岳彥峰， 彭士明， 張晨捷， 高權(quán)新， 施兆鴻， 夏連軍， 王 偉

(農(nóng)業(yè)部東海漁業(yè)資源開發(fā)利用重點實驗室，中國水產(chǎn)科學(xué)研究院東海水產(chǎn)研究所，上海 200090)

六斑刺鲀?nèi)斯び缂夹g(shù)研究

岳彥峰， 彭士明*， 張晨捷， 高權(quán)新， 施兆鴻， 夏連軍， 王 偉

(農(nóng)業(yè)部東海漁業(yè)資源開發(fā)利用重點實驗室，中國水產(chǎn)科學(xué)研究院東海水產(chǎn)研究所，上海 200090)

六斑刺鲀是一種極具養(yǎng)殖開發(fā)潛力的經(jīng)濟魚類，廣泛分布于我國東南沿海，本文研究了六斑刺鲀的人工育苗技術(shù)。2017年于海南瓊海潭門收購性成熟的六斑刺鲀親魚，運回至實驗基地進(jìn)行人工馴養(yǎng)，親魚在營養(yǎng)強化培育后，自然產(chǎn)卵受精，將受精卵置于水泥池中進(jìn)行孵化，得到的初孵仔魚直接在孵化池中進(jìn)行培育。在水溫29.0～31.0 ℃、鹽度30.0～32.0條件下，受精卵經(jīng)80 h左右孵化出膜，初孵仔魚全長約3.1 mm。初孵仔魚第2 d開口攝食，可以投喂?fàn)I養(yǎng)強化后的輪蟲以及鹵蟲無節(jié)幼體為主；第4 d時，改投1 mm以下小規(guī)格的橈足類以及鹵蟲無節(jié)幼體；第10 d時，可以投1 mm以上大規(guī)格的橈足類；第15 d發(fā)育至稚魚時，投喂南美白對蝦的無節(jié)幼體以及2 mm左右的豐年蟲；第20 d時，投喂5 mm以上的豐年蟲；第35 d發(fā)育至幼魚時，適量投喂蝦肉糜和魚寶顆粒飼料，使六斑刺鲀幼魚逐漸轉(zhuǎn)化為攝食人工飼料。經(jīng)約40 d 培育，獲得全長2.0～2.6 cm的六斑刺鲀幼魚。育苗成活率為5～6%。

六斑刺鲀； 馴化； 仔魚； 人工繁殖

六斑刺鲀(Diodonholocanthus)隸屬于鲀形目(Tetraodontiformes)，刺鲀科(Diodontidae)，刺鲀屬(Diodon)，俗名氣瓜仔、刺龜?shù)?；分布較廣，在我國各海域均有分布，棲息于巖礁區(qū)之淺水域，不善游泳，行動緩慢[1-2]。肉食性，堅硬的頜齒可咬碎貝類、棘皮動物及螃蟹等無脊椎動物。六斑刺鲀?nèi)赓|(zhì)鮮美，魚皮富含膠原蛋白，深受市場歡迎，最高時可達(dá)200～240元/kg。近年來，六班刺鲀因其具有食用、藥用及觀賞等價值而越來越受到關(guān)注，市場潛力巨大。目前六斑刺鲀來源全部為捕撈，天然資源也因過度捕撈呈銳減趨勢[3]，而且其人工養(yǎng)殖和繁育技術(shù)研究也較少[4-5]。本研究通過在海南收集活的親本，通過人工馴養(yǎng)，成功獲得受精卵，并孵化培育出幼魚，已初步摸清了六斑刺鲀親本人工馴養(yǎng)的技術(shù)方法以及人工繁育技術(shù)。

1 材料與方法

1.1親魚來源與培育

親魚來源于海南瓊海潭門漁港收購漁民捕撈的野生親魚。親魚培育期間每天定點定時投喂兩次，投喂餌料為鮮活的蟶子或者蛤類，飽食投喂。養(yǎng)殖期間水溫27.5～30.0 ℃，pH 7.8～8.2，鹽度29.0～32.0‰，溶氧保持>5 mg/L。

1.2受精卵獲得及孵化

親本經(jīng)人工馴養(yǎng)后，成熟親魚會在產(chǎn)卵季節(jié)(5～9月)每月上中旬的晚上自然產(chǎn)卵，為浮性卵，次日用100目的篩絹網(wǎng)收集受精卵；將收集后的受精卵用新鮮海水和紗網(wǎng)反復(fù)清洗干凈并去除雜質(zhì)以及死卵；1 ppm甲醛殺菌10 min后放入孵化池(3 m×4 m×1.2 m)內(nèi)孵化，受精卵密度為5 000 粒/m3。

1.3開口餌料篩選

在苗種培育期間進(jìn)行了輪蟲、鹵蟲無節(jié)幼體、輪蟲+鹵蟲無節(jié)幼體、輪蟲+鹵蟲無節(jié)幼體+微囊懸浮飼料BP+車元配合飼料四種不同開口餌料以及培育過程中添加VC與EM菌對初孵仔魚成活率影響的研究。不同投喂餌料以及添加VC與EM菌對初孵仔魚成活率的影響試驗開始時間均為初孵仔魚第2 d；兩個試驗周期均為35 d；兩個試驗每組均設(shè)3個平行，每個平行100尾初孵仔魚，待初孵仔魚發(fā)育為幼魚時分別統(tǒng)計各自的成活率，數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤( mean±SE) 表示，試驗結(jié)果用SPSS13軟件進(jìn)行統(tǒng)計與分析，采用Duncan氏檢驗進(jìn)行多重比較，P<0.05即認(rèn)為有顯著性差異。

1.4苗種培育

初孵仔魚前3d投喂經(jīng)營養(yǎng)強化的輪蟲(7～8 個/mL)，鹵蟲無節(jié)幼體(3～5 個/mL)，同時添加1 ppm的BP(一種微囊懸浮飼料)，1 ppm車元(一種人工配合顆粒飼料)。

初孵仔魚生長到第4 d時，改投1 mm以下小規(guī)格的橈足類和鹵蟲無節(jié)幼體，池內(nèi)橈足類和鹵蟲無節(jié)幼體密度維持3～5個/mL，同時添加 1 ppm的BP，1ppm車元。

初孵仔魚生長到10天時，投喂1 mm以上大規(guī)格的橈足類(或者大型枝角類，例如蒙古裸腹溞)，以及營養(yǎng)強化后豐年蟲，餌料密度維持3～5 個/mL。

第15d左右，初孵仔魚發(fā)育至稚魚期，此時可投喂南美白對蝦的無節(jié)幼體以及2 mm左右的豐年蟲；第20 d時，可投喂5 mm以上的豐年蟲以及10 mm以下的南美白對蝦蝦苗。第35天左右，發(fā)育至幼魚期，可適量投喂蝦肉糜和魚寶顆粒飼料，使六斑刺鲀幼魚逐漸轉(zhuǎn)化為攝食魚寶顆粒飼料。

換水操作：初孵仔魚入池第1天至第3天一般不換水或少量換水，換水量不宜超過20%，第4天以后可以逐漸加大換水量至50%左右，在仔魚發(fā)育成稚魚及幼魚階段，換水量可以增大至80%左右，以后慢慢換水改成流水飼養(yǎng)，流速50～80 L/min，池底垃圾要及時吸出。苗種培育期間池內(nèi)可潑灑1ppm的VC用以提高苗種免疫力及抗應(yīng)激能力以及0.5 ppmEM菌用以改善水質(zhì)。在改為流水培育之前的育苗過程中，育苗池需每天加入微綠球藻，使水色保持淡綠色，定時測池內(nèi)亞硝酸鹽含量，池內(nèi)亞硝酸鹽含量控制在0.3 mg/L以下。

育苗海水經(jīng)砂濾，水質(zhì)符合我國《海水水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)》 ( GB3097—1997 ) 中一類海水，孵化鹽度30.0～32.0，溫度29.0 ～31.0℃，pH 7.8～8.2，溶氧保持>5 mg/L。每m20.5個充氣頭，光照強度控制在5 000 lx～10 000 lx。

每天檢查育苗池內(nèi)餌料生物量，觀察仔、稚、幼魚的生活習(xí)性，攝食情況以及形態(tài)變化。

2 育苗結(jié)果

2.1親魚馴養(yǎng)

研究期間共收集野生六斑刺鲀親魚641尾，馴養(yǎng)成活率90.3%，可見野生六斑刺鲀親魚在人工馴養(yǎng)環(huán)境下具有較高的存活率。

表1 六斑刺鲀親魚人工馴養(yǎng)情況Tab.1 Domestication of brood fish

2.2受精卵孵化與苗種培育

研究期間共有2批較大規(guī)模自然產(chǎn)卵，共獲受精卵32.0萬粒，平均受精率60.0%。六斑刺鲀受精卵在水溫29.0～30.0 ℃、鹽度 30.0～32.0的條件下，經(jīng)過約84 h孵出出膜，平均孵化率30.9%，共獲初孵仔魚5.5萬尾(表2)。兩批受精卵的受精率在60%左右，孵化率都低于50%，兩批人工育苗的結(jié)果顯示，培育的幼魚數(shù)量不多，育苗的成活率在5%左右。

表2 兩批受精卵的受精、孵化情況及對應(yīng)苗種數(shù)量Tab.2 Fertilization and hatching of fertilized eggs

圖1 六斑刺鲀?nèi)L與日齡關(guān)系Fig.1 Relationship between length and daily age

由圖1可知，前15 d生長曲線比較平緩，初孵仔魚生長比較緩慢，15 d后生長曲線呈明顯的升高趨勢，仔魚生長速度逐漸加快。

表3 不同開口餌料對仔魚成活率的影響Tab.3 Effects of initial feedingon survival rate of larvae

注：不同上標(biāo)字母表示具有顯著性差異(P< 0.05)

Note: Different letters indicate significant differences from each other groups (P< 0.05)

如表3所示，從不同開口餌料仔魚成活率情況可知，苗池中7～8個/mL輪蟲密度、3～5 個/mL鹵蟲無節(jié)幼體密度、及1 mg/L的BP、1 mg/L車元處理組仔魚成活率為最高，顯著高于其它處理組(P< 0.05)。

如表4所示，正常培育處理組與額外添加VC、EM菌處理組仔魚成活率的情況。由表4可以看出，VC與EM菌的添加可顯著提高仔魚的成活率(P< 0.05)。

表4 VC與EM菌處理對刺鲀仔魚(孵化后9 d)成活率的影響Tab.4 Effects of feed fortified with VCand EM on survival rate of larvae

注：*表示顯著性高于對照組(P< 0.05)

Note: *indicates significant differences between experimental group and the control group (P< 0.05)

3 討論

3.1六斑刺鲀親魚馴養(yǎng)

人工育苗技術(shù)一般包括野生原種的馴化、親魚培育、疾病防治、營養(yǎng)添加、促生長、促性腺發(fā)育產(chǎn)卵孵化、魚苗培育以及生物餌料培養(yǎng)、營養(yǎng)強化等一些過程[5]。為了提供足夠的優(yōu)質(zhì)苗種，培養(yǎng)親魚產(chǎn)生優(yōu)質(zhì)的卵子顯得尤為重要，親魚的來源有兩種途徑：一是海捕，二是保種、留種或者引種[6]。六斑刺鲀?nèi)斯し庇夹g(shù)在國內(nèi)尚屬空白，因此采用了海捕親本。

一般在馴化野生親本時要考慮其生長環(huán)境、食性和繁殖等生物學(xué)特性，并且馴化階段、餌料和馴化環(huán)境對馴化成功率的影響很大[7-8]。本次親本馴化屬于初次嘗試，存在著一些問題，六斑刺鲀親魚馴化期間，死亡數(shù)量較多的階段主要集中在前15 d。推測其原因為：第一，剛剛運回的親魚由于運輸過程中受到刺激，產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)致死；再者，在馴化過程中餌料轉(zhuǎn)化階段，有些親魚不能從野生餌料轉(zhuǎn)化為人工投喂的餌料，不攝食，饑餓而死，因此合理設(shè)計飼料投喂配方顯得尤為重要；最后就是馴養(yǎng)親魚密度不宜太高，密度過高病害增多，致使親魚死亡，因此應(yīng)當(dāng)選擇體質(zhì)健碩的個體、盡量模仿天然水域環(huán)境，減少養(yǎng)殖密度[9]。

3.2受精率和孵化率

魚卵質(zhì)量很大程度上決定了卵子的成活率和出膜率，親魚的培育直接影響魚卵和魚苗質(zhì)量[10-11]。日本學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，5月份以后，水溫在23 ℃以上，便可觀察到性成熟的六斑刺鲀有互相追尾和產(chǎn)卵的行為[12]。孵化率受水溫及鹽度等外界環(huán)境影響比較大，而內(nèi)在因素如精、卵成熟度及受精率是關(guān)鍵影響因子。其他鲀類受精卵研究人員也進(jìn)行過相關(guān)研究，比如在水溫 18.6～21.5 ℃ 條件下，暗紋東方鲀約139 h，而弓斑東方鲀約為169 h，與本研究中的六斑刺鲀孵化時間有很大差異，原因可能是魚種類不同或者受不同孵化溫度的影響，在適宜孵化溫度條件下，溫度越低孵化時間越長。此次試驗受精卵全部為親魚在人工馴養(yǎng)環(huán)境下自然產(chǎn)卵，受精率以及孵化率都不是很高，分析原因可能是野生親魚對人工養(yǎng)殖環(huán)境不能在短期內(nèi)完全適應(yīng)，加之人工馴化方法還有待改進(jìn)，導(dǎo)致雌雄性成熟的同步性較差，雌魚產(chǎn)卵時，雄魚性腺成熟度不高，精子質(zhì)量較差，受精率較低。

另外，刺鲀卵為浮性卵，浮在水面后聚成一片，略有粘性，孵化時可采用充氣增加水流，以避免粘連和堆疊造成卵霉，影響孵化率[13]。

3.3初孵仔魚培育

六斑刺鲀初孵仔魚全長2.84 mm左右，個體相對于鲀科魚類中尚屬較小，因此其育苗要較鲀科魚類復(fù)雜，暗紋東方鲀育苗技術(shù)現(xiàn)已比較成熟，初孵仔魚開口培育階段中投喂初孵豐年蟲便可獲得較大的成活率[15]。六斑刺鲀魚開口時口裂(1.1～1.3 mm)相對一般海水魚類略大，鹵蟲幼體(0.4～0.6 mm)或者規(guī)格較小(0.5～0.7 mm)的橈足類完全能被吞咽。但即使稚魚可以攝食鹵蟲幼體，但仔魚階段的培育死亡率仍比較高。在對死亡的仔魚進(jìn)行解剖后，在鏡檢觀察時發(fā)現(xiàn)，死亡仔魚消化道都空空如也，說明從內(nèi)源性營養(yǎng)到外源性開口餌料轉(zhuǎn)化沒有成功，致死原因不排除外界環(huán)境條件和初孵仔魚本身的質(zhì)量問題。相比于東方鲀，六斑刺鲀?nèi)斯し庇夹g(shù)與其人工繁育技術(shù)還是存在一定的不同之處，具體機制還需后期進(jìn)行深入的研究[15]。另外，在苗種培育中，做到餌料轉(zhuǎn)換時的適度重疊，以符合仔魚攝食行為和餌料適口性轉(zhuǎn)換的過渡性需要，提高苗種成活率[16]，提高初孵仔魚的成活率尚需進(jìn)一步研究，可以從開口餌料的多元化、培育過程中加入VC以及EM菌來提高仔魚的成活率。

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ArtificialpropagationtechniqueofDiodonholocanthus

YUE Yan-feng, PENG Shi-ming*, ZHANG Chen-jie, GAO Quan-xin, SHI Zhao-hong, XIA Lian-jun, WANG Wei

(KeyLaboratoryofEastChinaSeaFisheryResourcesExploitation,MinistryofAgriculture;EastChinaSeaFisheriesResearchInstitute,ChineseAcademyofFisherySciences,Shanghai200090,China)

Porcupine puffers (Diodonholocanthus) are distributed widely in the southeast coast of China, and they are regarded as a significant commercial fish species with high economic potential. The paper explored the artificial propagation technique ofD.holocanthus. At breeding season of 2017, we purchased some matureD.holocanthusfrom Tanmen dock, Hainan Province, and then transported them to experimental base for domestication. Brood fish spawned naturally after nutrient enrichment culture. Fertilized eggs were transferred into cement ponds for hatch. And hatched larvae were cultivated in the cement ponds. Fertilized eggs would hatch in about 80 hrs under ambient temperature (29.0 -31.0 ℃) and salinity (30.0-32.0). Length of hatched larvae was about 3.1 mm. At 2 days after hatch, larvae were fed with rotifer and artemia nauplii. After 4 days, larvae were fed with copepod and artemianauplii with size smaller than 1mm. After 10 days，larvae were fed with copepod with size bigger than 1mm.Penaeusvannameinauplii and 2mm copepod could be fed at 15 days after hatch when the fish entered the larval stage. After 20 days ,the size of food organism could be bigger than 5mm. After 35 days, shrimp meat and pellet could be fed when the fish entered the juvenile stage. Then the fish were gradually transformed into feeding pellets. After 40 days of artificial cultivation, we acquiredD.holocanthusjuvenile whose sizes were 2.0-2.6 cm. Survival rate of fry during studies on artificial propagation was 5%-6%.

Diodonholocanthus；domestication；larvae；artificial propagation

2095-3666(2017)04-0290-05

10.13233/j.cnki.fishis.2017.04.009

2017-09-20

2017-10-18

中央級公益性科研院所基本科研業(yè)務(wù)費(1910-2017)

岳彥峰(1985-)，助理研究員，主要從事海水魚類繁育生物研究。E-mail：492431429@qq.com

彭士明，博士，副研究員。E-mail: shiming.peng@163.com

S 962.2

A