戚建鋒 吳翡斐 施金俏 翁巍 王文琴 王利民

抗細(xì)胞膜DNA抗體在系統(tǒng)性紅斑狼瘡診斷中的應(yīng)用價(jià)值

戚建鋒 吳翡斐 施金俏 翁巍 王文琴 王利民

目的 探討抗細(xì)胞膜DNA（mDNA）抗體在系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）診斷中的應(yīng)用價(jià)值。方法 選擇SLE患者137例（SLE患者組），同期其他自身免疫性疾病患者72例（其他自免疾病組），同期健康體檢者84例（健康對(duì)照組）。采用間接免疫熒光法檢測(cè)抗mDNA抗體和抗核抗體（ANA），采用ELISA法檢測(cè)抗雙鏈DNA（ds-DNA）抗體，采用免疫印跡法檢測(cè)核糖體P蛋白（Rib-P）抗體、抗史密斯（Sm）抗體及抗核小體抗體（AnuA）等其他自身抗體，評(píng)價(jià)各自身抗體指標(biāo)在3組血清中的靈敏度和特異度，以尋找診斷SLE的最佳免疫學(xué)指標(biāo)組合。結(jié)果 抗mDNA抗體在SLE患者組中的靈敏度（62.8%）明顯高于其他自免疾病組（12.5%）和健康對(duì)照組（2.4%），也明顯高于抗ds-DNA抗體（40.9%）、Rib-P抗體（21.2%）、抗Sm 抗體（18.2%）和AnuA（17.5%），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。137例SLE患者血清中抗ds-DNA抗體、Rib-P抗體、抗Sm抗體、AnuA分別與抗mDNA抗體聯(lián)合檢測(cè)的靈敏度明顯高于其自身單獨(dú)檢測(cè)的靈敏度，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.01）。在抗ds-DNA抗體、Rib-P抗體、抗Sm抗體、AnuA 4種抗體均陰性的SLE患者中，抗mDNA抗體的陽(yáng)性率達(dá)65.9%，聯(lián)合其他抗體能明顯提高SLE的陽(yáng)性率（87.6%）。結(jié)論 抗mDNA抗體是一種靈敏度較高、特異度強(qiáng)的SLE血清學(xué)標(biāo)志之一，與其他抗體聯(lián)合檢測(cè)在SLE診斷中有良好的互補(bǔ)作用，可明顯提高靈敏度，從而提高SLE的臨床診斷。

抗細(xì)胞膜DNA抗體 系統(tǒng)性紅斑狼瘡 靈敏度 特異度

系統(tǒng)性紅斑狼瘡（systemic lupus erythematosus，SLE）是一種嚴(yán)重危害人類健康的自身免疫性疾病，在我國(guó)人群的患病率接近千分之一。血清中以抗核抗體（ANA）為代表的多種自身抗體和多系統(tǒng)受累是SLE的兩個(gè)主要臨床特征。Chen等[1]研究發(fā)現(xiàn)抗細(xì)胞膜DNA（mDNA）抗體是一種新的特異性抗體，對(duì)診斷SLE有一定的參考價(jià)值。為尋找診斷SLE的最佳免疫學(xué)組合，本研究探討了抗mDNA抗體在SLE診斷中的臨床應(yīng)用價(jià)值。

1 對(duì)象和方法

1.1 對(duì)象 選擇2015年3月至2016年2月確診的SLE患者137例（SLE患者組），其中金華市人民醫(yī)院102例，金華市中心醫(yī)院35例；男10例，女127例；年齡12～69（38.9±12.8）歲，均符合 2009年美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)（ACR）修訂的分類標(biāo)準(zhǔn)[2]。選擇同期金華市人民醫(yī)院其他自身免疫性疾病患者72例（其他自免疾病組），男10例，女62例；年齡 25～69（41.8±9.0）歲。其中干燥綜合征（SS）36 例，結(jié)締組織病25例，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）7例，強(qiáng)直性脊柱炎（AS）2例，系統(tǒng)性血管炎2例，以上病例均符合各自的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]。選擇同期金華市人民醫(yī)院健康體檢者84例（健康對(duì)照組），男 14例，女 70例；年齡 19～74（39.1±15.8）歲。3組性別和年齡比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P ＞0.05）。

1.2 方法 采用間接免疫熒光法檢測(cè)抗mDNA抗體和ANA，抗mDNA抗體檢測(cè)試劑由北京大學(xué)人民醫(yī)院提供，ANA檢測(cè)試劑盒由德國(guó)歐蒙實(shí)驗(yàn)診斷有限公司（批號(hào)：f150712ua，規(guī)格10*10）提供，熒光顯微鏡為日本的OLIMPUS BX41。采用ELISA法檢測(cè)抗雙鏈DNA（ds-DNA）抗體，ds-DNA檢測(cè)試劑盒由上海一滴準(zhǔn)生物科技有限公司（批號(hào)：16020053，規(guī)格96t）提供，酶標(biāo)儀為瑞士的TECAN。采用免疫印跡法檢測(cè)核糖體P蛋白（Rib-P）抗體、抗史密斯（Sm）抗體與抗核小體抗體（AnuA）等其他自身抗體，自身抗體譜檢測(cè)試劑盒由德國(guó)歐蒙實(shí)驗(yàn)診斷有限公司（批號(hào)d151023ab，規(guī)格64*01）提供，采用德國(guó)歐蒙的半自動(dòng)分析儀EUROBlot MasterⅡ檢測(cè)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件?？贵w的靈敏度和特異度采用率表示，計(jì)數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗(yàn)，配對(duì)資料比較采用McNemar檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3組自身抗體靈敏度比較 SLE患者組抗mDNA抗體、抗ds-DNA抗體、Rib-P抗體、抗Sm抗體與AnuA的靈敏度均明顯高于其他自免疾病組和健康對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。而SLE患者組與其他自免疾病組ANA的靈敏度比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；但與健康對(duì)照組ANA的靈敏度比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 3組自身抗體靈敏度比較

2.2 137例SLE患者血清中抗mDNA抗體與其他抗體的靈敏度和特異度比較 137例SLE患者血清中抗mDNA抗體的靈敏度明顯高于抗ds-DNA抗體、Rib-P抗體、抗Sm抗體和AnuA，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），而特異度比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）?？筸DNA抗體與ANA的靈敏度比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；但特異度明顯高于ANA，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表 2。

2.3 137例SLE患者血清中抗mDNA抗體與其他自身抗體聯(lián)合檢測(cè)的靈敏度比較 137例SLE患者血清中抗ds-DNA抗體、Rib-P抗體、抗Sm抗體、AnuA分別與抗mDNA抗體聯(lián)合檢測(cè)的靈敏度明顯高于其自身單獨(dú)檢測(cè)的靈敏度，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.01），見(jiàn)表3。

表2 137例SLE患者血清中抗mDNA抗體與其他抗體的靈敏度和特異度比較

2.4 抗mDNA抗體在其他抗體陰性SLE患者中的陽(yáng)性率 在其他幾種抗體陰性的SLE患者中，抗mDNA抗體均具有較高的陽(yáng)性率，見(jiàn)表4。

表3 137例SLE患者血清中抗mDNA抗體與其他自身抗體聯(lián)合檢測(cè)的靈敏度比較

表4 抗mDNA抗體在其他抗體陰性的SLE患者中的陽(yáng)性率

2.5 尋找診斷SLE的最佳免疫學(xué)組合 137例SLE患者血清中聯(lián)合檢測(cè)組合（抗mDNA抗體+抗ds-DNA抗體+Rib-P抗體+抗Sm抗體+AnuA）陽(yáng)性120例，靈敏度為87.6%，明顯高于其他幾個(gè)組合，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）；而特異度與其他幾個(gè)組合比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05），見(jiàn)表5。

表5 137例SLE患者血清中多項(xiàng)自身抗體聯(lián)合檢測(cè)結(jié)果分析

3 討論

SLE是一種B細(xì)胞高度活躍的自身免疫性疾病，可產(chǎn)生多種自身抗體，其中具有診斷價(jià)值的特異性自身抗體有抗ds-DNA抗體、Rib-P抗體、抗Sm抗體及AnuA等，但其靈敏度不高，僅有10%～40%[4-5]。其發(fā)病機(jī)制不明，與遺傳、環(huán)境等因素有關(guān)[6-7]。茹晉麗等[8]報(bào)道有一種DNA分子可以在人B淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞和外周血白細(xì)胞膜上表達(dá)，并認(rèn)為這種DNA分子不同于細(xì)胞核內(nèi)DNA，它是一種線性的ds-DNA分子，分子量為17kb，細(xì)胞膜上相對(duì)分子質(zhì)量為28 000～30 000的mDNA結(jié)合蛋白可能為其受體。由于SLE患者存在mDNA受體功能障礙，使mDNA不能正常清除，mDNA分子作為一種獨(dú)特的靶抗原，誘導(dǎo)SLE患者產(chǎn)生抗mDNA抗體。利用間接免疫熒光法檢測(cè)SLE患者血清中的抗mDNA抗體，有較高的靈敏度（72.6%）和特異度（91.7%）[9]。但發(fā)現(xiàn)該抗體與SLE疾病活動(dòng)度評(píng)分表評(píng)分無(wú)相關(guān)性[8]。

本研究發(fā)現(xiàn)抗mDNA抗體在137例SLE患者血清組中的靈敏度（62.8%）明顯高于其他自免疾病組（12.5%）和健康對(duì)照組（2.4%），同時(shí)也明顯高于其他自身抗體指標(biāo)，但特異度相差不大。本研究還發(fā)現(xiàn)抗mDNA抗體在抗ds-DNA抗體、Rib-P抗體、抗Sm抗體及AnuA陰性的SLE患者中有較高的陽(yáng)性率，提示抗mDNA抗體的檢測(cè)在其他自身抗體陰性的SLE診斷中具有重要的參考意義。檢測(cè)抗mDNA抗體還可用于診斷少年SLE，特別是對(duì)于抗ds-DNA抗體和抗Sm抗體陰性的患者[10]。與抗ds-DNA抗體、Rib-P抗體、抗Sm抗體、AnuA等聯(lián)合檢測(cè)時(shí)可明顯提高靈敏度，說(shuō)明抗mDNA抗體在SLE診斷中有較高的參考價(jià)值，對(duì)SLE的早期診斷治療也有著十分重要的意義[11-12]。

綜上所述，抗mDNA抗體是一種靈敏度較高、特異度強(qiáng)的SLE血清學(xué)標(biāo)志之一，與抗ds-DNA抗體、Rib-P抗體、抗Sm抗體、AnuA聯(lián)合檢測(cè)在SLE診斷中有良好的互補(bǔ)作用，可明顯提高靈敏度，避免漏檢，從而提高SLE的臨床診斷。

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（本文由浙江省醫(yī)學(xué)會(huì)風(fēng)濕病學(xué)分會(huì)推薦）

Diagnostic value of anti-cell membrane DNA antibodies for systemic lupus erythematosus

QI Jianfeng,WU Feifei,SHI Jinqiao,et al.
Rheumatism Immunity Laboratory,Jinhua People's Hospital,Jinhua 321000,China

Objective To assess the diagnostic value of anti-cell membrane DNA(mDNA)antibodies for systemic lupus erythematosus(SLE). Methods The serum samples from 137 SLE patients(SLE group),72 non-SLE autoimmune diseases patients(non-SLE group)and 84 healthy subjects(control group)were collected.The antinuclear antibody(ANA)and anti-mDNA antibody were detected by indirect immunofluorescence assay,anti-double-stranded DNA(dsDNA)was detected by ELISA,ribosomal P protein(Rib-P)antibody,anti-Smith(Sm)antibody and anti-nucleosome antibody(AnuA)were detected by immunoblotting (IBT).The diagnostic values of above indicators were assessed. Results The positive rate of anti-mDNA antibody in SLE patients(62.8%)was significantly higher than that in non-SLE groups(12.5%)and control group(2.4%),which was significantly higher than that of anti-ds-DNA antibodies(40.9%),Rib-P antibody(21.2%),anti-Sm antibody(18.2%)and AnuA(17.5%)(all P＜0.05).The sensitivity of combination of anti-mDNA antibody with anti-ds-DNA antibody,Rib-P antibody,anti-Sm antibody or AnuA for diagnosis of SLE was all significantly higher than that of anti-mDNA alone(all P＜0.01).The positive rate of anti-mDNA antibody was 65.9%in SLE patients with other antibodies negative.The combination of anti-mDNA antibody with other antibodies significantly improved the detection rate of SLE (87.6%). Conclusion Anti-mDNA antibody is a sensitive serological marker of SLE,combination of anti-mDNA antibody with other indicators may further improve the sensitivity in diagnosis of SLE.

Anti-cellmembrane DNAantibody Systemic lupus erythematosus Sensitivity Specificity

10.12056/j.issn.1006-2785.2017.39.21.2017-1602

金華市科技計(jì)劃項(xiàng)目（2014-3-074）

321000 金華市人民醫(yī)院風(fēng)濕免疫實(shí)驗(yàn)室（戚建鋒、吳翡斐、施金俏、翁巍、王文琴）；金華市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科（王利民）

施金俏，E-mail：sjqfh99@163.com

2017-07-07）

陳麗）