張?jiān)魄?，孟祥龍，唐秀，范廣宇，徐文科

（連云港出入境檢驗(yàn)檢疫局，江蘇連云港222042）

進(jìn)口植物油脂中農(nóng)藥殘留檢測(cè)的前處理方法研究

張?jiān)魄?，孟祥龍，唐秀，范廣宇，徐文科

（連云港出入境檢驗(yàn)檢疫局，江蘇連云港222042）

通過(guò)對(duì)進(jìn)口植物油脂的前處理方法研究，即對(duì)傳統(tǒng)的液液萃取方法進(jìn)行改進(jìn)，結(jié)合QuEChERS法、固相萃取法、優(yōu)化后的GPC凝膠3種凈化方法分析比較，發(fā)現(xiàn)QuEChERS法效果更理想，有效解決了油脂對(duì)農(nóng)殘測(cè)定的干擾問(wèn)題，通過(guò)對(duì)油脂樣品3個(gè)添加水平的6個(gè)平行樣品分析，該方法的線性范圍：0.02 mg/L～1.0 mg/L，油脂9項(xiàng)農(nóng)殘檢出限及定量限范圍分別為：0.01 μg/kg～0.65 μg/kg，0.04 μg/kg～2.16 μg/kg，本方法相關(guān)指標(biāo)均滿足檢測(cè)要求，適用于進(jìn)口油脂快速檢測(cè)。

氣相色譜-質(zhì)譜法（GC-MS）；農(nóng)藥殘留；進(jìn)口油脂

我國(guó)是世界第一植物油消費(fèi)大國(guó)，由于在油料作物的種植過(guò)程中大量施用農(nóng)藥，以及在加工過(guò)程中溶劑提取、高溫加熱、吸附劑的加入都可能導(dǎo)致殘留在油料種子中的農(nóng)藥分解、吸附[1]，使得食用植物油中的農(nóng)藥殘留問(wèn)題日益嚴(yán)重，隨著農(nóng)業(yè)科技與經(jīng)濟(jì)水平的提高，人民在滿足自身消費(fèi)需求的同時(shí)，也越來(lái)越關(guān)注植物油中的農(nóng)藥殘留問(wèn)題，國(guó)際食品法典委員會(huì)（CodexAlimentariusCommission，簡(jiǎn)稱 CAC）、世界衛(wèi)生組織（World Health Organization簡(jiǎn)稱WHO）、聯(lián)合國(guó)糧食及農(nóng)業(yè)組織（Food and Agriculture Organization簡(jiǎn)稱FAO）、歐盟、美國(guó)、日本等對(duì)植物油中的農(nóng)藥殘留均有嚴(yán)格的規(guī)定。已經(jīng)于2017年6月實(shí)施的GB 2763-2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中農(nóng)藥殘留最大限量》對(duì)棉籽油、花生油、菜籽油、棕櫚油等農(nóng)藥殘留限量都做了明確規(guī)定[2]，因此，研究建立準(zhǔn)確有效、同時(shí)能檢測(cè)植物油中多種農(nóng)藥的檢測(cè)方法非常重要。

植物油中農(nóng)殘檢測(cè)的關(guān)鍵是要去除其中的油脂大分子物質(zhì)，不進(jìn)行凈化處理或凈化不徹底會(huì)嚴(yán)重污染氣質(zhì)聯(lián)用儀的色譜柱，縮短其使用壽命[3]，所以植物油脂的前處理至關(guān)重要，目前植物油中農(nóng)藥殘留檢測(cè)的前處理方法主要有液液萃取冷凍脫脂法[4]、QuECh－ERS 法、固相萃取法[5-6]、GPC 法等[7]。

冷凍脫脂法耗時(shí)較長(zhǎng)，固相萃取凈化方法不能很好地同時(shí)兼顧多種目標(biāo)農(nóng)藥且固相萃取小柱價(jià)格高、操作步驟多，凝膠色譜法儀器昂貴，樣品處理耗時(shí)較長(zhǎng)，不利于大量樣品快速測(cè)定。QuEChERS法是一種分散固相萃取方法，其因快速、簡(jiǎn)單、廉價(jià)、有效、可靠和安全而得名[8]，已被廣泛用于蔬菜、水果、茶葉[9-11]等樣品中農(nóng)藥殘留的前處理過(guò)程，但在植物油中的應(yīng)用研究還不多。本研究以液液萃取結(jié)合QuEChERS法及固相萃取法、GPC凝膠凈化處理方法作為前處理手段，對(duì)傳統(tǒng)的液液萃取方法加以改進(jìn)，輔以氣質(zhì)聯(lián)用儀建立植物油脂中9種主要農(nóng)藥殘留的最佳檢測(cè)方法，并用于進(jìn)口植物油脂的農(nóng)藥檢測(cè)。

1 材料與方法

1.1 儀器

GC/MS 7890-5975 氣相色譜／質(zhì)譜聯(lián)用儀（EI）、HP-5MS毛細(xì)管柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）、GC/MS 7890-5975C氣相色譜／質(zhì)譜聯(lián)用儀（NCI）、HP-5MS毛細(xì)管柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）：美國(guó) Agilent公司；XW-80A旋渦混合器：上海青浦滬西儀器廠；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：德國(guó) Heidolph公司；氮吹儀（OA-SYS）：美國(guó)Organomation公司；GPC 凝膠凈化設(shè)備（ULTRA 10836）：德國(guó)海道夫公司；TDL-40C臺(tái)式離心機(jī)：上海安亭公司；固相萃取裝置；分液漏斗。

1.2 材料

樂(lè)果、腐霉利、七氯、倍硫磷、順-氯丹、反-氯丹、α-硫丹、β-硫丹及硫丹硫酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液（均為100 μg/mL）：農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所；有機(jī)溶劑均為色譜純；PSA固相萃取粉末、C18固相萃取吸附劑、中性氧化鋁柱（6 mL/1 g）：美國(guó) Agilent公司。

1.3 方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

分別準(zhǔn)確移取100 μL的100 μg/mL的幾種標(biāo)準(zhǔn)溶液混合，用丙酮稀釋到1 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，然后用丙酮進(jìn)一步稀釋成一系列的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.3.2 油脂樣品前處理

1.3.2.1 改進(jìn)的液液萃取法提取

準(zhǔn)確稱取1.00 g植物油樣品，加入10 mL乙腈飽和的正己烷溶劑充分溶解，倒入分液漏斗中，在分液漏斗中加入正己烷飽和的乙腈溶劑15 mL提取，下層乙腈層經(jīng)加入少許無(wú)水硫酸鈉的漏斗過(guò)濾于平底燒瓶中，如此重復(fù)提取3次于平底燒瓶中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器蒸發(fā)近干，水浴溫度設(shè)為38℃，待轉(zhuǎn)移。

1.3.2.2 油脂樣品凈化

QuEChERS法：將1.3.2.1平底燒瓶中殘?jiān)帽芟?，每次?.5 mL，共轉(zhuǎn)移4次，轉(zhuǎn)移液收集于10 mL的試管中，把收集到的液體置于38℃的水浴中氮?dú)獯抵两?，用丙酮定容?.0 mL置于漩渦混合器中搖勻后分別添加0.1 g PSA粉末和0.10 g C18粉末后充分漩渦混合30 s后，離心5 min，轉(zhuǎn)速3 500 r/min，吸取上層樣液裝瓶。

固相萃取法：將中性氧化鋁中先后加入1.5 mL丙酮-正己烷（3∶7，體積比）試劑和5 mL左右正己烷試劑進(jìn)行活化，用1.5 mL丙酮-正己烷（1∶2，體積比）試劑轉(zhuǎn)移1.3.2.1中平底燒瓶中的殘?jiān)貜?fù)3次，上樣后再用10 mL丙酮-正己烷（3∶7，體積比）進(jìn)行洗脫，洗脫液在39℃條件下濃縮至近干，用1 mL丙酮定容，離心后裝瓶上機(jī)。

1.3.3 GPC凝膠凈化方法

準(zhǔn)確稱取1.00 g植物油樣品，加入10 mL環(huán)己烷/乙酸乙酯（1∶1，體積比），漩渦混勻，過(guò) 0.22 μm 濾膜后入GPC儀中凈化，以Bio-Beads S-X3填料，柱長(zhǎng)45cm，流速5mL/min，預(yù)洗時(shí)間 1050s，選擇收集 1050 s～1 850 s的流出組分，使用自動(dòng)濃縮功能將樣品定量濃縮到2 mL，裝瓶，供GC-MS測(cè)定。

2 結(jié)果與討論

2.1 儀器方法選擇

經(jīng)過(guò)多次上機(jī)對(duì)比，GC/MS 7890-5975氣相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用儀（EI）對(duì)于樂(lè)果、腐霉利、氯丹、倍硫磷、七氯幾種農(nóng)藥?kù)`敏度高，定性能力強(qiáng)，最終選取進(jìn)樣口溫度250℃，流速1 mL/min，柱溫程序初溫50℃，輔助通道溫度280℃，進(jìn)樣量1 μL，不分流進(jìn)樣，柱子：HP-5MS（30 m×0.25 mm，0.25 μm），升溫程序：50 ℃保持2 min，以20℃/min速度升至180℃，再以10℃/min升至240℃，保持4 min。

離子源：EI，離子源溫度150℃，四級(jí)桿溫度150℃，發(fā)射電流34.6 μA，溶劑延遲6 min；載氣：高純氦氣，GC/MS 7890-5975C氣相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用儀（CI）對(duì)于含電負(fù)性基團(tuán)的農(nóng)藥有很高的靈敏度，定性能力和抗干擾能力強(qiáng)，適合于三種硫丹類農(nóng)藥的檢測(cè)。經(jīng)過(guò)多次上機(jī)比較選取進(jìn)樣口溫度250℃，流速1 mL/min，輔助通道溫度280℃，進(jìn)樣量1 μL，不分流進(jìn)樣，反應(yīng)氣高純CH4；升溫程序：80℃保持1 min，以30℃/min速度升至130℃，再以10℃/min升至260℃，保持1 min。

根據(jù)各種農(nóng)藥全掃描質(zhì)譜圖及譜庫(kù)檢索確定各種農(nóng)藥的定量離子及定性離子見(jiàn)表1。

表1 各種農(nóng)藥的定量及定性離子Table 1 Characteristic fragment and Quantitative fragment of pesticides

2.2 提取溶劑的選擇

前處理試驗(yàn)常用的溶劑主要有乙腈，正己烷，乙酸乙酯，由于乙腈在提取過(guò)程中溶解的油脂較少，相應(yīng)的減少了基質(zhì)干擾，而選擇由正己烷飽和的乙腈溶液是為了減少已經(jīng)溶于正己烷的油脂成分進(jìn)入乙腈層，減少油脂干擾。

2.3 QuEChERS法固相萃取劑的選擇

QuEChERS法采用乙腈為提取劑，PSA作凈化劑去除基質(zhì)干擾物質(zhì)，已經(jīng)被廣泛用于水果蔬菜樣品的前處理。而油脂類基質(zhì)更為復(fù)雜，脂質(zhì)含量較高，需要必要的除脂過(guò)程。C18粉末能夠去除非極性物質(zhì)，故本研究考察了PSA及C18不同用量的凈化效果。最后選擇了PSA用量100 mg，見(jiàn)圖1，同理，最終確定C18用量為100 mg。

圖1 PSA用量對(duì)基線的影響Fig.1 Effect of dosage of the PSA on baseline

2.4 GPC樣品采集時(shí)間的選擇

本研究考察了GPC最佳時(shí)間切割點(diǎn)的選擇[12-13]，0～1 000 s之間每 200 秒收集一份樣品，1 000 s～2 000 s之間每50秒收集一份樣品，共收集25份樣品，分別上機(jī)進(jìn)行氣質(zhì)聯(lián)用儀檢測(cè)，結(jié)果表明，第1 050秒以后的收集液中開(kāi)始檢出農(nóng)藥成分，而第1 850秒以后沒(méi)有農(nóng)藥成分檢出，所以本方法選擇GPC收集時(shí)間為1 050 s～1 850 s。

2.5 洗脫溶劑選擇

以丙酮和正己烷的混合溶液為洗脫劑，分別配制丙酮和正己烷的體積比為 1 ∶9、2 ∶8、3 ∶7、4 ∶6、5 ∶5的混合溶劑，其數(shù)據(jù)見(jiàn)表2。

表2 洗脫溶劑的影響Table 2 Effect of elution solvent

表2結(jié)果顯示，丙酮和正己烷體積比為3∶7時(shí)回收率達(dá)到最大，因此，最終選用丙酮與正己烷體積比為3∶7的混合溶劑為洗脫劑。

2.6 前處理方法對(duì)比

采用3種處理方式，分別為改進(jìn)的液液萃取法結(jié)合QuEChERS法、固相萃取法和優(yōu)化后的GPC凝膠凈化方法，通過(guò)加標(biāo)回收來(lái)比較提取效果。在每種提取試驗(yàn)中，每種方法處理3個(gè)加標(biāo)樣品和1個(gè)基質(zhì)標(biāo)樣，加標(biāo)量50 μg/kg，采取3種不同的凈化方法的添加回收數(shù)據(jù)見(jiàn)表3。

3種提取方式平均回收率均在75%以上，固相萃取法平均回收率87.9%，RSD為7.2%；QuEChERS法平均回收率86.9%，RSD為5.8%；GPC凝膠凈化方法平均回收率為77.5%，RSD為7.4%。相對(duì)來(lái)說(shuō)前兩種處理方法回收率較高，效果較佳，比GPC凝膠凈化方法處理效果好，同時(shí)，QuEChERS法比固相萃取法RSD低且除雜效果明顯較好，見(jiàn)圖2，A代表固相萃取法空白樣品基線，B代表QuEChERS法空白樣品基線，因此，綜合比較選用改進(jìn)的液液萃取結(jié)合QuEChERS法。

表3 9種農(nóng)藥不同前處理方式對(duì)比數(shù)據(jù)Table 3 Comparison of data of different methods of pretreatment of nine pesticides

2.7 標(biāo)準(zhǔn)曲線、回收率、精密度、檢出限

準(zhǔn)確配制質(zhì)量濃度分別為 0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、1.0 mg/L的農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液，在“2.1”條件下進(jìn)行測(cè)定，以吸收峰面積（A）對(duì)質(zhì)量濃度（ρ，mg/L）作標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到各農(nóng)藥的線性方程。結(jié)果表明：9種農(nóng)藥在0.02 mg/L～1.00 mg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)為 0.997 6～0.999 8。在 2 g（精確到 0.01 g）精煉棕櫚硬脂中分別加入0.04、0.1、0.4 mL混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（1.0 mg/L），按“1.3.2”中 QuEChERS法進(jìn)行檢測(cè)，平行試驗(yàn)6次，計(jì)算各農(nóng)藥的平均回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（數(shù)據(jù)見(jiàn)表4），9種農(nóng)藥的平均回收率78.1%～93.6%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.9%～9.9%，以3倍信噪比設(shè)定方法檢出限，10倍信噪比設(shè)定定量下限，9種農(nóng)藥方法檢出限和定量下限分別為 0.01 μg/kg～0.65 μg/kg 和0.04 μg/kg～2.16 μg/kg。試驗(yàn)結(jié)果表明，本方法可以滿足進(jìn)口植物油中9種農(nóng)藥殘留分析的要求，見(jiàn)表4。

圖2 棕櫚硬脂空白樣品經(jīng)2種方法凈化后的總離子流色譜圖Fig.2 Total ion current chromatogram of blank refined after purification by two methods

表4 9種農(nóng)藥的回收率、精密度、檢出限與定量限Table 4 Recovery，Precision，LOD and LOQ of nine pesticides

3 結(jié)論

通過(guò)對(duì)油脂前處理常用的3種方法分別進(jìn)行優(yōu)化或改進(jìn)后，并比較3種方法的處理效果，發(fā)現(xiàn)QuECh-ERS凈化方法較好，回收率較高，RSD較小，凈化效果較好，從而建立油脂的農(nóng)殘檢測(cè)QuEChERS方法，即通過(guò)液液分配提取、轉(zhuǎn)移、定容、凈化、離心等過(guò)程，最后通過(guò)氣質(zhì)聯(lián)用儀進(jìn)行分析，該方法能去除大量的油脂干擾，耗時(shí)較短，方法重現(xiàn)性好，能滿足進(jìn)口油脂的農(nóng)殘檢測(cè)要求。

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The Study on Pretreatment Methods for Determination of Pesticide Residues of Imported Plant Oils

ZHANG Yun-qing，MENG Xiang-long，TANG Xiu，F(xiàn)AN Guang-yu，XU Wen-ke
（Lianyungang Entry-exit Inspection and Quarantine Bureau，Lianyungang 222042，Jiangsu，China）

This study pay attention to the pretreatment methods of imported plant oils，comparing improved method of liquid-liquid traditional extraction combined with QuEChERS method，solid-phase extraction method to optimize GPC purification method，it showed that the QuEChERS method was more acceptable，assisted by the cold defatted method which can effectively solves of the problem of oil interference on determination of pesticide residues，by analyzing three addition levels of six parallel samples of plant oil，the linear range was：0.02 mg/L-1.0 mg/L.The range of nine oil pesticide LOD and LOQ was 0.01 μg/kg-0.65 μg/kg，0.04 μg/kg-2.16 μg/kg respectively，thus detection requirement was satisfied by related indexes of this method，suitable for rapid detection of imported oil.

gas chromatography-mass spectrometry（GC-MS）；pesticide residue；imported oil

10.3969/j.issn.1005-6521.2017.24.033

張?jiān)魄啵?987—），女（漢），助理工程師，學(xué)士，主要從事進(jìn)出口食品中農(nóng)藥殘留檢測(cè)工作。

2017-03-09