陸 珞 王 冰 陳 朵 何 蕊 方春雪 位 鴻 楊 戈

(吉林省食品藥品審評中心，吉林 長春 130062)

抑顫顆粒的含量測定

陸 珞 王 冰1陳 朵2何 蕊3方春雪3位 鴻3楊 戈3

(吉林省食品藥品審評中心，吉林 長春 130062)

目的建立“抑顫顆粒”中芍藥苷的HPLC含量測定方法。方法采用Agilent TC-C18 色譜柱 (4.6 mm×250 mm，5 μm)；以乙腈-0.1%磷酸水(14:86)為流動(dòng)相；柱溫：25℃，流速1 ml/min，檢測波長為230 nm。結(jié)果芍藥苷進(jìn)樣量在0.119 6～1.495 0 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r=0.999 9，平均加樣回收率為97.22%(n=6)，RSD為1.97%。結(jié)論所建立的方法專屬性良好，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，重復(fù)性好，可用于抑顫顆粒的質(zhì)量控制。

抑顫顆粒；高效液相色譜法；芍藥苷；含量測定

1 儀器與試藥

1.1儀器 AUW220D型電子天平(島津國際貿(mào)易有限公司)；島津LC-2010A型高效液相色譜儀(島津國際貿(mào)易有限公司)；Water Purifier 實(shí)驗(yàn)室專用超純水機(jī)；；超聲波清洗器(昆山禾劍)。

1.2試藥 抑顫顆粒(自制，批號：20160101、20160102、20160103)，芍藥苷對照品(批號：110736-201539，供含量測定用，規(guī)格：20 mg，購于中國食品藥品檢定研究院)。乙腈使用色譜純，其他試劑均使用分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

芍藥苷的含量測定:參考藥典方法〔6〕，對樣品中的芍藥苷含量進(jìn)行檢測，同時(shí)進(jìn)行含量測定方法學(xué)驗(yàn)證。

2.1色譜條件 色譜柱：Agilent TC-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸水(14∶86)；檢測波長：230 nm；流速：1 ml/min；理論板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3 000。

2.2對照品溶液的制備 精密稱取芍藥苷對照品5.98 mg，置100 ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻；即得。

2.3供試品溶液的制備 取本品約2 g，研成細(xì)粉，精密稱定，置50 ml量瓶中，加稀乙醇40 ml，超聲處理(功率250 W，頻率40 kHz)30 min，放冷，加稀乙醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4陰性對照溶液的制備 另稱取除去白芍的陰性樣品，按照供試品溶液的制備方法制成陰性對照溶液。

2.5測定法 分別精密吸取上述溶液各10 μl，注入液相色譜儀，測定，即得。

2.6專屬性考察 分別精密吸取供試品溶液、對照品溶液和陰性對照溶液各10 μl，依法測定，見圖1～圖3。

圖1 芍藥苷對照品高效液相色譜圖

圖2 抑顫顆粒供試品高效液相色譜圖

在此條件下，芍藥苷峰與其他峰分離較好，分離度gt;1.5；理論板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算gt;3 000；且白芍陰性無干擾。

2.7線性關(guān)系的考察 分別精密吸取芍藥苷(59.8 μg/ml)對照品溶液2.0、5.0、10.0、15.0、20.0、25.0 μl，依法測定。以進(jìn)樣量(μg)作為橫坐標(biāo)，峰面積積分值作為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，見圖4?；貧w方程為：y=1 780 613.523 4x-15 699.671 6，r=0.999 9，表明芍藥苷在0.119 6～1.495 0 μg范圍內(nèi)線性良好。

圖3 白芍陰性對照色譜圖

圖4 芍藥苷標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.8精密度考察 精密吸取對照品溶液10 μl注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)針6次，記錄峰面積積分值，計(jì)算，RSD為0.37%，精密度良好。

2.9穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 精密吸取對照品溶液和同一批供試品溶液各10 μl，分別在0 h，2 h，4 h，6 h，8 h，12 h，24 h進(jìn)樣，依法測定，計(jì)算，RSD為1.51%和1.05%，穩(wěn)定性良好，即24 h內(nèi)測定結(jié)果可靠。

2.10重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取同一批樣品，按供試品溶液項(xiàng)下方法制備6份，依法測定，計(jì)算，芍藥苷平均含量為3.535 0 mg，RSD為1.54%，重現(xiàn)性良好。

2.11加樣回收率實(shí)驗(yàn) 取已知含量同一批樣品6份，取約1 g，精密稱定，分別置50 ml量瓶中，精密加入3.314 mg/ml芍藥苷對照品溶液(稀乙醇溶解)1 ml，加稀乙醇40 ml，超聲處理(功率250 W，頻率40 kHz)30 min，放冷，加稀乙醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液，依法測定，計(jì)算回收率，見表1。由回收率實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可得，平均回收率是97.22%，RSD是1.97%，說明試驗(yàn)方法的準(zhǔn)確性良好，方法可行。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.12含量測定 取3批抑顫顆粒中試樣品，平行兩份，依法測定，記錄峰面積，計(jì)算樣品中芍藥苷含量，結(jié)果見表2。由含量測定試驗(yàn)所得數(shù)據(jù)可知，三批抑顫顆粒中試樣品中芍藥苷含量的平均值為3.462 5 mg/g。

表2 三批中試樣品含量測定結(jié)果(mg/g)

2.13含量限度的確定 含量限度按測定結(jié)果平均值的80%計(jì)算，結(jié)果為2.77 mg/g，本品規(guī)格為每袋裝10 g，故暫定本品每袋顆粒含白芍以芍藥苷(C23H28O11)計(jì)，不得少于27.00 mg。

3 討 論

本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法對抑顫顆粒中芍藥苷的含量進(jìn)行測定，方法學(xué)考察結(jié)果表明：該法的專屬性、線性、精密度、重現(xiàn)性、穩(wěn)定性和回收率等技術(shù)指標(biāo)均符合規(guī)定，暫定本品每袋顆粒含白芍以芍藥苷(C23H28O11)計(jì)，不得少于27.00 mg。并且采用該法測定了三批中試樣品的含量，結(jié)果符合規(guī)定，表明該法具有可行性、可控性，適用于本品的檢測，為抑顫顆粒的質(zhì)量控制提供了依據(jù)。

1中華醫(yī)學(xué)會(huì)神經(jīng)病學(xué)分會(huì)運(yùn)動(dòng)障礙及帕金森病學(xué)組.帕金森病的診斷〔J〕.中華神經(jīng)科雜志,2006；39(6):408-9.

2熊 珮,陳 忻,張 楠.帕金森病病理機(jī)制及中藥防治帕金森病實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展.〔J〕.中國中藥雜志,2012;37(5):686.

3朱 泉,周杰平.帕金森病中醫(yī)治療近況〔J〕.山東中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2000;24(2):156.

4文曉東,鄭景輝,蒙 冰,等.中醫(yī)藥治療帕金森病療效系統(tǒng)評價(jià)〔J〕. 遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2014;16(7):120-4.

5顧 超,袁燦興,葉 青.熟地平顫湯協(xié)同左旋多巴對帕金森病非運(yùn)動(dòng)癥狀的影響〔J〕.上海中醫(yī)藥雜志,2011;45(3)：29-31.

6國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典2015年版〔M〕.北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2015：105.

〔2017-03-15修回〕

(編輯 袁左鳴)

R28

A

1005-9202(2017)22-5547-02；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.22.026

帕金森病(PD)是發(fā)生于中老年時(shí)期,以震顫、肌強(qiáng)直、運(yùn)動(dòng)減少、姿勢異常為主要表現(xiàn)的一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)變態(tài)退行性疾病，屬中醫(yī)“顫證”范疇；西醫(yī)治療方法目前有藥物治療、手術(shù)、細(xì)胞移植、基因技術(shù)等。臨床中最常用的方法為多巴制劑治療〔1〕；近年來，隨著傳統(tǒng)中醫(yī)學(xué)對PD認(rèn)識的深化及臨床經(jīng)驗(yàn)的積累和實(shí)驗(yàn)研究的開展，中醫(yī)中藥參與治療PD的文獻(xiàn)報(bào)道日益增多〔2～5〕，在解除病痛、改善生活質(zhì)量方面中醫(yī)藥有獨(dú)特的療效。抑顫顆粒是由臨床經(jīng)驗(yàn)方開發(fā)的院內(nèi)制劑，由熟地黃、山茱萸、天麻、白芍等七味藥材組成，具有滋補(bǔ)肝腎、平肝熄風(fēng)的作用，主要用于治療肝腎虧虛，肝風(fēng)內(nèi)動(dòng)型PD，有很好的臨床療效。為控制該制劑的質(zhì)量，本文采用高效液相色譜法對芍藥苷的含量進(jìn)行研究，并建立含量測定標(biāo)準(zhǔn)。

吉林省科技廳重點(diǎn)科技攻關(guān)項(xiàng)目(20150204054YY)

1 長春中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)內(nèi)科2016級研究生

2 長春中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)2014級研究生

3 長春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院

楊 戈(1975-)，男，副主任醫(yī)師，主要從事中醫(yī)內(nèi)科研究。

陸 珞(1984-)，女，主管中藥師，主要從事中藥藥劑研究。