李燦鋒，陳卓，楊靜，周宗科，康鵬德，裴福興，沈彬*

(1.四川大學(xué)華西醫(yī)院骨科，四川 成都 610041；2.四川大學(xué)華西醫(yī)院轉(zhuǎn)化神經(jīng)科學(xué)中心，四川 成都 610041)

實(shí)驗(yàn)研究

miR-140在不同階段骨關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞中的表達(dá)規(guī)律及功能

李燦鋒1，陳卓2，楊靜1，周宗科1，康鵬德1，裴福興1，沈彬1*

(1.四川大學(xué)華西醫(yī)院骨科，四川 成都 610041；2.四川大學(xué)華西醫(yī)院轉(zhuǎn)化神經(jīng)科學(xué)中心，四川 成都 610041)

目的觀察人膝關(guān)節(jié)不同退變階段骨關(guān)節(jié)炎(osteoarthritis，OA)軟骨細(xì)胞中微小RNA-140(micro RNA-140，miR-140)表達(dá)規(guī)律及轉(zhuǎn)染雙鏈miR-140模擬物/抑制物(double strands-miR-140 mimic/inhibitor，ds-miR-140 mimic/inhibitor)對(duì)OA軟骨細(xì)胞功能的影響。方法根據(jù)Kellgren and Lawrence X線分級(jí)，膝關(guān)節(jié)軟骨分為正常組(O級(jí))、中期OA組(Ⅲ級(jí))和晚期OA組(Ⅳ級(jí))。各組收集軟骨標(biāo)本6～8例，體外分離及培養(yǎng)軟骨細(xì)胞，采用第2代軟骨細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)。運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction，PCR)檢測(cè)各組miR-140相對(duì)表達(dá)量及Ⅱ型膠原(collagentype Ⅱa，COL2A1)及Ⅹ型膠原(Collagentype Xa，COL10A1)的表達(dá)情況。向中期OA組軟骨細(xì)胞轉(zhuǎn)染ds-miR-140 mimic/inhibitor后，觀察軟骨形成因子SRY基因(SRY-related high mobility group box gene 9，SOX9)，COL2A1及COL10A1表達(dá)情況。結(jié)果miR-140在OA軟骨細(xì)胞中表達(dá)顯著下降，中、晚期OA組miR-140和正常組相比分別減少78.9%和94.5%(P<0.05)，晚期OA組miR-140較中期OA組減少73.9%(P<0.05)。中、晚期OA組SOX9的mRNA較正常組分別減少34.1%和49.3%(P<0.05)，COL2A1的mRNA較正常組分別減少36.7%和78.7%(P<0.05)，中、晚期OA組COL10A1的mRNA較正常組分別增加1.66倍和2.10倍(P<0.05)。向中期OA組轉(zhuǎn)染ds-miR-140 mimic/inhibitor后，SOX9的mRNA分別增加1.95倍和減少59.1%，COL2A1的mRNA分別增加1.87倍和減少68.8%(P<0.05)，COL10A1的mRNA分別減少73.0%和增加1.96倍(P<0.05)。結(jié)論miR-140在OA軟骨細(xì)胞中表達(dá)顯著下降，且隨病情加重而進(jìn)一步減少；轉(zhuǎn)染ds-miR-140 mimic可增加SOX9和COL2A1的表達(dá)，同時(shí)降低COL10A1的表達(dá)。

骨關(guān)節(jié)炎；軟骨細(xì)胞；微小RNA140；Ⅱ型膠原；X型膠原

李燦鋒，陳卓，楊靜，等.miR-140在不同階段骨關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞中的表達(dá)規(guī)律及功能[J].實(shí)用骨科雜志，2017，23(11)：995-999.

骨關(guān)節(jié)炎(osteoarthritis，OA)是一種以關(guān)節(jié)軟骨退變?yōu)橹鞯募膊?，?yán)重影響活動(dòng)能力，降低生活質(zhì)量。據(jù)統(tǒng)計(jì)，65歲以上的人群中，OA的患病率男性為60%，女性為70%[1]。OA的具體發(fā)病機(jī)制目前尚不清楚，而基因調(diào)控紊亂是其發(fā)病的一個(gè)重要因素。微小RNA-140(micro RNA-140，miR-140)是一種軟骨特異性高表達(dá)的微小RNA(microRNA，miRNA)，不僅參與調(diào)控軟骨細(xì)胞的形成與發(fā)育，而且與軟骨細(xì)胞穩(wěn)態(tài)的維持與退變關(guān)系密切[2-4]。敲除miR-140的小鼠關(guān)節(jié)軟骨會(huì)出現(xiàn)以蛋白多糖丟失及關(guān)節(jié)軟骨纖維化為特征的原發(fā)性O(shè)A樣改變，過表達(dá)miR-140則具有抵抗抗原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎的能力[3]。故miR-140是OA軟骨細(xì)胞退變過程中的重要物質(zhì)，是研究OA發(fā)病機(jī)制的一個(gè)重要切入點(diǎn)。本研究旨在探討miR-140與OA發(fā)病的關(guān)系，進(jìn)一步闡明OA的發(fā)病機(jī)制，為OA的預(yù)防及治療提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象 按照1995年美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)(American rheumatism association，ARA)制定的診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]，根據(jù)Kellgren and Lawrence 的X線分級(jí)[6]分成正常軟骨組(0級(jí))、中期OA組(Ⅲ級(jí))及晚期OA組(Ⅳ級(jí))。軟骨標(biāo)本均從華西醫(yī)院骨科手術(shù)室行膝上截肢術(shù)或行全膝關(guān)節(jié)置換術(shù)患者中獲取，正常組6例，中、晚期OA組均為8例。最大年齡74歲，最少年齡27歲，女性13例，男性9例。本研究方案得到四川大學(xué)華西醫(yī)院倫理委員會(huì)通過。

1.2 主要試劑 DMEM低糖培養(yǎng)基、磷酸鹽緩沖液、0.25%胰蛋白酶溶液、Ⅱ型膠原酶等購自美國(guó)Hycolon公司，Opti-MEM?I減血清培養(yǎng)基及Trizol購自美國(guó)Invitrogen公司，胎牛血清購自美國(guó)Sigma公司，Taq DNA PCR反應(yīng)試劑盒購自中國(guó)大連寶生物公司，dNTP購自美國(guó)Promega公司，逆轉(zhuǎn)錄試劑盒購自EU Fermentas公司，TaqMan MicroRNA Reverse Transcription Kit購自美國(guó)Applied Biosystems公司，TaqMan MicroRNA Assays試劑盒購自美國(guó)Applied Biosystems公司，F(xiàn)TC2000實(shí)時(shí)熒光定量基因擴(kuò)增儀購自加拿大楓嶺FUNGLYN公司。

1.3 方法

1.3.1 軟骨標(biāo)本收集、軟骨細(xì)胞分離培養(yǎng) 從華西醫(yī)院骨科手術(shù)室無菌條件下獲取軟骨標(biāo)本，轉(zhuǎn)運(yùn)至華西科技園移植免疫實(shí)驗(yàn)室。用手術(shù)刀片刮除新鮮軟骨標(biāo)本表面軟骨膜，用0.25%胰蛋白酶溶液消化2次，再用組織剪將其剪成0.5 cm×0.5 cm大小軟骨片，加入0.2% Ⅱ型膠原蛋白酶溶液分段消化，每次消化1 h后收集軟骨細(xì)胞，重復(fù)消化4～5次。將收集的軟骨細(xì)胞接種于含15% FBS的低糖Dulbecco氏培養(yǎng)基(Dulbecco'modified eagle medium，DMEM)培養(yǎng)基中，置于37C°、5%二氧化碳(carbondioxide，CO2)及飽和濕度的培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，2～3 d換液1次。采用第二代軟骨細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)。

1.3.2 OA軟骨細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-140 mimic/inhibitor 根據(jù)廣州銳博生物公司的microRNA產(chǎn)品說明書及操作手冊(cè)進(jìn)行，使用該公司自主研發(fā)的細(xì)胞毒性更小的riboFECTTMCP Reagent試劑介導(dǎo)。實(shí)驗(yàn)前一天我們按轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度達(dá)50%～60%進(jìn)行細(xì)胞六孔板接種。首先，根據(jù)說明書摸索出miR-140 mimic最佳轉(zhuǎn)染濃度為30nM。按照microRNA inhibitor的最佳轉(zhuǎn)染濃度為mimic轉(zhuǎn)染濃度的2倍，故miR-140 inhibitor的轉(zhuǎn)染濃度為60nM。每次實(shí)驗(yàn)均轉(zhuǎn)染30nM的銳博公司的microRNA Negative control序列作為陰性對(duì)照。

1.3.3 熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction，PCR) 本研究采用U6snRNA為內(nèi)參，檢測(cè)miR-140基因表達(dá)；采用β-actin作為內(nèi)參，檢測(cè)Ⅱ型膠原(collagentype IIa，COL2A1)和Ⅹ型膠原(collagentype Xa，COL10A1)基因表達(dá)。采用Trizol法提取細(xì)胞的總RNA(細(xì)胞裂解，裂解液分層，RNA沉淀、洗滌及溶解)，然后按逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書步驟將目的基因逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，最后按照實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒說明書步驟將目的基因進(jìn)行轉(zhuǎn)錄擴(kuò)增，反應(yīng)條件為：94C°預(yù)變性2min，94C°30s，55C°30s，72C°30s，總共進(jìn)行50個(gè)循環(huán)。熒光定量PCR結(jié)果以Ct值表示，按照△△Ct值計(jì)算法進(jìn)行分析，用同一標(biāo)本的目標(biāo)基因的Ct值減去內(nèi)參基因的Ct值得到△Ct值，再用各組的△Ct值減去對(duì)照組相應(yīng)基因的△Ct值得到△△Ct值，運(yùn)用2-△△Ct計(jì)算法得出各個(gè)目標(biāo)基因相對(duì)對(duì)照組的表達(dá)差異。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析 將熒光定量PCR原始數(shù)據(jù)(Ct值)換算為基因的相對(duì)表達(dá)量(2-△△Ct)，應(yīng)用SPSS V20.0(IBM USA)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，三個(gè)組的比較采用單因素方差分析法檢驗(yàn)，兩兩間的比較采用SNK法檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組軟骨細(xì)胞中miR-140的表達(dá)變化 miR-140在OA軟骨細(xì)胞中表達(dá)顯著下降，且隨著病變程度加重進(jìn)一步減少。中、晚期OA組miR-140與正常組相比分別減少了78.9%和94.5%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；晚期OA組miR-140較中期OA組減少了73.9%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，見表1)。

2.2 各組軟骨細(xì)胞中SOX9、COL2A1及COL10A1的表達(dá)變化 中、晚期OA組SOX9的mRNA較正常組減少了34%和49%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；中、晚期OA組COL2A1的mRNA較正常組減少了36.7%和78.7%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；而中、晚期OA組COL10A1的mRNA較正常組增加1.66倍和2.10倍，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，見表1)。

2.3 轉(zhuǎn)染miR-140 mimic/inhibitor對(duì)中期OA軟骨細(xì)胞SOX9、COL2A1及COL10A1表達(dá)的影響 向中期OA組軟骨細(xì)胞轉(zhuǎn)染ds-miR-140 mimic/inhibitor后，SOX9的mRNA本別增加了1.95倍和減少了59.1%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；COL2A1的mRNA分別增加了1.87倍和減少了68.9%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；COL10A1的mRNA分別減少了74.3%和增加了1.96倍，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，見表2)。

表1 中、晚期OA組相對(duì)于正常軟骨細(xì)胞組miR-140、SOX9、COL2A1及COL10A1表達(dá)水平比較

表2 中期OA組軟骨細(xì)胞轉(zhuǎn)染ds-miR-140mimic/inhibitor后SOX9、COL2A1及COL10A1表達(dá)水平比較

3 討 論

OA是老年人常見病，其病理生理改變以關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞去分化及合成分解代謝失衡，導(dǎo)致軟骨細(xì)胞凋亡、細(xì)胞外基質(zhì)破壞、骨贅形成、滑膜炎癥等。這一病理生理改變與細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞通路調(diào)控紊亂密切相關(guān)。目前OA的治療策略主要在于鎮(zhèn)痛治療和改善生活方式，關(guān)節(jié)置換手術(shù)是最后的治療手段。這些都只是對(duì)癥治療，不能有效緩解OA病情，更不能阻止其發(fā)展，而缺乏對(duì)OA發(fā)病機(jī)制的深入了解是導(dǎo)致其治療效果不佳的首要原因。

研究表明，一種內(nèi)源性的包涵22-25核苷酸非編碼單鏈小RNA(microRNA，miRNA)在細(xì)胞基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中發(fā)揮著重要的作用[7]。而miR-140是一種高度軟骨特異性的microRNA，這決定了其在軟骨形成和退變中發(fā)揮著重要的調(diào)控作用[8，9]。多項(xiàng)研究證實(shí)miR-140在小鼠胚胎時(shí)期便開始表達(dá)并促進(jìn)早期軟骨的形成和發(fā)育，敲除miR-140基因的小鼠胚胎時(shí)期生長(zhǎng)板軟骨形成便出現(xiàn)障礙，軟骨細(xì)胞的形成和發(fā)育過程出現(xiàn)異常，發(fā)生肥大分化速度加快，導(dǎo)致全身骨骼發(fā)育缺陷，出生后表現(xiàn)出身材短小和顱骨畸形等病理改變[3，10-12]。張明[13]及鄧黃河等[14]運(yùn)用RT-PCR檢測(cè)了不同Kellgren and Lawrence影像學(xué)分級(jí)的人膝關(guān)節(jié)液中miR-140表達(dá)規(guī)律發(fā)現(xiàn)，miR-140在OA組中表達(dá)顯著減少，而且與OA的病變程度呈負(fù)相關(guān)。Miyaki等[4]指出miR-140在人膝關(guān)節(jié)正常軟骨細(xì)胞中呈持續(xù)穩(wěn)定高表達(dá)，而在OA軟骨細(xì)胞中表達(dá)顯著減少；Lin等[15]對(duì)正常成人膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)時(shí)發(fā)現(xiàn)，miR-140在原代軟骨細(xì)胞中表達(dá)水平較高，隨著傳代次數(shù)的增多，miR-140的表達(dá)水平會(huì)逐漸降低。本研究觀察了人膝關(guān)節(jié)不同退變階段軟骨細(xì)胞中miR-140的表達(dá)變化，結(jié)果顯示miR-140在中期OA組表達(dá)顯著下降，而且在晚期OA組中進(jìn)一步減少，與上述多位作者研究結(jié)果相似，提示miR-140的減少與軟骨細(xì)胞的退變密切相關(guān)。

目前，有關(guān)miR-140生成調(diào)控方面的研究報(bào)道較少。Nakamura等[16]在斑馬魚的軟骨研究發(fā)現(xiàn)SOX9突變導(dǎo)致miR-140最初轉(zhuǎn)錄本的缺失，而在人軟骨細(xì)胞中敲除SOX9后miR-140的表達(dá)顯著下降，提示SOX9是miR-140表達(dá)的上游調(diào)控物質(zhì)。在ADTC5細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)，熒光素酶報(bào)告法及染色體免疫共沉淀顯示Sox9通過結(jié)合WWP2基因的10號(hào)內(nèi)含子來誘導(dǎo)miR-140的生產(chǎn)[17]。Yamashita等[18]在轉(zhuǎn)基因小鼠中發(fā)現(xiàn)L-SOX5及SOX6可以增強(qiáng)SOX9在促進(jìn)miR-140表達(dá)方面的作用。Miyaki等[4]向體外培養(yǎng)的人關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞中加入白細(xì)胞介素-1β(interleukin 1β，IL-1β)后發(fā)現(xiàn)miR-140的表達(dá)顯著減少，而骨關(guān)節(jié)炎中滑膜分泌大量IL-1β及腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor α，TNF-α)等炎性因子[19-20]，提示骨關(guān)節(jié)炎中滑膜炎癥與miR-140減少密切相關(guān)。

OA軟骨細(xì)胞中調(diào)控信號(hào)紊亂，導(dǎo)致正常軟骨基質(zhì)Ⅱ型膠原和蛋白聚糖表達(dá)減少，而軟骨細(xì)胞肥大分化標(biāo)記物如X型膠原、基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metallo proteinase，MMP)、聚蛋白多糖酶(A disinterin and metalloproteinase with thrombospondin motifs，ADAMTS)等表達(dá)顯著增加[21-23]。促軟骨形成因子SOX9是軟骨發(fā)育成熟的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子，有研究表明SOX9在退變椎間盤細(xì)胞中表達(dá)較正常椎間盤細(xì)胞顯著減少[24]。本研究發(fā)現(xiàn)SOX9及COL2A1在OA軟骨細(xì)胞中表達(dá)較正常組顯著減少，在晚期OA組中減少更明顯；而COL10A1在OA軟骨細(xì)胞中表達(dá)顯著增加，在晚期OA組中表達(dá)進(jìn)一步上升。這提示在OA病變中，軟骨細(xì)胞發(fā)生表型丟失，發(fā)生肥大分化，表達(dá)COL10A1增加，而合成正常軟骨基質(zhì)COL2A1減少，而且隨著OA病情的加重，上述病理改變?cè)郊用黠@。

本研究通過瞬時(shí)轉(zhuǎn)染技術(shù)將miR-140 mimic轉(zhuǎn)入中期OA軟骨細(xì)胞的方法來上調(diào)miR-140的水平，發(fā)現(xiàn)軟骨細(xì)胞中SOX9表達(dá)水平均顯著上升，同時(shí)伴有COL2A1表達(dá)增加及COL10A1表達(dá)減少。有趣的是，通過相同的方法將miR-140 inhibitor轉(zhuǎn)入中期OA軟骨細(xì)胞后出現(xiàn)相反的生物學(xué)效應(yīng)。有研究表明，在軟骨前體細(xì)胞及軟骨細(xì)胞中高表達(dá)SOX9可抑制軟骨細(xì)胞肥大分化，而敲除SOX9基因后軟骨細(xì)胞形成及成熟障礙[25]，向退變椎間盤細(xì)胞中通過腺病毒介導(dǎo)過表達(dá)SOX9基因可促進(jìn)軟骨基質(zhì)Ⅱ型膠原及蛋白聚糖的表達(dá)[26]。Caron等[27]在兔子骨膜細(xì)胞體外培養(yǎng)中證實(shí)重組人骨形態(tài)蛋白-7(bone morphogenetic protein 7，BMP-7)可以誘導(dǎo)SOX9表達(dá)，進(jìn)而影響軟骨細(xì)胞分化的平衡點(diǎn)Bapx1/Nkx3.2，促進(jìn)Ⅱ型膠原的表達(dá)，而抑制了X型膠原及骨形成因子(runt-ralated transcription factor 2，Runx2)的表達(dá)，從而抑制軟骨細(xì)胞肥大分化。Karlsen等[28]通過瞬時(shí)轉(zhuǎn)染技術(shù)分別上調(diào)/下調(diào)人骨髓基質(zhì)細(xì)胞的miR-140水平，結(jié)果表明miR-140通過作用于Ras-related protein Ral-A(RALA)靶點(diǎn)進(jìn)而上調(diào)SOX9及ACAN表達(dá)來促進(jìn)軟骨形成。本研究初步顯示，上調(diào)中期OA軟骨細(xì)胞的miR-140水平可促進(jìn)軟骨形成因子SOX9及正常軟骨基質(zhì)COL2A1的表達(dá)，而抑制軟骨細(xì)胞肥大分化標(biāo)志物COL10A1的表達(dá)。因此，我們?cè)O(shè)想，本研究中轉(zhuǎn)染miR-140mimic后，COL2A1表達(dá)上調(diào)及COL10A1表達(dá)下調(diào)的現(xiàn)象不是miR-140的直接作用結(jié)果，而是miR-140通過RALA靶點(diǎn)上調(diào)了促軟骨形成因子SOX9表達(dá)所致。其作用機(jī)制可能與Caron等作者報(bào)道的機(jī)制相同，即表達(dá)上調(diào)的SOX9影響了軟骨細(xì)胞去分化的平衡點(diǎn)Bapx1/Nkx3.2，進(jìn)而促進(jìn)COL2A1的表達(dá)及抑制COL10A1的表達(dá)。故miR-140在維持正常軟骨細(xì)胞表型方面具有重要的調(diào)控作用，miR-140 mimic在改善OA軟骨細(xì)胞功能方面具有積極的意義，為探索OA的新治療方式提供一種思路。

本研究發(fā)現(xiàn)miR-140在人膝關(guān)節(jié)OA軟骨細(xì)胞中變達(dá)減少，且隨著病變加重進(jìn)一步減少；向中期OA軟骨轉(zhuǎn)染miR-140 mimic上調(diào)miR-140表達(dá)有助于維持軟骨表型，促進(jìn)COL2A1表達(dá)并抑制COL10A1表達(dá)。本研究初步證實(shí)miR-140在OA的發(fā)生、發(fā)展中扮演著重要角色，進(jìn)一步深入研究miR-140在OA軟骨細(xì)胞中的具體作用機(jī)制，有助于更深入闡明OA的發(fā)病機(jī)制，并為OA的基因治療提供新思路。

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ExpressionandFunctionofmiR-140inDifferentStageChondrocytesofPatientswithOsteoarthritis

Li Canfeng1，Chen Zhuo2，Yang Jing1，et al

(1.Department of Orthopedics，West China Hospital of Sichuan University，Chengdu 610041，China；2.Centre of Translational Neuroscience，West China Hospital of Sichuan University，Chengdu 610041，China)

ObjectiveTo investigate the expression miR-140 in different stage of osteoarthritis and its function after transfecting ds-miR-140 mimic/inhibitor into chondrocytes.MethodsCartilage was classified into three groups，normal group，mid-staged group and advanced-staged group，according to the Kellgren and Lawrence criterion.6-8 cases of normal or OA cartilage were collected and chondrocytes were isolated.The second generation of chondrocytes were used to test.The levels of miR-140，COL2A1 and COL10A1 mRNA were measured with real-time fluorescent quantitative PCR.The ds-miR-140 mimic/inhibitorwere transfected into the mid-staged group，and the expression of COL2A1，COL10A1 and SOX9 were measured.ResultsCompared with the normal group，miR-140 expression in the mid- and advanced-staged group was decreased by 34.1% and 49.3% respectively，and its expression in advanced-staged group was decreased by 73.9%.Beside，SOX9 expression in the mid- and advanced-staged group was decreased by 75% and 82.7%respectively，COL2A1 expression decreased by 36.7% and 78.7% respectively，while COL10A1 expression increased to 1.66 times and 2.10 times respectively.After transfecting ds-miR-140 mimic/inhibitor into the mid-staged group，SOX9 expression was increased by 1.95 times or decreased by 59.1%，COL2A1 expression was increased by 1.87 times or decreased by 68.8%，and COL10A1 expression was decreased by 73.0% or increased by 1.96 times.ConclusionThe expression level of miR-140 decreased in osteoarthritic chondrocytes，and was negatively related to the severity of OA.Overexpression its level by transfecting ds-miR-140 mimic into chondrocytes could up-regulate SOX9 and COL2A1 expression while down-regulate COL10A1 expression.

osteoarthritis；chondrocyte；microRNA-140；collagen type Ⅱ；collagen type X

1008-5572(2017)11-0995-05

R684.3

A

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(81672219、81601936)；四川省科技廳科技支撐計(jì)劃(2014SZ0023-2)；*本文通訊作者：沈彬

2017-03-31

李燦鋒(1987-)，男，研究生在讀，四川大學(xué)華西醫(yī)院骨科，610041。