王素琴，沈瑩華，于福利

（陜西省農(nóng)藥管理檢定所，西安 710003）

◆環(huán)境與殘留◆

苯醚甲環(huán)唑和嘧菌酯在石榴中的殘留行為與合理使用評(píng)價(jià)

王素琴，沈瑩華，于福利

（陜西省農(nóng)藥管理檢定所，西安 710003）

采用田間小區(qū)方法進(jìn)行苯醚甲環(huán)唑和嘧菌酯在石榴中的最終殘留和消解動(dòng)態(tài)試驗(yàn)，為兩者的合理使用及其安全性評(píng)價(jià)提供科學(xué)依據(jù)。樣品經(jīng)乙腈提取，固相萃取法凈化，GC-ECD進(jìn)行測(cè)定。苯醚甲環(huán)唑和嘧菌酯在石榴中的降解規(guī)律符合一級(jí)動(dòng)力學(xué)指數(shù)模型，消解半衰期分別為2.7～7.7 d和2.3～5.9 d。325 g/L苯甲·嘧菌酯懸浮劑在有效成分用量216.7～325.1 mg/kg，施藥3～4次，施藥間隔7～10 d，采收間隔21 d時(shí)，苯醚甲環(huán)唑在石榴籽中的殘留量＜0.02 mg/kg，嘧菌酯在石榴籽中的殘留量≤0.050 mg/kg。膳食風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估結(jié)果表明：兩者對(duì)8類(lèi)人群的膳食攝入風(fēng)險(xiǎn)均低。采用325g/L苯甲·嘧菌酯懸浮劑防治石榴葉斑病，建議有效成分最高用藥量為216.7 mg/kg，每季宜施藥2～3次，安全間隔期21 d。

苯醚甲環(huán)唑；嘧菌酯；石榴；消解動(dòng)態(tài)；殘留；膳食暴露；風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

石榴為石榴科植物，漢朝年間由西域引進(jìn)，現(xiàn)中國(guó)南北地區(qū)均有栽培[1]。石榴葉斑病是石榴的一種常見(jiàn)病害，石榴栽培區(qū)發(fā)生較普遍。該病主要危害石榴葉片，也可危害果實(shí)。植株受害嚴(yán)重時(shí)，葉片提早落光，嚴(yán)重影響植株生長(zhǎng)發(fā)育。嘧菌酯是新型甲氧基丙烯酸酯類(lèi)殺菌劑，對(duì)幾乎所有真菌病害有效。苯醚甲環(huán)唑是三唑類(lèi)殺菌劑，具有保護(hù)和治療作用。將兩者復(fù)配能有效防治石榴葉斑病[2-3]。

本文采用GC-ECD測(cè)定石榴中苯醚甲環(huán)唑和嘧菌酯的殘留量，對(duì)苯醚甲環(huán)唑和嘧菌酯在石榴中的消解規(guī)律進(jìn)行了系統(tǒng)研究，并運(yùn)用風(fēng)險(xiǎn)商對(duì)其結(jié)果進(jìn)行了評(píng)估，旨在為苯醚甲環(huán)唑和嘧菌酯在防治石榴葉斑病過(guò)程中的合理使用及其安全性評(píng)價(jià)提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試農(nóng)藥：325 g/L苯甲·嘧菌酯懸浮劑（125 g/L苯醚甲環(huán)唑＋200 g/L嘧菌酯），江陰蘇利化學(xué)股份有限公司提供。供試石榴品種：陜西為凈皮甜；安徽為紅白皮。

1.2 田間試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)地點(diǎn)：陜西西安、安徽蕭縣；試驗(yàn)時(shí)間：2013—2014年。

1.2.1 消解動(dòng)態(tài)試驗(yàn)

果實(shí)長(zhǎng)至一半大時(shí)用藥，采用手動(dòng)噴霧器均勻噴霧石榴樹(shù)全株，至藥液開(kāi)始從葉片滴下為止。有效成分用藥量為325.1 mg/kg（1 000倍稀釋液），施藥后2 h、1,3,5,7,14,21,30,45 d采樣，重復(fù)3次，處理間設(shè)保護(hù)隔離區(qū)，另設(shè)清水空白對(duì)照。

1.2.2 最終殘留試驗(yàn)

試驗(yàn)設(shè)2個(gè)施藥量：低有效成分用藥量216.7mg/kg（1 500倍稀釋液）、高有效成分用藥量325.1 mg/kg（1 000倍稀釋液）。試驗(yàn)設(shè)3次和4次施藥處理，每個(gè)處理3次重復(fù)，每個(gè)小區(qū)3株果樹(shù)，施藥間隔期7～10 d。最后1次施藥后7,14,21 d采樣。另設(shè)清水空白對(duì)照，處理間設(shè)保護(hù)帶。

1.2.3 樣品采集

采集石榴樹(shù)上、中、下、內(nèi)、外、陰、陽(yáng)部位生長(zhǎng)正常、無(wú)病害的果實(shí)，每小區(qū)采集石榴果實(shí)不少于12個(gè)，用不銹鋼刀縱向切成均勻的4瓣，取對(duì)角的2瓣收集300 g石榴籽樣品2份，分別裝入封口樣品容器中，貼好標(biāo)簽，放置-20℃冰箱中貯存?zhèn)錅y(cè)。

1.3 分析方法

1.3.1 儀器和試劑

GC-2010 Plus氣相色譜儀（帶ECD檢測(cè)器）、電子天平、勻漿機(jī)、離心機(jī)、氮吹儀、Rtx-1毛細(xì)色譜柱、弗羅里硅土柱及各種玻璃器皿。丙酮、乙腈、正己烷均為色譜純?cè)噭宦然c、碳酸鈉為分析純；淋洗液：丙酮＋正己烷（體積比2∶8）；苯醚甲環(huán)唑標(biāo)準(zhǔn)品（99.1%）、嘧菌酯標(biāo)準(zhǔn)品（99.0%），國(guó)家農(nóng)藥質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心（北京）。

1.3.2 樣品的制備

冷凍的石榴籽樣品用組織搗碎機(jī)粉碎。稱(chēng)取石榴籽樣品12.5 g于100 mL離心管中，加入25.0 mL乙腈，高速勻漿1 min，再加入4.0 g無(wú)水氯化鈉渦旋混合1 min，2 500 r/min離心5 min，靜置1 h。取上清液5.0 mL置于20 mL刻度試管中，于70℃下通氮?dú)庹舭l(fā)近干，加入2.5 mL淋洗液后蓋上塞子，待凈化。

將弗羅里硅土柱依次用5.0 mL淋洗液、5.0 mL正己烷預(yù)淋洗，當(dāng)溶劑液面到達(dá)柱吸附層表面時(shí)，立即倒入上述待凈化溶液，用20 mL刻度試管接收洗脫液。用5.0 mL淋洗液淋洗刻度試管，并重復(fù)1次。將盛有淋洗液的刻度試管置于氮吹儀上，在水浴溫度50℃下通氮?dú)庹舭l(fā)近干，用淋洗液定容至2.5 mL，在混合器上混勻，移入樣品瓶中，待測(cè)。

1.3.3 實(shí)驗(yàn)條件

色譜柱：Rtx-1柱（30 m×0.53 mm，1.0 μm）；進(jìn)樣口溫度：280℃，不分流模式；載氣流速（N2）：67.0mL/min；升溫程序：起始溫度200℃，保持3 min，以15℃/min升到250℃，保持11 min，再以15℃/min升到280℃，保持4 min；檢測(cè)器溫度：290℃；進(jìn)樣體積：0.2 μL。

1.4 膳食暴露風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

1.4.1 風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估數(shù)據(jù)來(lái)源

石榴籽中苯醚甲環(huán)唑和嘧菌酯殘留量（mg/kg）采用試驗(yàn)測(cè)定數(shù)據(jù)；目標(biāo)人群平均體重（kg）采用文獻(xiàn)[1]中發(fā)布的不同年齡及性別人群的體重；消費(fèi)數(shù)據(jù)由文獻(xiàn)[4]計(jì)算而來(lái)。1.4.2 膳食暴露量評(píng)估

膳食暴露量主要用來(lái)評(píng)估可能接觸的暴露途徑及劑量水平，明確實(shí)際與預(yù)期暴露的劑量水平及可能受危害的敏感人群。通過(guò)食用被污染的食物是人群暴露的主要途徑，本研究?jī)H以石榴為單一的農(nóng)藥殘留暴露途徑，以風(fēng)險(xiǎn)商（RQ，risk quotient）和風(fēng)險(xiǎn)概率（RP，risk probability）分別進(jìn)行慢性風(fēng)險(xiǎn)和急性風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，根據(jù)公式（1）～公式（3）計(jì)算。

式（1）中：EED為估計(jì)膳食暴露量，mg/(kg bw·d)；RL為試驗(yàn)中獲得的石榴中農(nóng)藥殘留量（本文采用試驗(yàn)測(cè)得的最大殘留量），mg/kg；FI為日均食物攝入量，kg/d；bw為體重（不同人群體重見(jiàn)表1），kg。

表1 不同人群的體重和石榴攝入量

式（2）中：RQ為風(fēng)險(xiǎn)商；ADI為每日允許攝入量，mg/(kg bw·d)。

RQ≥1，風(fēng)險(xiǎn)不可接受；RQ＜1，風(fēng)險(xiǎn)可接受。

式（3）中：RP為風(fēng)險(xiǎn)概率，%；ARfD為急性參考劑量，mg/(kg bw·d)。

RP≥100%，風(fēng)險(xiǎn)不可接受；RP＜100%，風(fēng)險(xiǎn)可接受。

2 結(jié)果與討論

2.1 添加回收率

在空白石榴籽樣品中，添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為0.02,0.1,0.5 mg/kg的混合標(biāo)樣溶液，放置2 h后，提取、檢測(cè)。嘧菌酯的添加回收率在90.7%～116.3%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在2.3%～5.9%之間；苯醚甲環(huán)唑的添加回收率在85.1%～110.2%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在4.8%～6.0%之間（見(jiàn)表2）。

表2 石榴籽中嘧菌酯和苯醚甲環(huán)唑的添加回收率

方法符合農(nóng)藥殘留分析要求。

2.2 苯醚甲環(huán)唑和嘧菌酯在石榴中的殘留消解動(dòng)態(tài)

2013—2014年，陜西、安徽石榴中的消解動(dòng)態(tài)試驗(yàn)結(jié)果表明：苯醚甲環(huán)唑在石榴中的原始沉積量在0.29～0.53 mg/kg之間，半衰期在2.7～7.7 d之間；嘧菌酯在石榴中的原始沉積量為0.21～0.87 mg/kg，半衰期在2.3～5.9 d之間。2種農(nóng)藥均屬于易降解農(nóng)藥（T1/2＜30 d），兩者消解動(dòng)態(tài)符合一級(jí)動(dòng)力學(xué)方程，消解行為差異不明顯（見(jiàn)表3）。

表3 嘧菌酯和苯醚甲環(huán)唑在石榴中的消解動(dòng)態(tài)方程、相關(guān)系數(shù)及半衰期

2.3 最終殘留量

2013—2014年，325 g/L苯甲·嘧菌酯懸浮劑以有效成分用量為216.7～325.1 mg/kg，在果實(shí)長(zhǎng)至一半大小時(shí)施藥3～4次（間隔7～10 d）。陜西、安徽最終殘留試驗(yàn)結(jié)果顯示：采收間隔7 d時(shí)，石榴籽中苯醚甲環(huán)唑的殘留量在＜0.02～0.078 mg/kg之間；石榴籽中嘧菌酯的殘留量在＜0.02～0.16 mg/kg之間。采收間隔14 d時(shí)，苯醚甲環(huán)唑在石榴籽中的殘留量均＜0.02 mg/kg；嘧菌酯在石榴籽中的殘留量為＜0.02～0.081 mg/kg。采收間隔期為21 d時(shí)，苯醚甲環(huán)唑在石榴籽中的殘留量均＜0.02 mg/kg；嘧菌酯在石榴籽中的殘留量為＜0.02～0.050 mg/kg。具體結(jié)果見(jiàn)表4。

2.4 膳食攝入風(fēng)險(xiǎn)

苯醚甲環(huán)唑和嘧菌酯的ADI值分別為0.01和0.2 mg/(kg bw·d)[5]。根據(jù)JMPR評(píng)估報(bào)告，嘧菌酯屬于不需要制定ARfD的農(nóng)藥，苯醚甲環(huán)唑的ARfD值為0.3 mg/(kg bw·d)[6-7]。風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估結(jié)果表明（表5和表6）：距最后1次施藥間隔7,14,21 d時(shí)，石榴籽中苯醚甲環(huán)唑和嘧菌酯對(duì)8類(lèi)人群的風(fēng)險(xiǎn)商（RQ）均遠(yuǎn)小于1，慢性風(fēng)險(xiǎn)可接受；苯醚甲環(huán)唑?qū)?類(lèi)人群的RP亦遠(yuǎn)小于100%，急性風(fēng)險(xiǎn)可接受。

表4 苯醚甲環(huán)唑和嘧菌酯在石榴籽中的最終殘留量

表5 不同采收間隔期嘧菌酯的膳食暴露量和風(fēng)險(xiǎn)商

表6 不同采收間隔期苯醚甲環(huán)唑的膳食暴露量、風(fēng)險(xiǎn)商和風(fēng)險(xiǎn)概率

3 結(jié)論

通過(guò)田間試驗(yàn)，采用GC-ECD方法，研究了苯醚甲環(huán)唑和嘧菌酯在石榴中的消解規(guī)律、最終殘留水平以及膳食攝入風(fēng)險(xiǎn)。結(jié)果表明：苯醚甲環(huán)唑和嘧菌酯在石榴中降解規(guī)律符合一級(jí)動(dòng)力學(xué)指數(shù)模型，其消解半衰期分別為2.7～7.7 d和2.3～5.9 d。325 g/L苯甲·嘧菌酯懸浮劑用藥量為216.7～325.1 mg/kg，施藥3～4次，施藥間隔7～10 d，采收間隔21 d時(shí)，苯醚甲環(huán)唑在石榴籽中的殘留量均＜0.02 mg/kg；嘧菌酯在石榴籽中的殘留量為＜0.02～0.050 mg/kg。急（慢）性膳食風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估結(jié)果表明：兩者對(duì)8類(lèi)人群的急（慢）性膳食攝入風(fēng)險(xiǎn)均較低。因此，建議采用325g/L苯甲·嘧菌酯懸浮劑防治石榴葉斑病，有效成分用藥量為216.7 mg/kg，施藥2～3次，安全間隔期21 d。

[1]王隴德.中國(guó)居民營(yíng)養(yǎng)與健康狀況調(diào)查報(bào)告之一:2002綜合報(bào)告[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2007.

[2]候生英,王愛(ài)玲.張貴,等.3%苯醚甲環(huán)唑懸浮種衣劑防治小麥全蝕病試驗(yàn)[J].植物保護(hù),2005,31(5):88-90.

[3]薄海波,畢陽(yáng),陳立仁.氣相色譜法測(cè)定甜瓜和蘋(píng)果中嘧菌酯殘留[J].分析化學(xué),2005,33(5):695-698.

[4]金水高.中國(guó)居民營(yíng)養(yǎng)與健康狀況調(diào)查報(bào)告之十:2002營(yíng)養(yǎng)與健康狀況數(shù)據(jù)集[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2008.

[5]張麗英,陶傳江.農(nóng)藥每日允許攝入量手冊(cè) [M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2015.

[6]Food and Agriculture Organization of the United Nations.Azoxystro-bin[EB/OL].[2017-06-05].http://www.fao.org/fileadmin/templates/agphome/documents/Pests_Pesticides/JMPR/Evaluation13/Azoxystrobin.pdf.

[7]Food and Agriculture Organization of the United Nations.Difenoconazole[EB/OL].[2017-06-05].http://www.fao.org/fileadmin/tem plates/agphome/documents/Pests_Pesticides/JMPR/Evaluation2015/DIFENOCONAZOLE__224_.pdf.

Residue Dynamics and Reasonable Use of Difenoconazole and Azoxystrobin in Pomegranate

WANG Su-qin,SHEN Ying-hua,YU Fu-li
(Institute for the Control of Agrochemicals of Shaanxi Province,Xi'an 710003,China)

To evaluate the residue dynamics of difenoconazole and azoxystrobin in pomegranate,and provide the scientific basis for rational use and safety assessment,the field experiments were carried out in 2013-2014.The samples were extracted with acetonitrile,cleaned up by Florisil extract column and detected by GC-ECD.The half-lives of difenoconazole and azoxystrobin in pomegranate were 2.7-7.7 d and 2.3-5.9 d,respectively.The residues of difenoconazole in pomegranate were less than 0.02 mg/kg,the residues of azoxystrobin were less than or equal to 0.050 mg/kg.The results indicated that the RQ and RP were under 1 and 100%,respectively.The preharvest interval of difenoconazole+azoxystrobin 325 g/L SC was 21 d,it could be sprayed 2-3 times,and the highest dose was 216.7 mg/kg.

difenoconazole;azoxystrobin;pomegranate;degradation dynamics;residue;dietary exposure;risk assessment

TQ 450.2＋63

A

10.3969/j.issn.1671-5284.2017.06.013

2017-06-05

王素琴（1982—），女，湖南省攸縣人，主要從事農(nóng)藥質(zhì)量與殘留檢測(cè)工作。E-mail：wangsuqin1982@163.com

（責(zé)任編輯：柏亞羅）