黃世猛 黃楚然 趙麗紅 張建云 計 成 馬秋剛

(中國農(nóng)業(yè)大學動物科技學院，動物營養(yǎng)學國家重點實驗室，北京 100193)

凝結(jié)芽孢桿菌對感染沙門氏菌蛋雞生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)和血漿生化指標的影響

黃世猛 黃楚然 趙麗紅 張建云 計 成 馬秋剛*

(中國農(nóng)業(yè)大學動物科技學院，動物營養(yǎng)學國家重點實驗室，北京 100193)

本試驗旨在研究凝結(jié)芽孢桿菌對感染沙門氏菌前后蛋雞生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)的影響，并探究其對感染沙門氏菌蛋雞血漿生化指標的影響。將400只沙門氏菌陰性、體況健康的京紅商品代蛋雞根據(jù)產(chǎn)蛋率無顯著差異(P>0.05)原則隨機分成4組(A組、B組、C組和D組)，每組5個重復，每個重復20只雞。對照組(A組和C組)飼喂基礎飼糧，凝結(jié)芽孢桿菌組(B組和D組)在基礎飼糧中添加2.5×1010CFU/kg凝結(jié)芽孢桿菌；飼喂1周后，C組和D組連續(xù)2 d定量口服腸炎沙門氏菌懸浮液(1×108CFU/mL)，A組和B組口服等量無菌磷酸鹽緩沖液(PBS)，繼續(xù)飼養(yǎng)3周。結(jié)果表明：1)感染沙門氏菌前，凝結(jié)芽孢桿菌對蛋雞生產(chǎn)性能無顯著影響(P>0.05)。感染沙門氏菌后，沙門氏菌顯著降低了蛋雞平均日采食量(P<0.05)；凝結(jié)芽孢桿菌極顯著降低了蛋雞料蛋比(P<0.01)，顯著降低了平均日采食量(P<0.05)。2)感染沙門氏菌前，凝結(jié)芽孢桿菌極顯著增加了蛋雞蛋殼重/蛋重(P<0.01)。感染沙門氏菌后，沙門氏菌和凝結(jié)芽孢桿菌對蛋雞蛋品質(zhì)指標均無顯著影響(P>0.05)。3)感染沙門氏菌后，凝結(jié)芽孢桿菌顯著降低了血漿總膽固醇和甘油三酯含量(P<0.05)；沙門氏菌顯著降低了血漿總膽固醇、甘油三酯和鈣含量，顯著提高了血漿谷草轉(zhuǎn)氨酶活性(P<0.05)，極顯著提高了血漿堿性磷酸酶活性(P<0.01)；凝結(jié)芽孢桿菌與沙門氏菌對血漿總蛋白含量、鈣/磷及谷草轉(zhuǎn)氨酶活性有顯著交互作用(P<0.05)。綜上，凝結(jié)芽孢桿菌可改善蛋雞生產(chǎn)性能和蛋品質(zhì)，在蛋白質(zhì)代謝、脂質(zhì)代謝、肝功能和鈣磷吸收上都具有一定程度的改善作用。

蛋雞；凝結(jié)芽孢桿菌；沙門氏菌；生產(chǎn)性能

腸炎沙門氏菌(SalmonellaentericaserovarEnteritidis,SE)不僅能引起家禽患病，還能感染人類，引起食物中毒甚至死亡，是主要的食源性病原菌。雞蛋是人感染沙門氏菌重要的媒介之一。2010年5月美國因食用沙門氏菌感染的雞蛋制品爆發(fā)沙門氏菌感染疫情，召回5億枚疑似沙門氏菌感染的雞蛋。雞蛋沙門氏菌感染的有效控制關系公眾食品健康。

近年來的研究表明，乳酸菌、雙歧桿菌、酵母菌等益生菌可減少宿主沙門氏菌攜帶數(shù)量。Mountzouris等[1]與Chen等[2]研究了益生菌關于競爭性排除沙門氏菌的能力以及相關益生菌的特征。Higgins等[3]用乳酸桿菌飼喂沙門氏菌攻毒后的蛋雞，顯著降低了沙門氏菌陽性率。凝結(jié)芽孢桿菌(Bacilluscoagulans)為革蘭氏陽性菌，是一種高效的益生菌，能提高動物的免疫能力，調(diào)節(jié)腸道微生物平衡，具有通便、止瀉、抗氧化等作用。凝結(jié)芽孢桿菌作為飼料添加劑已有較多研究，但其在蛋雞上的研究鮮見報道。因此，本試驗通過研究凝結(jié)芽孢桿菌對感染腸炎沙門氏菌蛋雞生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)和血漿生化指標的影響，旨在為其在蛋雞生產(chǎn)中應用提供更多的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

腸炎沙門氏菌菌株，編號CVCC3377，購自國家獸醫(yī)微生物菌種保藏中心。凝結(jié)芽孢桿菌ANCB161，課題組從雞糞中分離得到，活菌數(shù)5.0×1010CFU/g。

1.2 試驗設計

選擇45周齡健康的京紅商品蛋雞，通過全血平板凝集試驗和肛拭子法篩選沙門氏菌陰性蛋雞400只，采用2×2雙因子(凝結(jié)芽孢桿菌添加與否、腸炎沙門氏菌攻毒與否)試驗設計，根據(jù)產(chǎn)蛋率無顯著差異(P>0.05)原則隨機分成4組(A、B、C、D組)，每組5個重復，每個重復20只蛋雞，每2組分到2個環(huán)境條件相同、獨立的生物安全隔離雞舍。試驗第1周，對照組(A組和C組)飼喂基礎飼糧，凝結(jié)芽孢桿菌組(B組和D組)在基礎飼糧中添加2.5×1010CFU/kg凝結(jié)芽孢桿菌，研究凝結(jié)芽孢桿菌對感染沙門氏菌前蛋雞生產(chǎn)性能和蛋品質(zhì)的影響；飼喂1周后，C組和D組試驗雞連續(xù)2 d口服腸炎沙門氏菌懸浮液(1×108CFU/mL)，A組和B組試驗雞口服等量無菌磷酸鹽緩沖液(PBS)，繼續(xù)飼養(yǎng)3周，研究凝結(jié)芽孢桿菌對感染沙門氏菌后蛋雞生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)和血漿生化指標的影響。

1.3 飼養(yǎng)管理

試驗地點為中國農(nóng)業(yè)大學涿州試驗基地，采用封閉式雞舍階梯式籠養(yǎng)，每籠1只雞，光照時間16 h，光照強度16 lx，雞舍溫度18～27 ℃，相對濕度50%～70%，縱向負壓通風。干粉料自由采食，乳頭式飲水器自由飲水。預試期2周，正試期4周。飼糧營養(yǎng)水平參考我國《雞飼養(yǎng)標準》(NY/T 33—2004)和京紅商品蛋雞飼養(yǎng)手冊確定，基礎飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

1.4 測定指標及方法

1.4.1 生產(chǎn)性能

以重復為單位，統(tǒng)計產(chǎn)蛋數(shù)、平均蛋重，計算產(chǎn)蛋率、日產(chǎn)蛋量，每周以重復為單位結(jié)料和稱重，計算平均日采食量和料蛋比。

表1 基礎飼糧組成及營養(yǎng)水平(風干基礎)

1)維生素預混料為每千克飼糧提供 The vitamin premix provided the following per kg of the diet：VA 8 000 IU，VD33 600 IU，VE 21 IU，VK34.2 mg，VB13 mg，VB210.2 mg，葉酸 folic acid 0.9 mg，泛酸鈣 calcium pantothenate 15 mg，煙酸 nicotinic acid 45 mg，VB65.4 mg，VB120.024 mg，生物素 biotin 0.15 mg。

2)微量元素預混料為每千克飼糧提供 The trace elements premix provided the following per kg of the diet：Cu (as copper sulfate) 8 mg，F(xiàn)e (as ferrous sulfate) 60 mg，Zn 80 mg，Mn (as manganese sulfate) 80 mg，I (as potassium iodide) 0.6 mg，Se (as sodium selenite) 0.3 mg。

3)代謝能為計算值，其余為實測值。ME was a calculated value, while the others were measured values.

1.4.2 蛋品質(zhì)

每周末收集每個重復3枚雞蛋。采用SONOVA蛋品質(zhì)自動分析儀(Egg AnalyzerTM,Orka)測定雞蛋蛋重、蛋白高度、哈夫單位和蛋黃顏色，采用蛋殼強度分析儀(Egg Force Reader,Orka)測定蛋殼強度，采用蛋殼厚度測定儀(Egg Shell Thickness Gauge,Orka)測定蛋殼厚度。稱重分離蛋清后的蛋黃，蛋殼清洗、晾干，稱重。

1.4.3 血漿生化指標

飼養(yǎng)試驗結(jié)束時，每個重復隨機選擇1只體重接近平均體重的蛋雞，供水禁飼12 h后，肝素鈉抗凝管翅靜脈采血，3 500 r/min離心15 min制備血漿，分裝后-80 ℃保存，用于血漿生化指標的測定。總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、鈣(Ca)、磷(P)含量及谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、堿性磷酸酶(AKP)活性均采用日立全自動生化分析儀測定，檢測試劑盒購于四川邁克生物科技股份有限公司。

1.5 數(shù)據(jù)處理分析

試驗數(shù)據(jù)采用Excel 2007軟件整理，試驗結(jié)果以用平均值(mean)和集合標準誤(SEM)表示，采用SPSS 18.0軟件分析，蛋雞感染沙門氏菌前生產(chǎn)性能與蛋品質(zhì)采用單因素方差分析(one-way ANOVA)，蛋雞感染沙門氏菌后，采用一般線性模型(general linear model,GLM)多變量模塊分析，兩兩比較檢驗采用Duncun氏法多重比較檢驗，以P<0.05和P<0.01分別作為差異顯著和差異極顯著判斷標準，0.05≤P<0.10表示具有顯著趨勢。

2 結(jié) 果

2.1 凝結(jié)芽孢桿菌對沙門氏菌感染前后蛋雞生產(chǎn)性能的影響

由表2可知，感染沙門氏菌前，與對照組相比，凝結(jié)芽孢桿菌組蛋雞生產(chǎn)性能均無顯著差異(P>0.05)，但有增加只產(chǎn)蛋量和降低料蛋比的趨勢(0.05≤P<0.10)。

表2 凝結(jié)芽孢桿菌對感染沙門氏菌前蛋雞生產(chǎn)性能的影響

同行數(shù)據(jù)肩標不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，相同或無字母表示差異不顯著(P>0.05)。下表同。

In the same row, values with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05), while with the same or no letter superscripts mean no significant difference (P>0.05). The same as below.

由表3可知，感染沙門氏菌后，凝結(jié)芽孢桿菌與沙門氏菌對生產(chǎn)性能無顯著交互作用(P>0.05)；沙門氏菌顯著降低了蛋雞平均日采食量(P<0.05)，對其他生產(chǎn)性能指標無顯著影響(P>0.05)，但有提高料蛋比趨勢(0.05≤P<0.10)；凝結(jié)芽孢桿菌顯著降低了蛋雞平均日采食量 (P<0.05)，極顯著降低了料蛋比(P<0.01)，對其他生產(chǎn)性能指標無顯著影響(P>0.05)。

2.2 凝結(jié)芽孢桿菌對腸炎沙門氏菌感染蛋雞蛋品質(zhì)的影響

由表4可知，感染沙門氏菌前，與對照組相比，凝結(jié)芽孢桿菌組蛋殼重/蛋重極顯著增加(P<0.01)，其他指標無顯著差異(P>0.05)，但有增加蛋殼強度的趨勢(0.05≤P<0.10)。

由表5可知，感染沙門氏菌后，凝結(jié)芽孢桿菌與沙門氏菌對蛋雞蛋品質(zhì)無顯著交互作用(P>0.05)；沙門氏菌對蛋品質(zhì)無顯著影響(P>0.05)，但有降低蛋黃重/蛋重的趨勢(0.05≤P<0.10)；凝結(jié)芽孢桿菌對蛋品質(zhì)無顯著影響(P>0.05)。

2.3 凝結(jié)芽孢桿菌對感染沙門氏菌后蛋雞血漿生化指標的影響

由表6可知，感染沙門氏菌后，凝結(jié)芽孢桿菌與沙門氏菌對血漿總蛋白含量、鈣/磷及谷草轉(zhuǎn)氨酶活性有顯著交互作用(P<0.05)；沙門氏菌顯著降低了血漿總膽固醇、甘油三酯和鈣含量(P<0.05)，顯著提高了血漿谷草轉(zhuǎn)氨酶活性(P<0.05)，極顯著提高了血漿堿性磷酸酶活性(P<0.01)，對其他血漿生化指標無顯著影響(P>0.05)，但有提高血漿總蛋白和球蛋白含量的趨勢(0.05≤P<0.10)，有降低血漿低密度脂蛋白含量和鈣/磷的趨勢(0.05≤P<0.10)。凝結(jié)芽孢桿菌顯著降低了血漿總膽固醇和甘油三酯含量(P<0.05)，對其他血漿生化指標無顯著影響(P>0.05)，但有提高血漿谷草轉(zhuǎn)氨酶活性的趨勢(0.05≤P<0.10)，有降低血漿低密度脂蛋白含量的趨勢(P<0.10)。

表3 凝結(jié)芽孢桿菌對感染沙門氏菌后蛋雞生產(chǎn)性能的影響

表4 凝結(jié)芽孢桿菌對感染沙門氏菌前蛋雞蛋品質(zhì)的影響

3 討 論

3.1 凝結(jié)芽孢桿菌對蛋雞生產(chǎn)性能的影響

李國建[4]和劉磊等[5]研究表明，添加適量益生菌替代抗生素可以提升畜禽平均日增重與飼料轉(zhuǎn)化效率。Hung等[6]研究表明，肉雞飼糧中添加凝結(jié)芽孢桿菌可以提高肉雞飼料轉(zhuǎn)化效率。Zhou等[7]研究結(jié)果表明，飼糧中添加凝結(jié)芽孢桿菌可以顯著提高廣西黃雞的生產(chǎn)性能。與上述結(jié)果類似，本試驗發(fā)現(xiàn)感染沙門氏菌蛋雞飼喂凝結(jié)芽孢桿菌后，可以顯著增加采食量和降低料蛋比，同時一定程度改善產(chǎn)蛋率、平均蛋重和只產(chǎn)蛋重等生產(chǎn)性能。

本試驗發(fā)現(xiàn)，蛋雞感染腸炎沙門氏菌后對生長性能具有不利影響，沙門氏菌感染顯著降低蛋雞采食量和提高料蛋比，蛋雞感染腸炎沙門氏菌后，飼糧添加凝結(jié)芽孢桿菌對沙門氏菌感染導致的生長性能降低具有一定的緩解作用。王蔚淼等[8]研究表明，凝結(jié)芽孢桿菌對腸道細菌(如大腸桿菌、沙門氏菌等)引起的腸道感染有拮抗作用，綜上，在沙門氏菌感染情況下，飼糧中添加凝結(jié)芽孢桿菌可能具有保護機體健康和緩解病原菌應激等作用。

表5 凝結(jié)芽孢桿菌對感染沙門氏菌后蛋雞蛋品質(zhì)的影響

表6 凝結(jié)芽孢桿菌對感染沙門氏菌后蛋雞血漿生化指標的影響

3.2 凝結(jié)芽孢桿菌對蛋雞蛋品質(zhì)的影響

本試驗研究發(fā)現(xiàn)，蛋雞感染沙門氏菌前后，飼糧中添加凝結(jié)芽孢桿菌對試驗雞蛋品質(zhì)無顯著影響，但可一定程度上提高蛋殼厚度、蛋殼強度等。Xu等[9]研究指出，在飼糧中添加適量枯草芽孢桿菌可以增加蛋殼厚度、蛋黃顏色以及哈氏單位。李俊波等[10]發(fā)現(xiàn)飼糧中添加枯草芽孢桿菌可改善蛋重、蛋殼厚度以及哈氏單位等，并指出提高蛋殼厚度以及降低蛋的破損率可能與血鈣的水平以及鈣的利用率相關。Nahashon等[11]證明了益生菌可以使得蛋雞礦物質(zhì)鹽類比如鈣和磷吸收更加充分，提高血清中鈣、磷水平，利于產(chǎn)蛋時鈣的充分供應。

3.3 凝結(jié)芽孢桿菌對蛋雞血漿生化指標的影響

動物機體血漿生化指標與機體代謝、營養(yǎng)狀況和疾病有密切關系，通過檢測血漿生化指標可一定程度上反映動物機體在生理和病理上的變化。地衣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌等益生菌能產(chǎn)生堿性、中性或酸性蛋白酶，從而促進飼糧中蛋白質(zhì)的消化吸收[12]?；o等[13]和陳家祥[14]等研究表明，在肉仔雞中添加枯草芽孢桿菌或地衣芽孢桿菌能提高血漿總蛋白和白蛋白含量，本試驗和上述報道基本一致，凝結(jié)芽孢桿菌與沙門氏菌對蛋雞血漿總蛋白有顯著的交互作用，凝結(jié)芽孢桿菌在蛋雞感染沙門氏菌后血漿總蛋白顯著升高，反映宿主在凝結(jié)芽孢桿菌與沙門氏菌相互作用下，機體產(chǎn)生相關應激反應。

血漿膽固醇、甘油三酯是反映機體脂質(zhì)代謝的主要指標。呂尊周等[15]研究發(fā)現(xiàn)添加芽孢桿菌對血漿甘油三酯的含量顯著降低影響。腸道微生物在脂類物質(zhì)循環(huán)起著重要的作用，微生物能將游離脂肪酸轉(zhuǎn)化成不同甘油三酯形式，從而阻礙了甘油三酯進入血液。血漿中膽固醇含量受到參與膽固醇合成的關鍵酶——羥甲基戊二酸單酰輔酶A活性的影響。益生菌可以抑制膽固醇合成過程中的關鍵酶，所以芽孢桿菌可能通過抑制羥甲基戊二酸單酰輔酶A活性來降低血清膽固醇的含量[16]。本試驗添加凝結(jié)芽孢桿菌可以顯著降低血漿總膽固醇和甘油三酯含量，與李福彬等[17]的報道結(jié)果相一致，李福彬等[17]研究發(fā)現(xiàn)添加地衣芽孢桿菌可以降低血清膽固醇。

血漿中堿性磷酸酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶等在臨床上是評價肝、胰腺和腎臟等內(nèi)臟功能正常與否的重要指標。本試驗結(jié)果表明，蛋雞感染沙門氏菌后可血漿中谷草轉(zhuǎn)氨酶和堿性磷酸酶含量顯著升高，但作用機制有待于進一步研究。

本試驗結(jié)果表明，添加凝結(jié)芽孢桿菌可提高蛋雞血漿中鈣、磷含量，表明凝結(jié)芽孢桿菌可促進蛋雞鈣、磷的消化吸收，可能是凝結(jié)芽孢桿菌代謝產(chǎn)生了有機酸，促進了鈣、磷的消化吸收。徐海燕等[18]研究發(fā)現(xiàn)，芽孢桿菌發(fā)酵液中含有一定量的乙酸、丙酸、丁酸等有機酸，這些物質(zhì)可以降低腸道pH，促進礦物質(zhì)吸收。

4 結(jié) 論

① 腸炎沙門氏菌使蛋雞平均日采食量顯著降低，料蛋比顯著增加，但對其他生產(chǎn)性能指標、蛋品質(zhì)無顯著影響；血漿中總膽固醇和甘油三酯含量顯著降低，谷草轉(zhuǎn)氨酶和堿性磷酸酶含量顯著升高，鈣、磷含量具有降低的趨勢。

② 飼糧中添加凝結(jié)芽孢桿菌使感染沙門氏菌后蛋雞料蛋比顯著降低，平均日采食量顯著降低，其他生產(chǎn)性能指標得到改善，但對蛋品質(zhì)無顯著影響；顯著降低血漿總膽固醇和甘油三酯的含量，同時改善血漿蛋白質(zhì)代謝和脂質(zhì)代謝。

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EffectsofBacilluscoagulansonPerformance,EggQualityandPlasmaBiochemicalParametersofLayingHensInfectedwithSalmonella

HUANG Shimeng HUANG Churan ZHAO Lihong ZHANG Jianyun JI Cheng MA Qiugang*

(StateKeyLaboratoryofAnimalNutrition,ChinaAgriculturalUniversity,Beijing100193,China)

This study was conducted to evaluate the effects ofBacilluscoagulanson performance, egg quality of laying hens before and afterSalmonellainfection, and to study the effects ofBacilluscoagulanson plasma biochemical indices of laying hens afterSalmonellainfection. A total of 400Salmonellanegative, healthy Jinghong laying hens with similar laying rate (P>0.05) were randomly divided into 4 groups (groups A, B, C and D) with 5 replicates per group and 20 birds per replicate. The control group (groups A and C) was fed a basal diet, and theBacilluscoagulansgroup (groups B and D) was fed the basal diet supplemented with 2.5×1010CFU/kgBacilluscoagulans. After 1 week, groups C and D were taken orally quantitativeSalmonellaentericaserovarEnteritidis suspension (1×108CFU/mL) two days in a row, groups A and B were taken orally the same amount of sterile phosphate buffer saline (PBS), kept feeding for 3 weeks. The results showed as follows: 1) beforeSalmonellainfection,Bacilluscoagulanshad no significant effect on performance of laying hens (P>0.05). AfterSalmonellainfection,Salmonellasignificantly decreased the average daily feed intake (P<0.05);Bacilluscoagulanssignificantly decreased the feed to egg ratio (P<0.01), and significantly decreased the average daily feed intake (P<0.05). 2) BeforeSalmonellainfection,Bacilluscoagulanssignificantly increased the eggshell weight/egg weight (P<0.01). AfterSalmonellainfection,SalmonellaandBacilluscoagulanshad no significant effects on egg quality indices (P>0.05). 3) AfterSalmonellainfection,Bacilluscoagulanssignificantly reduced the contents of total cholesterol and triglyceride in plasma (P<0.05);Salmonellasignificantly reduced the contents of total cholesterol, triglyceride and calcium in plasma (P<0.05), and significantly increased the plasma glutamic-oxalacetic transaminase activity (P<0.05);BacilluscoagulansandSalmonellahad significant interaction on total protein content, calcium/phosphorus and glutamic-oxalacetic transaminase activity in plasma (P<0.05). It is concluded thatBacilluscoagulanscan improve the performance and egg quality of laying hens, also has a certain degree of improvement in the protein metabolism, lipid metabolism, liver function and absorption of calcium and phosphorus.[ChineseJournalofAnimalNutrition,2017,29(12)：4534-4541]

laying hens;Bacilluscoagulans;Salmonella; performance

10.3969/j.issn.1006-267x.2017.12.035

S831

A

1006-267X(2017)12-4534-08

2017-06-15

國家蛋雞產(chǎn)業(yè)技術體系(CARS-41-K15)；北京市農(nóng)業(yè)局試驗示范項目(20140125)；公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研專項(201403047)

黃世猛(1991—)，男，江西南昌人，博士研究生，動物營養(yǎng)與飼料科學專業(yè)。E-mail： shimengh@hotmail.com

*通信作者：馬秋剛，副教授，博士生導師，E-mail： maqiugang@cau.edu.cn

*Corresponding author, associate professor, E-mail: maqiugang@cau.edu.cn

(責任編輯 武海龍)