李宗濤，顧笑梅，孫國(guó)貴，李 娟，張 浩

(1.河北省唐山市工人醫(yī)院乳腺外科 063000；2.河北省唐山市婦幼保健院婦產(chǎn)科 063000；3.河北省唐山市人民醫(yī)院放化療科 063000)

·論著·

Wip1基因重組慢病毒表達(dá)載體的構(gòu)建及其對(duì)乳腺癌MCF-7細(xì)胞生物學(xué)行為的影響研究

李宗濤1，顧笑梅2，孫國(guó)貴3，李 娟2，張 浩2

(1.河北省唐山市工人醫(yī)院乳腺外科 063000；2.河北省唐山市婦幼保健院婦產(chǎn)科 063000；3.河北省唐山市人民醫(yī)院放化療科 063000)

目的構(gòu)建Wip1基因重組慢病毒表達(dá)載體，研究其對(duì)乳腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。方法以慢病毒感染方法將Wip 1的短發(fā)夾狀RNA(shRNA)轉(zhuǎn)入乳腺癌MCF-7細(xì)胞。采用qRT-PCR和蛋白質(zhì)印跡法(Western blot)檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞Wip1 mRNA、蛋白的表達(dá)，MTT法、流式細(xì)胞術(shù)及Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Wip1-shRNA對(duì)MCF-7細(xì)胞增殖、凋亡、周期及侵襲轉(zhuǎn)移的影響。篩選具有抑制 p53基因表達(dá)的干擾RNA分子p53dsRNA,并分析其干擾后對(duì)乳腺癌MCF-7細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的影響。結(jié)果轉(zhuǎn)染48 h后，Wip1-shRNA組細(xì)胞熒光較強(qiáng)，NC-shRNA組較弱。Wip1-shRNA組細(xì)胞Wip1 mRNA和蛋白的表達(dá)分別為0.291±0.025、0.203±0.021與NC-shRNA組0.954±0.090、0.963±0.092比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Plt;0.05)。兩組各時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞存活率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Plt;0.05)。NC-shRNA組早期與晚期細(xì)胞的凋亡數(shù)少于Wip1-shRNA組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Plt;0.05)。NC-shRNA組細(xì)胞G0+G1期、S期細(xì)胞數(shù)分別為53.5±3.6、27.3±1.5，Wip1-shRNA組分別為72.3±5.2、14.6±0.8,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Plt;0.05)。Transwell侵襲轉(zhuǎn)移結(jié)果表明，NC-shRNA組細(xì)胞的穿膜數(shù)均多于Wip1-shRNA組(Plt;0.05)。對(duì)照組細(xì)胞中p53 mRNA的表達(dá)、細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的穿膜數(shù)與p53dsRNA組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Plt;0.05)。結(jié)論RNA干擾可有效抑制乳腺癌MCF-7細(xì)胞Wip1表達(dá),Wip1可能通過(guò)調(diào)控蛋白表達(dá)影響乳腺癌細(xì)胞增殖、凋亡、周期與侵襲轉(zhuǎn)移，p53dsRNA干擾p53 基因下調(diào)后增加乳腺癌MCF-7細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的能力。

Wip1；乳腺腫瘤；細(xì)胞凋亡；基因轉(zhuǎn)染

慢病毒屬逆轉(zhuǎn)錄病毒科，是以HIV-1為基礎(chǔ)發(fā)展起來(lái)的基因治療載體。其能夠在人和動(dòng)物的細(xì)胞系或原代細(xì)胞中高效地導(dǎo)入目的基因或者RNA干擾，效果維系時(shí)間長(zhǎng)并且很穩(wěn)定，可以在宿主細(xì)胞中成功整合目的基因，目的基因隨著機(jī)體細(xì)胞進(jìn)行分裂增殖，還可以對(duì)非分裂的細(xì)胞進(jìn)行整合。

全球每年新增乳腺癌患者120萬(wàn)，每年死亡人數(shù)約50萬(wàn)人，我國(guó)主要城市近10來(lái)發(fā)病率增長(zhǎng)了37%。目前，乳腺癌目前已成為嚴(yán)重威脅婦女健康的第一大殺手，其早期診斷、惡性程度分析及預(yù)后判斷是當(dāng)今研究的熱點(diǎn)。

本文采用慢病毒感染方法將Wip1的短發(fā)夾狀RNA(shRNA)轉(zhuǎn)入乳腺癌MCF-7細(xì)胞，采用qRT-PCR和蛋白質(zhì)印跡法(Western blot)檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞Wip1 mRNA、蛋白的表達(dá)，MTT法、流式細(xì)胞術(shù)及Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Wip1-shRNA對(duì)MCF-7細(xì)胞增殖、凋亡、周期及侵襲轉(zhuǎn)移的影響，給臨床治療乳腺癌及預(yù)后的判斷帶來(lái)新的可能。

1 材料與方法

1.1材料與試劑 乳腺癌MCF-7細(xì)胞購(gòu)自中科院腫瘤醫(yī)院細(xì)胞庫(kù)；以pLenti.puro-shWip1-eGFP為質(zhì)粒和載體，針對(duì)Wip1對(duì)shRNA干擾的慢病毒重組質(zhì)粒予以構(gòu)建，并實(shí)現(xiàn)Wip1-shRNA及陰性對(duì)照shRNA(NC-shRNA)慢病毒的包裝；病毒載體購(gòu)自廣州賽業(yè)生物科技有限公司，引物設(shè)計(jì)及合成由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司提供。qRT-PCR試劑盒購(gòu)自北京索來(lái)寶公司；兔抗人單克隆抗體Wip1、p53購(gòu)自美國(guó)Abcam公司；p53dsRNA合成由廣州銳博生物有限公司提供。

1.2方法

1.2．1細(xì)胞培養(yǎng)與慢病毒感染 感染前1 d將乳腺癌MCF-7細(xì)胞以每孔105個(gè)接種于24孔板中，待細(xì)胞生長(zhǎng)達(dá)80%范圍時(shí)把慢病毒稀釋液(含NC-shRNA或Wip1-shRNA質(zhì)粒)1 mL加入。在感染病毒12 h之后，把病毒液吸去并將DMEM培養(yǎng)基1 mL加入予以繼續(xù)培養(yǎng)。感染病毒48 h之后，對(duì)帶有綠色熒光的細(xì)胞在熒光顯微鏡下加以挑取，從而克隆擴(kuò)大培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)分為空轉(zhuǎn)染組(NC-shRNA組)、轉(zhuǎn)染組(Wip1-shRNA組)。

1.2.2RNA提取與qRT-PCR Wip1按Trizol試劑說(shuō)明提取細(xì)胞總RNA，根據(jù)qRT-PCR試劑盒說(shuō)明逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，進(jìn)行PCR擴(kuò)增。Wip1上游引物：5′-TTC CCC ATG TTC TAC ACC ACC AG-3′，下游引物：5′-TGA GGG TAT GAC TAC ACC TTG GAC-3′；GAPDH上游引物：5′-GTC TCC TCT GAC TTC AAC AGC G-3′，下游引物：5′-ACC ACC CTG TTG CTG TAG CC-3′。 PCR反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性60 s，95 ℃變性15 s，60 ℃退火60 s，72 ℃延伸45 s，40個(gè)循環(huán)。利用瓊脂糖凝膠電泳成像系統(tǒng)成像，表達(dá)量以Wip1和GAPDH電泳條帶灰度比值表示。

1.2.3Western blot 提取轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞總蛋白，BCA法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度。10%十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳實(shí)現(xiàn)蛋白的分離，進(jìn)行固相支持體(聚偏氟乙烯膜)室溫封閉蛋白質(zhì)1 h，分別與Wip1抗體、p53抗體和GAPDH抗體 (稀釋均為1∶500) 反應(yīng)過(guò)夜(4 ℃)，熒光二抗(稀釋1∶2 000)進(jìn)行1 h室溫孵育。掃描顯像由紅外激光成像系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)，表達(dá)量通過(guò)目的條帶與GAPDH條帶灰度比值表示。

1.2.4MTT法 取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期接種密度70%～80% NC-shRNA組、Wip1-shRNA組細(xì)胞按每孔5 000個(gè)細(xì)胞、每孔體積200 μL在96孔培養(yǎng)板內(nèi)予以接種。終止培養(yǎng)時(shí)間為24、48、72、96 h。5 mg/mL MTT溶液20 μL在培養(yǎng)終止前4 h加入,繼續(xù)培養(yǎng)4 h，除去培養(yǎng)基，每孔加入200 μL DMSO,予以振蕩直到結(jié)晶溶解為止。利用全自動(dòng)酶標(biāo)儀檢測(cè)各孔吸光度(A)值，490 nm為其檢測(cè)波長(zhǎng)，620 nm為其參考波長(zhǎng)。細(xì)胞存活率(%)=實(shí)驗(yàn)組A值/對(duì)照組A值×100%。

1.2.5細(xì)胞凋亡、周期實(shí)驗(yàn) 細(xì)胞凋亡：選擇對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期接種密度70%～80% NC-shRNA組、Wip1-shRNA組細(xì)胞。 把細(xì)胞消化、收集，用預(yù)冷的4 ℃磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗2次，以1 mL結(jié)合緩沖液將細(xì)胞重新懸浮，濃度每毫升1×106,在5 mL流式管中加入100 μL細(xì)胞懸液，每管加入10 μL碘化丙啶，并進(jìn)行15 min的均勻避光。細(xì)胞周期：取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期接種密度70%～80%NC-shRNA組、Wip1-shRNA組細(xì)胞。將細(xì)胞消化、收集，用預(yù)冷的4 ℃ PBS沖洗2次，使其濃度為每毫升1×106,在5 mL流式管中加入195 μL的細(xì)胞懸液，每管加入Annexin V-FITC 5 μL和PI 的10 μL碘化丙啶，并進(jìn)行15 min的均勻避光。采用流式細(xì)胞儀上機(jī)檢測(cè)。

1.2.6Transwell侵襲實(shí)驗(yàn) 聚碳酸脂微孔濾膜上鋪Matrigel凝膠(8.4 g/L) 50 μL或無(wú)Matrigel凝膠聚碳酸脂微孔濾膜，NC-shRNA組、Wip1-shRNA組細(xì)胞均以無(wú)血清培養(yǎng)基制成細(xì)胞懸液(每毫升1×106個(gè))；各取50 μL 在小室進(jìn)行移入，800 μL 10% DMEM完全培養(yǎng)基在下室加入；培養(yǎng)18 h后，用棉簽把濾膜上室面的細(xì)胞刮除，在下室面的細(xì)胞實(shí)現(xiàn)侵襲并黏附，使用4%多聚甲醛固定，進(jìn)行20 min 0.1%結(jié)晶紫的染色。每張膜中央部分和周?chē)糠指麟S機(jī)取5個(gè)視野,計(jì)數(shù)每個(gè)視野內(nèi)的穿過(guò)8 μm微孔的細(xì)胞數(shù)。腫瘤細(xì)胞的侵襲能力用每個(gè)視野的平均數(shù)表示。

1.2.7p53dsRNA沉默效應(yīng)的鑒定 在 p53dsRNA 中篩選出能夠沉默基因且效應(yīng)最強(qiáng)的一個(gè)siRNA序列用于之后共轉(zhuǎn)染的實(shí)驗(yàn)。將p53dsRNA稀釋后與 Lipofectamine2000試劑混合，形成siRNA/Lipofectamine2000復(fù)合物，再將轉(zhuǎn)染復(fù)合物加入到乳腺癌MCF-7細(xì)胞與Opi-MEM培養(yǎng)液的培養(yǎng)板中，siRNA濃度為50 nmol,總體積為2 mL。6 h后換含10% 胎牛血清的RPMI 1640 培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，48 h后提取總RNA，行qRT-PCR 觀察p53沉默效應(yīng)。

2 結(jié) 果

2.1慢病毒感染篩選穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株及其對(duì)細(xì)胞Wip1 mRNA和蛋白的表達(dá)影響 轉(zhuǎn)染48 h后，Wip1-shRNA組細(xì)胞轉(zhuǎn)染率都在85%以上，熒光較強(qiáng)；NC-shRNA組細(xì)胞轉(zhuǎn)染率只有20%左右，熒光較弱，見(jiàn)圖1。Wip1-shRNA組細(xì)胞Wip1 mRNA和蛋白表達(dá)分別為0.291±0.025、0.203±0.021與NC-shRNA組0.954±0.090、 0.963±0.092比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Plt;0.05)。

2.2Wip1-shRNA對(duì)乳腺癌MCF-7細(xì)胞增殖、凋亡、周期、侵襲轉(zhuǎn)移的影響 兩組各時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞存活率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Plt;0.05)，見(jiàn)圖2。NC-shRNA組早期與晚期細(xì)胞的凋亡數(shù)為(5.4±0.6)%，Wip1-shRNA組為(17.6±0.9)%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Plt;0.05)，見(jiàn)圖3。NC-shRNA組細(xì)胞G0+G1期、S期細(xì)胞數(shù)分別為53.5±3.6、27.3±1.5，Wip1-shRNA組分別為72.3±5.2、14.6±0.8,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Plt;0.05)，見(jiàn)圖4。Transwell侵襲結(jié)果表明，NC-shRNA組細(xì)胞的穿膜數(shù)為106.0±11.0，Wip1-shRNA組為49.0±6.0，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Plt;0.05)；Transwell轉(zhuǎn)移結(jié)果表明，NC-shRNA組細(xì)胞的穿膜數(shù)為96.0±9.0，Wip1-shRNA組為42.0±4.01，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Plt;0.05)，見(jiàn)圖5。

A：NC-shRNA組；B：Wip1-shRNA組

圖1兩組轉(zhuǎn)染情況(熒光×100)

圖2 Wip1-shRNA對(duì)乳腺癌MCF-7細(xì)胞存活率的影響

A：NC-shRNA組；B：Wip1-shRNA組

圖3流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)乳腺癌MCF-7細(xì)胞凋亡情況

A：NC-shRNA組；B：Wip1-shRNA組

圖4流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)乳腺癌MCF-7細(xì)胞周期情況

2.3Wip1-shRNA對(duì)乳腺癌MCF-7細(xì)胞p53蛋白的表達(dá)影響 NC-shRNA組細(xì)胞中p53蛋白表達(dá)的相對(duì)表達(dá)量為0.765±0.067，Wip1-shRNA組為0.315±0.033，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Plt;0.05)。見(jiàn)圖6。

圖5 Transwell檢測(cè)乳腺癌MCF-7細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移情況(×100)

圖6 Western blot檢測(cè)乳腺癌MCF-7細(xì)胞 p53蛋白的表達(dá)

圖7 p53dsRNA對(duì)乳腺癌MCF-7細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的影響(×200)

2.4p53dsRNA對(duì)乳腺癌MCF-7細(xì)胞p53mRNA表達(dá)及侵襲轉(zhuǎn)移的影響 對(duì)照組、p53dsRNA組細(xì)胞p53 mRNA的相對(duì)表達(dá)量分別為0.663±0.047、0.190±0.013，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Plt;0.05)；對(duì)照組細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的穿膜數(shù)分別為135.0±14.0、104.0±9.0，p53dsRNA組分別為155.0±16.0、108.0±7.0，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Plt;0.05)。見(jiàn)圖7。

3 討 論

Wip1與Wild-type-53密切相關(guān)，受到Wild-p53的誘導(dǎo)，參與到DNA的損傷修復(fù)過(guò)程中，并發(fā)揮重要的作用[1]。Wip1在人類(lèi)卵巢癌、乳腺癌、髓母細(xì)胞瘤和神經(jīng)母細(xì)胞瘤中都有較高的表達(dá)水平[2]。主要定位于17號(hào)染色體，參與腫瘤細(xì)胞增殖、分化、抗凋亡等過(guò)程。對(duì)于Wip1來(lái)說(shuō)，它能夠?qū)崿F(xiàn)抑癌基因的抑制，導(dǎo)致癌癥的發(fā)生，并和多種原癌基因具有協(xié)同作用[3]。有研究顯示，Wip1能夠脫磷酸化H2AX并使檢測(cè)點(diǎn)修復(fù)得到促進(jìn)，加大腫瘤細(xì)胞的增殖速度[4]。除此之外，從某種程度來(lái)說(shuō)腫瘤發(fā)生、發(fā)展受到Wip1同NF-κB、BRCA1-IRIS[5]基因相互作用，并且在各種腫瘤中Wip1的高表達(dá)，對(duì)p53起負(fù)回饋調(diào)控作用可以通過(guò)p38MAPK/p53信號(hào)通路來(lái)實(shí)現(xiàn)[6]，同時(shí)具備誘導(dǎo)p53突變等特點(diǎn)[7]。以Wip1為靶點(diǎn)的基因治療研究開(kāi)始列入人們的計(jì)劃，利用RNA基因干擾技術(shù)沉默髓母細(xì)胞瘤D283細(xì)胞實(shí)現(xiàn)Wip1的高表達(dá)，增高了p53的表達(dá)水平，使腫瘤細(xì)胞凋亡得到誘導(dǎo)[2]。對(duì)于其介導(dǎo)的基因來(lái)說(shuō)，其表達(dá)作用具備持續(xù)且穩(wěn)定的特點(diǎn)，在宿主細(xì)胞基因組中目的基因能實(shí)現(xiàn)整合，同時(shí)它的分裂隨細(xì)胞基因組的分裂同時(shí)進(jìn)行[8]。

對(duì)于慢病毒來(lái)說(shuō)，它屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒科亞科的一種，屬于RNA病毒的范疇，逆轉(zhuǎn)錄病毒的特性明顯，基因組在經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄后可以在宿主DNA上整合，其增殖隨宿主細(xì)胞的增殖而進(jìn)行，另外具備使非分裂細(xì)胞感染、轉(zhuǎn)移基因片段容量大、持續(xù)性強(qiáng)目的基因表達(dá)、宿主免疫反應(yīng)不易誘發(fā)等優(yōu)點(diǎn)[9]。目前，在真核系統(tǒng)基因轉(zhuǎn)移慢病毒載體方面，它作為工具已經(jīng)備受青睞[9]。跟傳統(tǒng)的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體相比，慢性病毒載體具有整合基因不發(fā)生重排及高感染率等優(yōu)點(diǎn)[1]，另外其高效轉(zhuǎn)錄、宿主范圍廣、高效表達(dá)及高效整合的特點(diǎn)也值得關(guān)注。它不僅可以對(duì)分裂和非分裂細(xì)胞感染，同時(shí)對(duì)于靜止細(xì)胞還能夠?qū)崿F(xiàn)感染[10]。在進(jìn)行改構(gòu)之后，寄主細(xì)胞的死亡或者在宿主內(nèi)增殖的情況都不會(huì)出現(xiàn)，細(xì)胞在感染和轉(zhuǎn)化后可以實(shí)現(xiàn)傳代增殖[11]。因此利用慢病毒作載體，將動(dòng)物細(xì)胞的基因型改變，并遺傳到子代，成為生物領(lǐng)域干預(yù)基因?qū)嶒?yàn)的重要方法[12]。

本研究顯示，慢病毒載體可以對(duì)Wip1 mRNA、蛋白的表達(dá)起到有效地抑制，同時(shí)可以使細(xì)胞周期的變化得到明顯改變，細(xì)胞生長(zhǎng)也會(huì)因此受到抑制。且p53dsRNA對(duì)MCF-7細(xì)胞p53 mRNA表達(dá)及侵襲轉(zhuǎn)移也能產(chǎn)生影響。相關(guān)研究顯示：對(duì)于Wip1 shRNA慢病毒載體來(lái)說(shuō)，它對(duì)于MCF-7細(xì)胞內(nèi)Wip1的表達(dá)水平可以做到有效沉默，同時(shí)也會(huì)抑制乳腺癌細(xì)胞惡性增殖的特性[13]。有研究顯示，Wip1的基因沉默明顯抑制了乳腺癌細(xì)胞的遷移及侵襲能力，進(jìn)一步為Wip1在乳腺癌組織中表達(dá)規(guī)律及其是否參與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展均有積極的指導(dǎo)作用，為腫瘤新的靶向治療提供了理論依據(jù)。Parssinen等[11]研究中曾有相關(guān)報(bào)道。

Wip1 shRNA慢病毒載體可以做到有效沉默，同時(shí)在抑制細(xì)胞惡性增殖方面效果明顯。在惡性腫瘤的研究中，Wip1 RNA干預(yù)技術(shù)是乳腺癌靶向治療的新技術(shù)，是腫瘤治療方面研究的重點(diǎn)。

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ConstructionofWip1generecombinantlentiviralexpressionvectoranditseffectsonbreastcancerMCF-7cellbiologicalbehavior*

LiZongtao1,GuXiaomei2,SunGuogui3,LiJuan2,ZhangHao2

(1.DepartmentofBreastSurgery,TangshanMunicipalWorker′sHospital,Tangshan,Hebei063000,China;2.DepartmentofGynecologyandObstetrics,TangshanMunicipalMaternalandChildHealthCareHospital,Tangshan,Hebei063000,China;3.TangshanMunicipalPeople′sHospital,Tangshan,Hebei063000,China)

ObjectiveTo construct the Wip1 gene recombinant lentiviral expression vector and to investigate its effects on breast cancer cell biological behaviors.MethodsWip1 gene short hairpin RNAs (shRNA) was transfected into breast cancer MCF-7 cells through lentiviral infection method.Wip1 mRNA and protein expressions before and after transfection were detected by using qRT-PCR and Western blotting.The effects of Wip1-shRNA on the proliferation,apoptosis,cell cycle,invasion and metastasis in MCF-7 cells were determined by using the MTT assay,flow cytometry and transwell invasion test.Interfering RNA molecule p53dsRNA inhibiting p53 gene expression (p53 dsRNA) was screened,and the effect of p53 inhibition on MCF-7 cells invasion and metastasis was analyzed.ResultsAfter transfection for 48 h,the cellular fluorescence in the Wip1-shRNA group was stronger,while which in the NC-shRNA group was weaker.Cellular Wip1 mRNA and protein expressions in the Wip1 shRNA group were 0.291±0.025 and 0.203±0.021 respectively,which in the NC-shRNA group were 0.954±0.090 and 0.963±0.092 respectively,the difference between the two groups was statistically significant(Plt;0.05).The cellular survival rate at various time points had statistical difference between the two groups(Plt;0.05).The early and late cell apoptosis number in the NC-shRNA group was less than that in the Wip1-shRNA group,the difference was statistically significant(Plt;0.05).The cells numbers at phase G0+G1and phase S in the NC-shRNA group were 53.5±3.6 and 27.3±1.5 respectively,which in the Wip-shRNA group were 72.3±5.2 and 14.6±0.8 respectively,the difference was statistically significant(Plt;0.05).The Transwell invasion and metastasis results showed that the cell transmembrane number in the NC-shRNA group was more than that in the Wip1-shRNA group(Plt;0.05).The cellular p53 mRNA and protein expression had statistical difference between the control group and p53dsRNA group(Plt;0.05).ConclusionRNA interference can effectively suppress Wip1 expression in MCF-7 cells.Wip1 may affect the proliferation,apoptosis,cell cycle,invasion and metastasis of breast cancer cells by modulating protein expression.p53dsRNA increases the invasion and metastasis ability of breast cancer MCF-7 cells by interfering p53 gene down-regulation.

Wip1;breast neoplasms;apoptosis;gene silencing

10.3969/j.issn.1671-8348.2017.33.001

2015年度河北省醫(yī)學(xué)科研重點(diǎn)課題計(jì)劃(20150953)。

李宗濤(1978-)，副主任醫(yī)師，博士，主要從事乳腺癌及各種乳腺良性疾病的診斷、治療研究。

R73

A

1671-8348(2017)33-4609-04

2017-05-18

2017-07-26)