薛曉紅，馬穎才，王亞平，榮光宏，李曉林

（青海省人民醫(yī)院消化內(nèi)科，青海 西寧 810007）

淺談p53、p21和PTEN檢測在早期胃癌診斷中的應(yīng)用價值

薛曉紅，馬穎才★，王亞平，榮光宏，李曉林

（青海省人民醫(yī)院消化內(nèi)科，青海 西寧 810007）

目的：探討p53、p21和PTEN檢測在早期胃癌診斷中的應(yīng)用價值。方法：將2013年1月至2015年8月期間青海省人民醫(yī)院收治的40例早期胃癌患者作為早期胃癌組。將同期在該院進行內(nèi)鏡檢查的10例健康人作為健康組。采集兩組受檢者的胃黏膜標(biāo)本，用免疫組織化學(xué)法對其胃黏膜標(biāo)本中的p53、p21和PTEN進行檢測。對比在兩組受檢者胃黏膜標(biāo)本中p53、p21和PTEN表達的陽性率，同時比較在不同性別、不同年齡段早期胃癌患者胃黏膜標(biāo)本中p53、p21和PTEN表達的陽性率。結(jié)果：在早期胃癌組患者胃黏膜標(biāo)本中p53和p21表達的陽性率均高于健康組受檢者，PTEN表達的陽性率則低于健康組受檢者，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。年齡＞60歲的早期胃癌組患者胃黏膜標(biāo)本中p53表達的陽性率要高于年齡≤60歲的該組患者，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。在不同年齡段的早期胃癌組患者胃黏膜標(biāo)本中p21和PTEN表達的陽性率相比差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。在不同性別的早期胃癌組患者胃黏膜標(biāo)本中p53 、p21和PTEN表達的陽性率相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論：p53和p21在早期胃癌患者的胃黏膜中均呈高表達。PTEN在早期胃癌患者的胃黏膜中呈低表達。對早期胃癌患者進行p53、p21和PTEN檢測可提高診斷其病情的準(zhǔn)確率。

p21；p53；PTEN；早期胃癌；診斷

胃癌是一種發(fā)病率較高的惡性腫瘤[1]。早期胃癌患者可通過手術(shù)治療獲得理想的療效。然而，大多數(shù)胃癌患者的病情在得到確診時已處于晚期，可選擇的治療方法有限，預(yù)后也不佳。因此，對胃癌患者的病情進行早期診斷具有重要的臨床意義。在本次研究中，筆者通過對2013年1月至2015年8月期間青海省人民醫(yī)院收治的40例早期胃癌患者和同期在該院接受內(nèi)鏡檢查的10例健康人進行p53、p21和PTEN聯(lián)合檢測，探討進行p53、p21和PTEN檢測在早期胃癌診斷中的應(yīng)用價值。

1 對象與方法

1.1 研究對象

本次研究的對象為2013年1月至2015年8月期間青海省人民醫(yī)院收治的40例早期胃癌患者和同期在該院進行內(nèi)鏡檢查的10例健康人。將40例早期胃癌患者作為早期胃癌組，將10例健康人作為健康組。在早期胃癌組患者中，有男30例、女10例；其中，有18例年齡＞60歲的患者，22例年齡≤60歲的患者。在健康組受檢者中，有男6例、女4例；其中，有3例年齡＞60歲的受檢者，7例年齡≤60歲的受檢者。兩組受檢者在性別、年齡等一般資料方面相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），存在可比性。

1.2 方法

1.2.1 檢測結(jié)果的判斷標(biāo)準(zhǔn) p53和p21在癌細胞腺體細胞核中的表達呈黃色至棕褐色，且呈顆粒狀分布。PTEN在癌細胞腺體細胞質(zhì)中的表達呈黃色至棕褐色，且呈顆粒狀分布。

1.2.2 檢測方法 對兩組受檢者均進行內(nèi)鏡檢查，分別采集其胃黏膜標(biāo)本。采用免疫組織化學(xué)法（EnVision二步法）對兩組受檢者胃黏膜標(biāo)本中的p53、p21和PTEN進行檢測。具體的檢測方法為：1）依次對胃黏膜標(biāo)本進行甲醛固定、石蠟包埋、切片、脫蠟、水化及PBS（磷酸鹽緩沖液）沖洗（沖洗3次，3 min/次）。2）對處理后的標(biāo)本進行高溫、高壓抗原修復(fù)，然后向其中加入濃度為3%的過氧化氫溶液。將該混合液在室溫下孵育10 min，以消除內(nèi)源性過氧化物酶的活性。用PBS對該混合液進行沖洗（沖洗3次，3 min/次）。3）向步驟2所得的混合液中加入第一抗體，在室溫下對其進行60 min的孵育。用PBS對該混合液進行沖洗（沖洗3次，5 min/次）。4）向步驟3所得的混合液中加入聚合物增強劑，在室溫下對其進行20分鐘的孵育。用PBS對該混合液進行沖洗（沖洗3次，3 min/次）。5）向步驟4所得的混合液中加入酶標(biāo)抗鼠聚合物，在室溫下對其進行30 min的孵育。用PBS對該混合液進行沖洗（沖洗3次，3 min/次）。6）向步驟5所得的混合液中加入新鮮配制的DAB顯色液，在顯微鏡下對該混合液進行觀察。該混合液的顯色若呈棕色至棕黃色，且呈顆粒狀分布，提示檢測結(jié)果為陽性。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

使用SPSS17.0統(tǒng)計軟件對本次研究中的數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)分析，兩組受檢者p53、p21和PTEN表達的陽性率均用百分比（%）表示，采用x2檢驗。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 在兩組受檢者胃黏膜標(biāo)本中p53、p21和PTEN表達陽性率的對比

在早期胃癌組患者胃黏膜標(biāo)本中p53和p21表達的陽性率均高于健康組受檢者，PTEN表達的陽性率則低于健康組受檢者，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。詳見表1。

2.2 在不同年齡段早期胃癌組患者胃黏膜標(biāo)本中p53、p21和PTEN表達陽性率的對比

年齡＞60歲的早期胃癌組患者胃黏膜標(biāo)本中p53表達的陽性率要高于年齡≤60歲的該組患者，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。在不同年齡段早期胃癌組患者胃黏膜標(biāo)本中p21和PTEN表達的陽性率相比差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。詳見表2。

2.3 在不同性別早期胃癌組患者胃黏膜標(biāo)本中p53、p21和PTEN表達陽性率的對比

在不同性別早期胃癌組患者胃黏膜標(biāo)本中p53 、p21和PTEN表達的陽性率相比差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。詳見表3。

表1 在兩組受檢者胃黏膜標(biāo)本中p53、p21和PTEN表達陽性率的對比

表2 在不同年齡段早期胃癌組患者胃黏膜標(biāo)本中p53、p21和PTEN表達陽性率的對比

表3 在不同性別早期胃癌組患者胃黏膜標(biāo)本中p53、p21和PTEN表達陽性率的對比

3 討論

胃癌是臨床上常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤。該病在我國西北及東北地區(qū)的發(fā)病率要高于其他地區(qū)，其原因可能與這些地區(qū)居民的飲食及生活習(xí)慣有關(guān)。內(nèi)鏡下胃黏膜切除術(shù)、內(nèi)鏡下胃黏膜剝離術(shù)是臨床上治療早期胃癌的常用術(shù)式，具有創(chuàng)傷小、患者痛苦少、術(shù)后恢復(fù)快等優(yōu)點。有調(diào)查資料顯示，早期胃癌患者的5年生存率達90%以上。因此，對胃癌患者的病情進行早期診斷和治療對于提高其治療的效果、降低其死亡率具有重要的臨床意義[2-3]。

目前的研究結(jié)果認為，p53屬于抑癌基因，其異常表達與胃黏膜的癌變密切相關(guān)。突變型 p53的表達水平與胃癌的分化、轉(zhuǎn)移和浸潤等相關(guān)。p21屬于重要的細胞周期調(diào)控蛋白，可廣泛抑制激酶的活性，限制細胞進入S期[4]，使細胞無限制地增殖。在本次研究中，筆者采用免疫組織化學(xué)法對兩組受檢者胃黏膜標(biāo)本中p53和p21的表達進行檢測。結(jié)果顯示，p53和p21的陽性反應(yīng)物在發(fā)生癌變的胃黏膜上皮細胞核內(nèi)聚集，在正常胃黏膜上皮細胞核內(nèi)無陽性表達。這一研究結(jié)果與國內(nèi)外的文獻報告相一致[5-7]。本次研究的結(jié)果顯示，與健康組受檢者相比，早期胃癌組患者胃黏膜標(biāo)本中p53 和p21表達的陽性率明顯升高。這說明，p53和p21的異常表達與胃癌的發(fā)生密切相關(guān)。本次研究的結(jié)果還顯示，年齡＞60歲的早期胃癌患者胃黏膜標(biāo)本中p53 表達的陽性率高于年齡≤60歲的該病患者。這說明，p53 的表達水平可受早期胃癌患者年齡的影響。這一研究結(jié)果與車向明等[8]的報道一致。

PTEN是臨床上新發(fā)現(xiàn)的腫瘤抑制基因，存在于人體的10號染色體上。PTEN可抑制特異性磷酸酶的活性[9]，參與細胞周期調(diào)控，抑制細胞的異常發(fā)育。PTEN還可影響多種惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展，調(diào)控惡性腫瘤細胞的凋亡和遷移。本次研究的結(jié)果顯示，在早期胃癌組患者胃黏膜標(biāo)本中PTEN表達的陽性率低于健康組受檢者，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。這說明，PTEN表達水平的下降可使機體抑制正常胃黏膜細胞發(fā)生癌變的能力降低，導(dǎo)致胃癌發(fā)生。

綜上所述，p53和p21在早期胃癌患者的胃黏膜中均呈高表達。PTEN在早期胃癌患者的胃黏膜中呈低表達。對早期胃癌患者進行p53、p21和PTEN檢測可提高診斷其病情的準(zhǔn)確率。這對于提高胃癌患者的生存率、降低其死亡率具有重要的臨床意義。

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R735.2

B

2095-7629-（2017）17-0172-03

青海省科學(xué)技術(shù)廳科技促進新農(nóng)村計劃（2013-N-526）

青海省衛(wèi)計委2012年科研指導(dǎo)計劃項目

＊通訊作者：馬穎才