張澤俊 , 李 浪 , 呂肇勉 , 段繼維 , 劉大勝

（1.昭通學(xué)院化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院，云南 昭通 657000；2.云南省魯?shù)榭h第一中學(xué)，云南 魯?shù)?657100；3.臨滄市滄源佤族自治縣農(nóng)業(yè)局，云南 滄源677400）

昭通大山包黨參中多糖的提取

張澤俊1, 李 浪1, 呂肇勉2, 段繼維3, 劉大勝1

（1.昭通學(xué)院化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院，云南 昭通 657000；2.云南省魯?shù)榭h第一中學(xué)，云南 魯?shù)?657100；3.臨滄市滄源佤族自治縣農(nóng)業(yè)局，云南 滄源677400）

通過實驗，得出昭通大山包黨參中的多糖含量.根據(jù)多糖溶于水但不溶于乙醇選用水提醇沉法粗提昭通大山包黨參中的多糖，再用丙酮和石油醚的混合液（V∶V=1∶1）除粗糖中的脂肪及脂溶性雜質(zhì)，并用正丁醇和氯仿的混合液（V∶V=1∶5）除蛋白（Sevage法）得到多糖純品.所得昭通大山包黨參中多糖的含量為4.61%.

大山包黨參； 多糖； 水提醇沉法

黨參（Codonopsis pilosula (Franch.) Nannf.）為多年生草本植物，桔?？泣h參屬[1].原植物繁多，主要為：川黨參（Codonopsis tangshen Oliv）、素花黨參(Codonopsis pilosula Nannf.var.modesta(Nannf.)L.T.Shen)、管花黨參(C.tubulosa Kon)、 黨參(C.pilosula (Franch.)Nannf)四類；根據(jù)不同種植地域的不同種別，又分為西黨參、東黨參、潞黨參、條黨參、白黨參五類[2].

昭通大山包黨參原植物為管花黨參，其根一般呈長圓錐形或紡錘形，根長莖細(xì)，有較多瘤狀莖痕位于莖基，同一植株根基部或根莖中上部有分支，形狀略扭曲；表皮顏色為棕黃色和淺黃色，其上分布有各種紋路的皺紋，多為環(huán)紋；有蘆頭，斷面呈現(xiàn)黃白色.因其質(zhì)地較硬且含糖量相較于其他類別黨參較少，故其藥材名為白黨[2].植株葉片生于主莖及側(cè)枝上，葉片對生；生長于植株端部的葉型微尖或葉型長狹且尖端鈍，而生長于植株根部靠近地面部分的葉片葉型多似心形，葉片邊緣不光滑呈鋸齒狀，葉片上表面呈綠色，下表面呈灰綠色，上浮細(xì)毛；花頂生著于植株尖端，花冠呈闊鐘形狀，內(nèi)面淺裂具有紫色斑點，種子為棕黃色卵形，顆粒細(xì)小，花果期為7月至10月.

黨參抗寒能力強(qiáng)，高溫燥熱天氣不利于其生長發(fā)育，耐濕，適宜生長在海拔120 0 m以上排水良好的山地，為深根系植物.昭通大山包地處昭通市昭陽區(qū)西部，海拔250 0-336 4 m，地下泉眼眾多，水資源豐富，年平均氣溫為5.7-6.2 ℃，冬寒夏涼，年平均無霜期在84-134天內(nèi)波動，隨氣候變化而呈現(xiàn)不同天數(shù)，但多為110天；年平均降水量為116 5 mm，土壤主要為棕壤和草甸土，含有豐富的黨參生長所需的有機(jī)質(zhì)，因此適宜黨參的生長.

黨參成分復(fù)雜，有生物堿、內(nèi)酯類、揮發(fā)油、甾類、多糖、黃酮類、萜類等，經(jīng)過不斷的探究、分離，目前還鑒定出：黨參炔苷、磷脂類、酚酸類、大黃素、膽堿、苯丙素類等；除此之外還有色氨酸及部分微量元素.其中糖和苷有：丁香苷（syrigin）、黨參苷（Ⅰ –Ⅳ）、果糖、α-D-果糖己醇、黨參酸性多糖、菊糖、β-D-葡萄糖己醇[2-4]等.其性甘微寒、味平，具有健脾益肺、養(yǎng)陰和胃的藥效，用于治療食少便溏、脾胃孱弱引起的嘔吐反胃，久泄脫肛；養(yǎng)血生津、補中益氣，治療氣血兩虛、目赤暈炫、氣短心慌；潤肺化痰，治療肺熱咳嗽；療毒瘡瘍，用于解毒；生津止渴，治療內(nèi)熱消渴等[5-8].現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，黨參還具有調(diào)節(jié)人體免疫細(xì)胞，增強(qiáng)免疫力；減少自由基，延緩衰老；改善造血功能 、促進(jìn)凝血、調(diào)節(jié)血脂血糖，抗腫瘤等作用、耐缺氧、保護(hù)腸胃黏膜、抗疲勞、抗輻射 、抗應(yīng)激[3,4,9-10].其中，黨參多糖的主要功效表現(xiàn)為增強(qiáng)免疫力.

黨參多糖提取方法有：超聲波提取、水提醇沉、微波提取等，通過對各種方法提取率、操作方法難易程度、成本等的分析比較，最終選擇水提醇沉法對昭通大山包黨參中的多糖進(jìn)行提取.

1 實驗

1.1 材料與試劑

材料：鮮黨參（實物見下圖），采購于昭通市昭陽區(qū)大山包集鎮(zhèn)

試劑：苯酚（AR，成都化學(xué)試劑廠）；氯化鈉（AR，中國醫(yī)藥公司北京采購站）；無水醋酸酐、乙酸酐（AR，洛陽市化學(xué)試劑廠）；石油醚（AR，天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司）；無水乙醇（AR，西隴化工股份有限公司）；丙酮、正丁醇（AR，天津市光復(fù)科技發(fā)展有限公司）；三氯甲烷（AR，重慶川東化工（集團(tuán)）有限公司）；721分光光度計（山東高密彩虹分析儀器有限公司）

圖1.大山包鮮黨參實物圖片

1.2 儀器與設(shè)備

標(biāo)準(zhǔn)篩（40目，浙江上虞市道墟五四儀器廠）；HH—S26s 數(shù)顯恒溫水浴鍋、電熱恒溫培養(yǎng)箱（上?！憧萍純x器有限公司）；SC-04 低速離心機(jī)（安徽中科中佳科技儀器有限公司）；DEAE 纖維素/DE-52（AS#9013-34-7 粒徑:50μm，上海源葉生物有限公司）

1.3 黨參多糖的制備

1.3.1 黨參樣品的預(yù)處理

鮮黨參陰干后用剪刀剪碎，置于研缽中研磨細(xì)，過40目標(biāo)準(zhǔn)篩.

1.3.2 黨參粗多糖的制備

用分析天平稱取上述研磨碎的黨參粉末9.594 5g置于100 mL燒杯中，加入80%的乙醇溶液60 mL，將燒杯置于恒溫水浴鍋中，80 ℃水浴中提取1h,過濾，保留濾渣.以相同的方式重復(fù)操作兩次.將所得濾渣（約20 mL）轉(zhuǎn)入100 mL燒杯中，加入四倍體積的蒸餾水，恒定水浴溫度為95 ℃，加熱提取2 h，過濾，收集濾液，相同方式重復(fù)操作一次，合并濾液 .將約60 mL濾液置于250 mL大燒杯中，加入濾液約2倍體積體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇溶液，靜置，使沉淀析出.待沉淀沉降完全后，傾倒棄去部分上清液，將剩余混合物分次倒入離心管中用離心機(jī)離心（轉(zhuǎn)速選定4000 r/min，時間5 min）,離心后棄去上層清液，合并沉淀于100 mL燒杯中，加入少量蒸餾水溶解后加入其體積5倍的丙酮和石油醚的混合液（V∶V=1∶1）,置于水浴鍋中恒溫60 ℃水浴加熱30 min后移入恒溫培養(yǎng)箱恒溫50 ℃烘干，所得固體物質(zhì)即為黨參多糖粗品.

1.3.3 黨參粗多糖的純化

將黨參粗多糖移入100 mL燒杯中，加入適量蒸餾水充分溶解后加入氯仿（5 mL）和正丁醇（1 mL）的混合液，攪拌使其充分反應(yīng)，此時溶液分為兩層，上層為乳白色濁液，下層為油狀有機(jī)層.將上述液體全部適量多次移入離心管中（轉(zhuǎn)速4000 r/min，時間5 min）進(jìn)行離心，離心后溶液分為三層，上層為無色透明的澄清溶液，即含糖水層，中間為乳白色沉淀，即固體蛋白質(zhì)層，下層為油狀有機(jī)層，用膠頭滴管吸出上層清液并合并，重復(fù)前述除蛋白操作至中間無乳白色蛋白質(zhì)層為止，保留最后所得上清液.

1.3.4 黨參多糖純品的制備

在上述最上層澄清液中加入四倍體積95%的乙醇溶液，靜置，讓多糖晶體充分析出，待多糖晶體不在隨時間的延長而析出并逐漸沉降于燒杯底部時，用前述方法離心，棄去上層清液并合并沉淀.將沉淀置于恒溫培養(yǎng)箱恒溫50 ℃烘干，最后所得固體即為黨參多糖純品2.0812g.

1.4 纖維柱精制多糖

1.4.1 纖維柱預(yù)處理

將干燥的粉末狀的纖維素置于燒杯中，加入足量蒸餾水充分浸泡3小時 ，進(jìn)行抽濾.再用20 mL 0.5 mol/L的鹽酸浸泡2小時，并用蒸餾水將浸泡后的纖維素洗至pH呈中性，抽濾；將濾干的纖維素再用20 mL 0.5 mol/L的NaOH浸泡2小時，后再次洗至中性，抽干.將所得纖維素置于DEAE-纖維素柱中，加入少量蒸餾水備用.

1.4.2 纖維柱洗脫樣品

取50 mg脫蛋白的黨參多糖，加入40 mL蒸餾水充分溶解，注入DEAE-纖維素柱中洗脫，用試管收集，沒管3mL.用量筒量取15 mol/L的硫酸2.5 mL與另一只量筒中，加入約0.0250g苯酚晶體配成顯色液，將濾液倒入顯色液中混勻，倒入2 mL比色皿中，用721分光光度計測吸光度.

2 結(jié)果

用天子天平稱量上述所得固體，其質(zhì)量為0.4424g，即實驗所得黨參精制多糖純品質(zhì)量為 0.4424g.則產(chǎn)率為：(0.4424g/9.5945g)·100%=4.61%.

3 結(jié)論

試驗所得昭通大山包黨參中多糖的含量為：4.61%.但實驗必然存在多糖的損失，因此昭通大山包黨參中多糖含量的實際值應(yīng)高于4.61%.

[1]余蘭,陳華,婁方明.超聲波輔助提取洛龍黨參多糖的工藝優(yōu)化[J].食品與機(jī)械,2010,26（6）:135-137.

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[3]李黎星,康杰芳.中藥黨參的研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2009,9(12):2371-2373.

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Extraction of Polysaccharides in Codonopsis Pilosula (Franch.) Nannf.From Dashanbao

ZHANG Ze-jun1, LI Lang1, Lü Zhao-mian2, DUAN Ji-wei3, LIU Da-sheng1
(1.School of chemistry and life science, Zhaotong University, Zhaotong 657000, China；2.Ludian county No.1 middle school, Ludian, 657100，China；3.The agricultural bureau of cangyuan Wa autonomous county, Cangyuan 677400，China）

we obtained the amount of polysaccharides form Codonopsis pilosula (Franch.) Nannf.through the experiment.Firstly, the crude polysaccharides were extracted from Codonopsis pilosula (Franch.) Nannf.employed water-extraction and alcohol-precipitation method because of polysaccharides are soluble in water but insoluble in ethanol.Secondly, the fat and fat-soluble impurities were removed by the mixed liquor of acetone and petroleum ether (V∶ V = 1∶1), the proteins were eliminated through the mixtures of n-butyl alcohol and chloroform (V∶ V =1∶ 5) (Sevage method)to get the purified polysaccharides.Finally, the yield of extraction was 4.61% form Codonopsis pilosula (Franch.) Nannf.of Dashanbao.

Codonopsis pilosula (Franch.) Nannf.； Polysaccharide； Water-extraction and alcohol-precipitation method

R284.2

A

2095-7408（2017）05-0048-03

2017-09-15

云南省應(yīng)用基礎(chǔ)研究計劃項目青年項目(2013FD057和2016FD083)；云南省教育廳科學(xué)研究基金資助性項目(2016ZZX229)和云南省高等學(xué)校昭通高原特色農(nóng)產(chǎn)品工程研究中心項目資助.

張澤?。?983— ），男，云南昭通人，講師，碩士，主要從事中藥材活性成分的提取和分析研究.