì)胞淋巴瘤中表達(dá)明顯下調(diào);選取miR-143表達(dá)水平較低的E6-1細(xì)胞株;雙熒光素酶實驗表明miR-143可以下調(diào)PAN3的表達(dá)水平,直接影響PAN3的表達(dá)活性;過表達(dá)miR-143后,E6-1細(xì)胞的侵襲和遷移能力明顯受到抑制,抑制E6-1細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力。結(jié)論miR-143可以通過調(diào)控PAN3的表達(dá),從而調(diào)節(jié)B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞的遷移和侵襲行為。
miR-143;淋巴瘤;PAN3;Transwell
B細(xì)胞淋巴瘤是血液系統(tǒng)腫瘤中發(fā)病率很高的惡性腫瘤類型之一,在全球居第三位,在我國居第二位[1]。其最常見的致死原因是B細(xì)胞淋巴瘤早期診斷困難,容易轉(zhuǎn)移至面部,四肢甚至全身其他器官,合并多種并發(fā)癥,導(dǎo)致其死亡率居高不下[2]。盡管近期關(guān)于B細(xì)胞淋巴瘤的診斷治療取得很大進(jìn)展,但是其化療、放療的復(fù)發(fā)情況改善不佳,所以研究探討新的分子靶向機(jī)制是B細(xì)胞淋巴瘤診斷和治療方向上的研究熱點。
miRNA 可以通過與其靶基因的 mRNA 特定結(jié)合位點的堿基互補配對,形成轉(zhuǎn)錄復(fù)合物,抑制相關(guān)蛋白的表達(dá),達(dá)到調(diào)控其生物學(xué)功能的作用[3]。尤其是目前研究表明,miRNA 可以對腫瘤相關(guān)基因進(jìn)行調(diào)控,達(dá)到抑癌或促癌的效果[4]。miR-143在多種腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移過程中都扮演著一定的作用。新近研究發(fā)現(xiàn),miR-143對前列腺癌、胃癌細(xì)胞和肝癌細(xì)胞均有一定的抑制效果[5]。不過關(guān)于miR-143在B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞中的表達(dá)情況及作用機(jī)制尚未有相關(guān)研究報道指出。
PAN3蛋白屬于RAS家族成員中的一個保守蛋白,其在細(xì)胞凋亡的進(jìn)程中扮演重要角色,可以抑制凋亡蛋白酶的活性,抑制細(xì)胞的過度凋亡[6]。由于PAN3蛋白的編碼序列較為保守,其在多種細(xì)胞中都有表達(dá)[7]。最近研究表明其可以和上游mRNA的相關(guān)聯(lián)系對腫瘤細(xì)胞進(jìn)行共同調(diào)控[8]。
本研究旨在探討miR-143在B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞中的表達(dá)及對B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞侵襲、遷移能力的影響,明確miR-143在B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞中和PAN3蛋白的相關(guān)關(guān)系,探討其可能的作用方式。
1.1材料 B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞株BJAB、A20,E6-1和OCI-LY3均獲自武漢大學(xué)典型培養(yǎng)物保藏中心。細(xì)胞培養(yǎng)條件:在RPMI1640培養(yǎng)基中加入1%青霉素/鏈霉素。用5%胎牛血清在5%CO2空氣濕潤培養(yǎng)箱中37℃恒溫培養(yǎng)。鼠克隆單抗PAN3購于Sigam公司(Sigam,F(xiàn)LJ40270)。miR-143-mimic購買于上海吉瑪基因有限公司。Lipofecta mine2000轉(zhuǎn)染試劑購于TaKaRa公司。
1.2方法
1.2.1臨床標(biāo)本采集與處理 收集2016年1月~8月在醫(yī)院手術(shù)切除并且經(jīng)病理檢查確診為B細(xì)胞淋巴瘤的血液樣本20例,同時取正常人血液樣本20例。樣本獲取得到醫(yī)院倫理委員會的批準(zhǔn)同意,患者均簽署知情同意書。
1.2.2qPCR試驗 qPCR法檢測miR-143表達(dá)。將E6-1細(xì)胞接種于六孔板,接種密度為1×106L-1, 培養(yǎng)36 h后按照Trizol說明操作提取組細(xì)胞總RNA,檢測mRNA的濃度和純度。用在SsoFast EvaGreen試劑(Bio-Rad)中以1∶10稀釋的cDNA進(jìn)行qPCR測量。 將表達(dá)數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)化至相應(yīng)的參照基因。根據(jù)2-ΔΔCT法計算檢測基因反應(yīng)條件為:37℃ 15 min,98℃ 5 min。根據(jù)PCR試劑盒說明書進(jìn)行PCR反應(yīng)。獲得數(shù)據(jù)以RQ=2-ΔΔCT計算mRNA表達(dá)量。
1.2.3雙熒光素酶試驗 通過雙熒光素酶確證miR-143能夠靶向作用于PAN3。本實驗將PAN3的3′UTR區(qū)構(gòu)建入雙光素酶報告基因載體。本次所用的雙熒光素酶報告基因?qū)嶒灥妮d體包含兩個熒光素酶報告基因:一個是海腎熒光素酶報告基因,一個是熒火蟲熒光素酶報告基因,后者作為內(nèi)對照。將其分為NC組和miR-143-mimic組,分別使用不同的類似物處理,將上述基因的3′UTR構(gòu)建到海腎熒光素酶報告基因的直接下游區(qū),如果3′UTR能夠被miR-143識別,則該3′UTR前面基因Luciferase的表達(dá)將被抑制,對比兩組之間的差異。
1.2.4劃痕愈合試驗 將細(xì)胞密度調(diào)整為 5×105個/ml,接種到6孔板中,放置于5%CO2溫箱孵育過夜,使細(xì)胞匯合度達(dá)到 100%。細(xì)胞劃痕先用 Marker 筆在每個孔的背面做好標(biāo)記,以保證獲取數(shù)據(jù)的位置保持一致。用滅過菌的槍頭比著直尺,垂直于標(biāo)記線快速進(jìn)行劃痕。并用 PBS 緩沖液反復(fù)沖洗細(xì)胞孔,去除懸浮細(xì)胞。向培養(yǎng)孔加入不含血清的1640培養(yǎng)基,放置于 5%CO2的 37℃孵箱孵育。按照試驗設(shè)計中的時間點取樣,在顯微鏡下拍照。測量劃痕的初始距離(0 time);在24、48、72 h后,分別測量劃痕的距離,并拍照,計算細(xì)胞的遷移率。實驗重復(fù)3次。
1.2.5Transwell細(xì)胞侵襲試驗 所有試劑及器材均于冰上預(yù)冷,將Transwell小室置于24孔板內(nèi),將Transwell小室內(nèi)膜均勻涂抹Matrigel膠50 μl(0.2 μg/μl),37℃孵育15 min,凝固膠后;消化、離心、計數(shù)B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞后,按照2.5×104ml-1用無血清培養(yǎng)基稀釋細(xì)胞,制成細(xì)胞懸液;按照每孔200 μl,將細(xì)胞懸液加入Transwell上室,同時在Transwell下室加入10%FBS+培養(yǎng)基600 μl,放入37℃孵箱培養(yǎng);甲醛固定,結(jié)晶紫染色10 min,然后用棉簽輕輕擦拭內(nèi)膜上的細(xì)胞。顯微鏡下技術(shù),計數(shù)4個高倍視野(×40)下穿過濾膜的細(xì)胞數(shù)。實驗重復(fù)3次。
2.1檢測不同B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞株中miR-143的表達(dá) 通過qPCR實驗檢測正常骨髓樣本和B細(xì)胞淋巴瘤樣本中miR-143的表達(dá)水平,miR-143在正常骨髓細(xì)胞中的表達(dá)水平相對較高[(85.62±6.21)% vs(18.6±2.62)%,P=0.016]。在不同B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞中,miR-143的表達(dá)水平不盡相同,我們選取表達(dá)水平較低的E6-1細(xì)胞株作為后續(xù)試驗對象,見圖1。
2.2雙熒光素酶實驗檢測miR-143和PAN3之間的關(guān)聯(lián) 為了尋找miR-143的下游靶點,我們利用生物信息學(xué)分析,發(fā)現(xiàn)miR-143的序列與下游PAN3基因的部分序列有相同的結(jié)合位點。我們通過雙熒光素酶標(biāo)記實驗進(jìn)行驗證,首先我們構(gòu)建了PAN3攜帶3′-UTR的熒光素酶報告因子,其中每個基因的結(jié)合位點與miR-143結(jié)合位點相對應(yīng)。熒光素酶測定顯示miR-143下游結(jié)合3′-UTR結(jié)合位點PAN3相符合,過表達(dá)miR-143過后可以導(dǎo)致熒光素酶活性的顯著降低(圖2C)。過表達(dá)miR-143后可明顯下調(diào)B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞中PAN3的表達(dá)(圖2A、B)。上述結(jié)果表明miR-143可以調(diào)控下游PAN3蛋白表達(dá)情況,可能是通過調(diào)控PAN3的表達(dá)影響B(tài)細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞株的生物學(xué)行為。
2.3miR-143表達(dá)影響B(tài)細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞遷移能力 為了研究miR-143對B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞增殖能力的影響,使用E6-1細(xì)胞株進(jìn)行質(zhì)粒轉(zhuǎn)染以增加miR-143的表達(dá)。通過MTT實驗檢測miR-143對E6-1細(xì)胞遷移能力的影響。miR-143-mimic組的細(xì)胞生長速度比其對照組明顯降低[(88.15±8.25)% vs(52.34±3.25)%,P<0.01],培養(yǎng)72 h后抑制效果顯示具有統(tǒng)計學(xué)意義(圖3A、B)。綜上所述,miR-143可以調(diào)控E6-1細(xì)胞的遷移能力。
圖1 miR-143在B淋巴細(xì)胞瘤和細(xì)胞株中的表達(dá)情況Fig.1 Expression of miR-143 in B lymphoma and cell linesNote: A.miR-143 expression levels in normal bone marrow and B-cell lymphoma samples;B.miR-143 expression levels in different cell lines.
圖2 miR-143和PAN3蛋白之間的相互關(guān)系Fig.2 Correlation between miR-143 and PAN3 proteinsNote: A,B.miR-143-mimic regulation of miR-143 and PAN3 expression levels;C.Double luciferase assay to detect the relationship between miR-143 and PAN3.
2.4miR-143表達(dá)影響B(tài)細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞侵襲能力 為了研究miR-143對B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞侵襲能力的影響,使用HT-29細(xì)胞株進(jìn)行質(zhì)粒轉(zhuǎn)染以增加miR-143的表達(dá)。通過Transwell侵襲實驗檢測miR-143對HT-29細(xì)胞侵襲能力的影響。miR-143-mimic組細(xì)胞的侵襲數(shù)目比其對照組明顯降低[78.95±6.62)% vs(18.26±3.26)%,P<0.01],差異顯示具有統(tǒng)計學(xué)意義(圖4)。結(jié)果顯示,過表達(dá)miR-143后可以明顯抑制E6-1細(xì)胞株的侵襲能力。
圖3 劃痕愈合試驗檢測miR-143對E6-1細(xì)胞遷移能力的影響Fig.3 Scratch healing test to detect effect of miR-143 on migration of E6-1 cells
圖4 Transwell試驗檢測miR-143對E6-1細(xì)胞侵襲能力的影響Fig.4 Transwell test to detect effect of miR-143 on invasion of E6-1 cells
B細(xì)胞淋巴瘤是一種由多種因素引起的血液系統(tǒng)發(fā)病率較高的惡性腫瘤[9]。由于目前早期診斷和發(fā)現(xiàn)水平存在一定缺陷,早期B細(xì)胞淋巴瘤的診斷尚未達(dá)到較高的水平,對B細(xì)胞淋巴瘤的診斷和治療預(yù)后都存在不利的影響[10,11]。隨著醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)和基因檢測技術(shù)的不斷發(fā)展,B細(xì)胞淋巴瘤的分子標(biāo)志物和治療靶標(biāo)獲得越來越多的關(guān)注,通過檢測B細(xì)胞淋巴瘤的臨床分子靶標(biāo),然后根據(jù)不同標(biāo)記物的情況對B細(xì)胞淋巴瘤患者進(jìn)行早期診斷和個體治療是未來發(fā)展的熱門方向[12]。
miRNA是廣泛存在于哺乳動物細(xì)胞中的一種短序列的非編碼RNA因子,可以調(diào)控基因表達(dá)和轉(zhuǎn)錄過程[13]。在哺乳動物中,miRNA一般是由21~24個核苷酸組成,通過與下游相關(guān)靶點形成復(fù)合物,來調(diào)控基因的翻譯過程或誘導(dǎo)靶向mRNA的降解過程[14]。新的證據(jù)表明,miRNA在多種腫瘤細(xì)胞的發(fā)展進(jìn)程中起關(guān)鍵作用,包括細(xì)胞分化、增殖、凋亡、應(yīng)激反應(yīng)、脂肪代謝、腫瘤發(fā)生和轉(zhuǎn)移等[15-17]。最近,部分miRNA在腫瘤中報道可以促進(jìn)或抑制惡性腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移侵襲行為,為研究腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的過程提供了新的視角[18]。
有研究表明,某些mRNA在B細(xì)胞淋巴瘤的發(fā)生發(fā)展過程中有一定的誘導(dǎo)或抑制作用[19]。因此,我們推測在B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞的致癌過程中誘導(dǎo)miRNA的表達(dá)可能阻斷惡性腫瘤細(xì)胞的快速轉(zhuǎn)移與侵襲過程。雖然在胃癌、肝癌等實體腫瘤中已經(jīng)報道了miR-143水平存在一定的表達(dá)異常,但是B細(xì)胞淋巴瘤尚未有明確報道[20,21]。在本報告中,我們首次研究并選擇出高侵襲性的B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞,通過選擇的優(yōu)良B細(xì)胞淋巴瘤轉(zhuǎn)移細(xì)胞株模型進(jìn)行后續(xù)實驗探索。
miR-143的抗轉(zhuǎn)移功能讓人聯(lián)想到與P53腫瘤抑制因子的作用功能相似[22]。通過激活腫瘤抑制因子對各種致癌信號做出相應(yīng)反應(yīng),致癌作用可能是通過誘導(dǎo)B細(xì)胞淋巴瘤中miR-143的表達(dá)影響B(tài)細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞的行為反應(yīng),但是其具體的分子通路機(jī)制還需要進(jìn)一步的研究進(jìn)行探討及驗證。
我們實驗通過檢測miR-143在B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞株中的表達(dá),發(fā)現(xiàn)miR-143在B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞中可能扮演著抑癌因子的作用,并通過生物信息學(xué)檢測尋找miR-143下游的蛋白靶點PAN3。通過增加miR-143的表達(dá)檢測B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為的變化,推測miR-143可以抑制B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞的增殖和侵襲,從而調(diào)控其在生物體內(nèi)的轉(zhuǎn)移行為。另外,我們通過查閱文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn),miR-143在乳腺癌細(xì)胞株中可以抑制Akt的磷酸化水平,減弱乳腺癌細(xì)胞的遷移和侵襲細(xì)胞的存活率[23]。但是在B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞中我們還未檢測相關(guān)蛋白通路的磷酸化水平,還不清楚miR-143是否通過信號通路激活抑制B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。
在之前的研究中,有研究報道PAN3廣泛存在于各種侵襲性腫瘤細(xì)胞株中,在非侵襲性的腫瘤細(xì)胞株中的表達(dá)水平較低,表明PAN3可能在腫瘤細(xì)胞中起到促癌因子的作用[24]。而miR-143則在B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞株中的表達(dá)與PAN3的表達(dá)相反。當(dāng)我們轉(zhuǎn)染miR-143-mimic和miR-143-inhibitor后,雙向證明其可以影響B(tài)細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞的增殖和侵襲能力,通過雙熒光素酶試驗我們知道PAN3的表達(dá)受miR-143的調(diào)控,但是PAN3能否逆向影響miR-143的抑癌作用,本實驗尚未進(jìn)行完善探討,擬后續(xù)試驗繼續(xù)檢測PAN3蛋白的過表達(dá)和敲除是否可以逆轉(zhuǎn)miR-143對B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞的抑制作用。然而有其他學(xué)者研究報道,通過慢病毒敲除PAN3蛋白的表達(dá)與過表達(dá)miR-143對腫瘤細(xì)胞的影響程度類似,都對腫瘤細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移具有一定的抑制作用,但是通過慢病毒敲除PAN3的影響效應(yīng)相對較弱。我們推測這可能是因為miR-143下游的相關(guān)靶標(biāo)不止PAN3,盡管如此,仍可以表明miR-143對腫瘤細(xì)胞的抑制作用,至少部分是通過調(diào)控PAN3的表達(dá)實現(xiàn)的。
總之,我們通過研究miR-143與下游PAN3靶點相互作用對B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞的增殖和侵襲能力的影響證實了我們對miR-143調(diào)控作用的猜測,補充了miR-143在B細(xì)胞淋巴瘤中的生物信息學(xué)的調(diào)控方式。為B細(xì)胞淋巴瘤的臨床早期診斷和治療提供一定的分子理論支持,可以通過使用miR-143的類似物激活其表達(dá)來達(dá)到治療效果。后續(xù)我們繼續(xù)完善相關(guān)機(jī)制的研究為miR-143在B細(xì)胞淋巴瘤中的作用機(jī)制提供更多的理論支持。
[1] Llosa NJ,Cruise M,Tam A,etal.The vigorous immune microenvironment of microsatellite instable colon cancer is balanced by multiple counter-inhibitory checkpoints[J].Cancer Discov,2015,5(1):43-51.
[2] 劉見榮,侯風(fēng)剛.B細(xì)胞淋巴瘤治療概況[J].遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2014,16(2):99-101.
[3] Chen CYA,Chang JT,Ho YF,etal.MiR-143 down-regulates TNF-α/NF-κB signalling and IL-6 expression by silencing HMGA1 and MALT1[J].Nucleic Acids Res,2016,44(8):3772-3787.
[4] 馬俊麗,曾 珊.錯配修復(fù)基因和B細(xì)胞淋巴瘤的關(guān)系[J].中南大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版),2014,2:17.
[5] Icli B,Dorbala P,Feinberg MW.An emerging role for the miR-143 family in cardiovascular disease[J].Trends Cardiovascular Med,2014,24(6):241-248.
[6] Eguchi A,Du Jeu XDM,Johnson CD,etal.Liver PAN3 suppression for treatment of fibrosis associated with non-alcoholic steatohepatitis[J].J Hepatol,2016,64(3):699-707.
[7] 陳 昊,陳乃玲,白 玲,等.促凋亡蛋白 FasL,PAN3 在B細(xì)胞淋巴瘤組織表達(dá)的臨床意義[J].中國實驗診斷學(xué),2008,12(6):757-759.
[8] Brasacchio D,Noori T,House C,etal.A functional genomics screen identifies PCAF and ADA3 as regulators of human granzyme B-mediated apoptosis and PAN3 cleavage[J].Cell Death Different,2014,21(5):748-760.
[9] Schetter AJ,Leung SY,Sohn JJ,etal.MicroRNA expression profiles associated with prognosis and therapeutic outcome in colon adenocarcinoma[J].JAMA,2008,299(4):425-436.
[10] Kyu HH,Bachman VF,Alexander LT,etal.Physical activity and risk of breast cancer,colon cancer,diabetes,ischemic heart disease,and ischemic stroke events:systematic review and dose-response meta-analysis for the Global Burden of Disease Study 2013[J].BMJ,2016,354:i3857.
[11] Felipe De Sousa EM,Wang X,Jansen M,etal.Poor-prognosis colon cancer is defined by a molecularly distinct subtype and develops from serrated precursor lesions[J].Nat Med,2013,19(5):614-618.
[12] Cayrefourcq L,Mazard T,Joosse S,etal.Establishment and characterization of a cell line from human circulating colon cancer cells[J].Cancer Res,2015,75(5):892-901.
[13] Kichev A,Rousset CI,Baburamani AA,etal.Tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL) signaling and cell death in the immature central nervous system after hypoxia-ischemia and inflammation[J].J Biological Chem,2014,289(13):9430-9439.
[14] 張有成,王 杉,張 輝,等.選擇性環(huán)氧化酶-2 抑制劑 NS-398 抗B細(xì)胞淋巴瘤機(jī)制及對 5-氟尿嘧啶化療的輔助作用[J].中華醫(yī)學(xué)雜志,2004,84(7):583-586.
[15] Dalerba P,Sahoo D,Paik S,etal.CDX2 as a prognostic biomarker in stage II and stage III colon cancer[J].New England J Med,2016,374(3):211-222.
[16] Shen M,Wu M Y,Chen L P,etal.Cantharidin represses invasion of pancreatic cancer cells through accelerated degradation of MMP2 mRNA[J].Sci Rep,2015,5:11836.
[17] Allen KM,Purves-Tyson TD,Fung SJ,etal.The effect of adolescent testosterone on hippocampal BDNF and TrkB mRNA expression:relationship with cell proliferation[J].BMC Neuroscience,2015,16(1):4.
[18] Feng G,Shi H,Li J,etal.MiR-30e suppresses proliferation of hepatoma cells via targeting prolyl 4-hydroxylase subunit alpha-1(P4HA1)mRNA[J].Biochem Biophysical Res Communicat,2016,472(3):516-522.
[19] del Reino P,Alsina-Beauchamp D,Escós A,etal.Pro-oncogenic role of alternative p38 mitogen-activated protein kinases p38γ and p38δ,linking inflammation and cancer in colitis-associated colon cancer[J].Cancer Res,2014,74(21):6150-6160.
[20] El-Ahwany E,Nagy F,Zoheiry M,etal.Circulating miRNAs as predictor markers for activation of hepatic stellate cells and progression of HCV-induced liver fibrosis[J].Electronic Physician,2016,8(1):1804.
[21] Callegari E,Gramantieri L,Domenicali M,etal.MicroRNAs in liver cancer:a model for investigating pathogenesis and novel therapeutic approaches[J].Cell Death Different,2015,22(1):46-57.
[22] Fesler A,Zhang N,Ju J.The expanding regulatory universe of p53 in gastrointestinal cancer[J].F1000Res,2016,5:756.
[23] Palumbo T,Faucz FR,Azevedo M,etal.Functional screen analysis reveals miR-143b and miR-128 as central regulators of pituitary somatomammotrophic tumor growth through activation of the PTEN-AKT pathway[J].Oncogene,2013,32(13):1651-1659.
[24] Wree A,Johnson CD,Font-Burgada J,etal.Hepatocyte-specific PAN3 depletion reduces tumor development by suppressing inflammation-related compensatory proliferation[J].Cell Death Different,2015,22(12):1985-1994.
EffectsofmiR-143oninvasionandmigrationofBcelllymphomacellsthroughregulatingexpressionofPAN3protein
YANGMan,WUSun,ZHANGLing-Xiu,HUANGYan,ZIYou-Mei,ZHANGYuan.
DepartmentofHematology,FirstAffiliatedHospitalofXinxiangMedicalCollege,Weihui453100,China
Objective:To investigate the effect of miR-143 on the invasion and migration of B cell lymphoma cells.MethodsThe expression of miR-143 in normal bone marrow and lymphoma was detected by qPCR.The expression levels of miR-143 in different cell lines were examined by qPCR.qPCR was used to detect the ability of miR-143 on PAN3.The relationship between miR-143 and PAN3 was detected by double luciferase assay.The effect of miR-143 expression on the migration ability of B cell lymphoma E6-1 cells was examined by scratch test.The effect of miR-143 expression on the invasion ability of B cell lymphoma E6-1 cells was exa mined by transwell test.ResultsCompared with normal bone marrow,miR-143 was down-regulated in B-cell lymphoma.Double luciferase assay showed that miR-143 could regulate the expression of PAN3.Overexpression of miR-143,E6-1 cells significantly reduced the ability to attack and migrate.ConclusionmiR-143 can regulate the migration and invasion of B cell lymphoma cells by regulating the expression of PAN3.
miR-143;Lymphoma;PAN3;Transwell
10.3969/j.issn.1000-484X.2017.12.004
R733.4
A
1000-484X(2017)12-1774-05
①本文為河南省教育廳基金資助項目(No.2006320039)。
楊 滿(1983年-),女,碩士,主治醫(yī)師,主要從事血液病學(xué)方面的研究,E-mail:mmyis2017@126.com。
[收稿2017-05-15 修回2017-06-19]
(編輯 許四平 劉格格)