劉榮，趙影，欒淑瑩，王振宇

（1.東北林業(yè)大學(xué)林學(xué)院，黑龍江哈爾濱150040；2.哈爾濱工業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，黑龍江哈爾濱150090）

黑木耳多糖降血脂作用的小鼠實(shí)驗(yàn)分析

劉榮1，趙影1，欒淑瑩1，王振宇2，*

（1.東北林業(yè)大學(xué)林學(xué)院，黑龍江哈爾濱150040；2.哈爾濱工業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，黑龍江哈爾濱150090）

采用不同劑量的兩種黑木耳酸性多糖（Auricularia Polysaccharide，AP）對高脂模型小鼠進(jìn)行灌胃，研究黑木耳多糖對高脂模型小鼠脂肪指數(shù)及相關(guān)酶類影響并初步探究黑木耳酸性多糖的降血脂作用。結(jié)果表明，兩種黑木耳多糖均可增加小鼠糞便中的膽酸鹽含量、卵磷脂膽固醇?；D(zhuǎn)移酶（lecithin-cholesterolacyltransferase，LCAT）含量（p<0.05）以及激素敏感性脂肪酶（hormone-sensitive triglayceride lipase，HSL）含量（p<0.05）；降低小鼠脂肪指數(shù)、HMG-CoA還原酶（Hydroxy methylglutaryl coenzyme A reductase inhibitor，HMGR）含量以及胰島素（insulin，INS）活性；且堿提除蛋白多糖組（JC組）的效果優(yōu)于堿提不除蛋白組（J組）。說明兩種黑木耳多糖可通過調(diào)節(jié)相關(guān)酶的活性，達(dá)到降血脂的效果，且JC組的效果更好。

黑木耳多糖；高血脂癥；降血脂

隨著現(xiàn)代生活水平的提高，人們的飲食結(jié)構(gòu)和生活習(xí)慣也在發(fā)生改變，高血脂癥的發(fā)生率不斷增加[1]。高血脂的臨床主要表現(xiàn)為患者體內(nèi)的血漿血脂含量明顯高于正常水平[2]，是一種對人體危害極大的心血管系統(tǒng)疾病。據(jù)統(tǒng)計(jì)，在我國15歲～69歲做過血脂檢查的人群中，高血脂癥者占40%[3]。因此，本病的防治日益受到醫(yī)學(xué)界的廣泛重視，研制有調(diào)節(jié)血脂作用的保健食品對人類健康有重要意義[4-5]。加速體內(nèi)脂類分解代謝，減少其合成及沉積，可有效降低體內(nèi)血脂水平。其中增加卵磷脂膽固醇?；D(zhuǎn)移酶（LCAT）、脂蛋白酯酶（Lipoprotein Esterase，LPL）以及高密度脂蛋白含量是一種有效的方法。

黑木耳多糖是一種重要的生物活性成分。許多研究顯示，黑木耳多糖具有降血壓、抗氧化、抗炎、降血糖、抗凝血、降血脂等生物活性[6-8]。本研究選用小鼠為實(shí)驗(yàn)對象，通過兩種黑木耳多糖灌胃干預(yù)，研究兩種黑木耳多糖對高脂膳食小鼠卵磷脂膽固醇?；D(zhuǎn)移酶、HMG-CoA還原酶、激素敏感性脂肪酶、胰島素以及糞便中膽酸鹽含量的影響，旨在研究兩種黑木耳多糖對高血脂癥的預(yù)防作用并對兩種黑木耳多糖的降血脂效果進(jìn)行比較。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物

昆明種雄性小鼠128只，由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供，許可證號：SCXK（黑）2013-004，體重（20±4）g。小鼠按清潔級動物飼養(yǎng)，自由進(jìn)食，飲用潔凈水，保持實(shí)驗(yàn)室環(huán)境衛(wèi)生，溫度18℃～20℃，相對濕度50%～60%，分籠喂養(yǎng)，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后開始實(shí)驗(yàn)。

1.2 藥品、儀器及試劑

黑木耳多糖（AP，堿提不除蛋白簡寫為J，多糖含量為704.59 mg/g；堿提除蛋白多糖簡寫為JC，多糖含量為758.13 mg/g）：東北林業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)科提供；生理鹽水、卵磷脂膽固醇?；D(zhuǎn)移酶（LCAT）、HMG-CoA還原酶（HMGR）、激素敏感性脂肪酶（HSL）、胰島素（INS）試劑盒、硫酸溶液（取水65 mL，加濃硫酸50 mL，搖勻，即得濃度為8 mol/L的硫酸溶液）：南京建成生物工程所；膽酸標(biāo)準(zhǔn)品：中國藥品生物制品檢定所。

YP20001N電子天平：上海精天電子儀器廠；TDL-5臺式離心機(jī)：上?？婆d儀器；RT6000酶標(biāo)儀：北京維欣儀奧科技；T6紫外可見分光光度計(jì)：北京普析通用。

1.3 測定指標(biāo)及方法

1.3.1 動物分組及給藥設(shè)計(jì)

雄性小鼠128只（22±2）g，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)分成8組，喂養(yǎng)飼料以及灌胃受試物的劑量如下：空白對照組（CN）：基礎(chǔ)飼料+生理鹽水；高脂對照組（HFD）：高脂飼料+生理鹽水；J低劑量組（J-1）：高脂飼料+受試物J溶液（25 mg/（kg·bw·d））；J中劑量組（J-2）：高脂飼料+受試物J溶液（50 mg/（kg·bw·d））；J高劑量組（J-3）：高脂飼料+受試物J溶液（100 mg/（kg·bw·d））；JC 低劑量組（JC-1）：高脂飼料+受試物 JC 溶液（25 mg/（kg·bw·d））；JC中劑量組（JC-2）：高脂飼料+受試物JC溶液（50 mg/（kg·bw·d））；JC高劑量組（JC-3）：高脂飼料+受試物JC溶液（100 mg/（kg·bw·d））。每日按0.1 mL/（10 g）·bw的劑量進(jìn)行灌胃，自由攝食和飲水，每周測定體重，確定灌胃量。

1.3.2 糞便中膽酸鹽含量測定

每10天測定一次小鼠糞便中膽酸鹽含量，方法為紫外分光光度計(jì)法[9]。

1.3.3 LCAT、HMGR、HSL、INS 以及脂肪指數(shù)測定

按實(shí)驗(yàn)要求喂養(yǎng)8周后，每組處死8只，最后一次灌胃的前一天晚上禁止小鼠進(jìn)食，16 h后眼眶取血，血樣于4℃，3 000 r/min，離心15 min，分離血清后測定瘦素（LEP）含量。取適量的肝組織，以重量：體積=1∶9（mg/mL）加預(yù)冷的生理鹽水，放入組織勻漿器中研磨均勻，離心后取上清液轉(zhuǎn)，現(xiàn)制現(xiàn)用。測定LCAT、HMGCoA還原酶、HSL、胰島素及脂肪指數(shù)等各項(xiàng)指標(biāo)值，測定方法按照試劑盒說明書測定。將剩下的小鼠接著按1.3.1方法喂養(yǎng)，喂至第12周，按1.3.3方法處理。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

用Excel軟件將數(shù)據(jù)處理后以±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，p＜0.05或p＜0.01表示具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 糞便中膽酸鹽的含量

糞便中膽酸鹽的含量見表1。

表1 糞便中膽酸鹽的含量Table 1 The content of cholate in faeces

至試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，顯示各組小鼠體毛色澤均無變化。表1顯示，縱向比較來看，JC組調(diào)節(jié)體內(nèi)膽固醇效果要優(yōu)于J組；橫向比較來看，隨著黑木耳多糖灌胃的時(shí)間越久，小鼠糞便中膽酸鹽含量排出越多，說明黑木耳多糖在調(diào)節(jié)體內(nèi)膽固醇代謝含量方面效果顯著。

2.2 黑木耳多糖對小鼠脂肪指數(shù)的影響

黑木耳多糖對小鼠脂肪指數(shù)的影響見表2。

表2 黑木耳多糖對小鼠脂肪指數(shù)的影響Table 2 Effect of AP on fat of the mice

表2顯示，體內(nèi)脂肪方面，縱向比較來看，第8周，灌胃組的平均值均低于HFD組，但差異不顯著；第12周，JC組和J-3組的脂肪指數(shù)顯著低于HFD組（p<0.05或p<0.01），且JC組在降低脂肪指數(shù)方面效果優(yōu)于J組；橫向比較來看，第12周脂肪指數(shù)低于第8周，說明持續(xù)灌胃黑木耳多糖能有效控制小鼠脂肪的增加。

2.3 黑木耳多糖對小鼠LCAT含量的影響

黑木耳多糖對小鼠LCAT含量的影響見表3。

表3 黑木耳多糖對小鼠LCAT含量的影響Table 3 Effect of AP on LCAT in liver of the mice

表3顯示，對LCAT含量的影響方面，縱向比較來看，第8周時(shí)，J和JC組的中、高劑量組均極顯著高于HFD組（p<0.01），第12周時(shí)，各灌胃組均極顯著高于HFD組（p<0.01），且JC組的效果要優(yōu)于J組。橫向比較來看，第12周LCAT含量比第8周有所升高，說明黑木耳多糖持續(xù)干預(yù)可顯著提高LCAT含量，從而達(dá)到降血脂效果。

2.4 黑木耳多糖對小鼠HMGR含量的影響

黑木耳多糖對小鼠HMGR含量的影響見表4。

表4 黑木耳多糖對小鼠HMGR含量的影響Table 4 Effect of AP on HMGR in liver of the mice

表4顯示，在HMGR方面，縱向比較來看，第8周時(shí)，除J-1組外，其余灌胃組的HMGR含量均顯著低于HFD組（p<0.01或p<0.05）；第12周時(shí)，各灌胃組HMGR含量均極顯著低于HFD組（p<0.01）。橫向比較來看，第8周時(shí)受試物已經(jīng)起到顯著的降低HMGR的含量，至第12周持續(xù)用受試物干預(yù)，HMGR含量繼續(xù)降低，說明黑木耳多糖在降低HMGR的含量方面效果顯著，JC組效果優(yōu)于J組。

2.5 黑木耳多糖對小鼠HSL含量的影響

黑木耳多糖對小鼠HSL含量的影響見表5。

表5 黑木耳多糖對小鼠HSL含量的影響Table 5 Effect of AP on HSLin liver of the mice

表5顯示，縱向比較來看，第8周和第12周時(shí)，各灌胃組HSL含量均極顯著高于HFD組（p<0.01），說明在第8周時(shí)黑木耳多糖已經(jīng)起到了升高HSL含量的作用。橫向來看，第8周時(shí)各試驗(yàn)組激素敏感性脂肪酶（HSL）含量增加最顯著，說明黑木耳多糖可以升高小鼠激素敏感性脂肪酶（HSL）含量；實(shí)驗(yàn)至第12周時(shí)，激素敏感性脂肪酶（HSL）含量有所下降，說明在第8周時(shí)黑木耳多糖在調(diào)節(jié)體內(nèi)HSL含量方面達(dá)到最優(yōu)效果且JC組效果要優(yōu)于J組。

2.6 黑木耳多糖對小鼠INS含量的影響

黑木耳多糖對小鼠INS含量的影響見表6。

表6 黑木耳多糖對小鼠INS含量的影響Table 6 Effect of AP on INS of the mice

表6顯示，對血清中胰島素（INS）含量的影響方面，縱向比較來看，第8周時(shí)，各組胰島素含量均在CN組和HFD組之間；第12周時(shí)，各灌胃組的INS含量均極顯著低于HFD組（p<0.01）且JC組效果優(yōu)于J組。橫向來看，第8周與第12周胰島素含量相差不大，說明黑木耳多糖在調(diào)節(jié)胰島素含量上8周時(shí)已達(dá)到較優(yōu)效果。

3 結(jié)論

體內(nèi)膽固醇降解的主要途徑是通過膽管系統(tǒng)將膽汁酸排出體外[10]，因此可以通過測定游離膽酸鹽的含量間接得出膽固醇減少的量，進(jìn)而表明降血脂的作用效果[11]。實(shí)驗(yàn)表明，兩種黑木耳多糖均能有效的增加小鼠糞便中膽酸鹽的含量、促進(jìn)體內(nèi)膽固醇的降解，達(dá)到降血脂效果，且JC組效果優(yōu)于J組。

LCAT是血漿脂蛋白中催化游離膽固醇酯化的關(guān)鍵酶，在高密度脂蛋白代謝和膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)中起著重要作用[12-13]。高脂膳食誘導(dǎo)小鼠時(shí)，LCAT含量顯著降低，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在用黑木耳多糖持續(xù)干預(yù)后，LCAT含量大大增加，這與蘇徳奇[14]和李孟婕[15]等研究結(jié)果一致。說明黑木耳多糖可增加LCAT的含量且JC組效果優(yōu)于J組。

HMGR是脂代謝中的關(guān)鍵限速酶，要想減少內(nèi)源性膽固醇，那么就應(yīng)該降低HMGR的活性[16]，阻斷膽固醇的生物合成，使血液中總膽固醇及低密度脂蛋白膽固醇含量下降[17]。在實(shí)驗(yàn)周期內(nèi)，灌胃組小鼠HMGR的含量持續(xù)降低，說明黑木耳多糖在降低HMGR的含量方面效果顯著，JC組效果優(yōu)于J組。

HSL是可以加快脂肪中的甘油三酯水解的速度，它可以水解很多脂質(zhì)，對于降低體脂含量具有重要影響[18]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，黑木耳多糖可顯著增加小鼠HSL含量，在第8周時(shí)達(dá)到最優(yōu)效果且JC組效果優(yōu)于J組。

胰島素是一種激素，它可以增強(qiáng)脂肪細(xì)胞對血液中脂肪酸的攝取和合成脂肪的能力，同時(shí)，又能抑制體內(nèi)脂肪的分解，促進(jìn)極低密度脂蛋白（Very lowdensity lipoproteins，VLDL）、低密度脂蛋白（Lowdensity lipoproteins，LDL）的合成[19]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，黑木耳多糖有效的降低了高脂膳食小鼠體內(nèi)胰島素含量，在第8周時(shí)達(dá)到最優(yōu)效果且JC組效果優(yōu)于J組。

綜上，黑木耳降脂多糖可增加LCAT的含量，促進(jìn)組織、細(xì)胞內(nèi)膽固醇的清除，維持細(xì)胞內(nèi)膽固醇的穩(wěn)態(tài)，同時(shí)抑制了HMG-CoA還原酶的合成，減少了膽固醇的內(nèi)源性合成，因而降低了血清膽固醇水平。黑木耳降脂多糖還可通過增強(qiáng)HSL酶活性加速脂肪分解，降低血液胰島素水平抑制脂肪的合成，從而降低甘油三酯水平，達(dá)到降血脂的效果，同時(shí)JC組的降血脂效果要優(yōu)于J組。

[1]劉永蘭,趙喜榮,李燕.高脂血癥的危害及其預(yù)防對策[J].2012,9(26):150-151

[2]王士兵,王永年,徐瓏嫣.降脂顆粒治療不同中醫(yī)證型高血脂癥的療效觀察[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志,2016,25(34):3308-3309

[3]崔蘭玲.淺談高血脂癥的危害及中醫(yī)預(yù)防[J].西部中醫(yī)院,2012,12(25):101-102

[4]彭靜靜.六堡茶的降血脂功能性研究[D].南寧:廣西大學(xué),2012

[5]鄭超楠,金在久,施溯筠.榆黃蘑飲料對小鼠實(shí)驗(yàn)性高脂血癥的降脂作用[J].食品工業(yè)科技,2012,33(5):369－371

[6]JIE Y,SUN R,ZHAO Z,et al.Auricularia polytricha,polysaccharides induce cell cycle arrest and apoptosis in human lung cancer A549 cells[J].International Journal of Biological Macromolecules,2014,68(7):67-71

[7]SHUANG Z,RONG C,YU L,et al.Extraction of a soluble polysaccharide from Auricularia polytricha,and evaluation of its anti-hypercholesterolemic effect in rats[J].Carbohydrate Polymers,2015,122:39-45

[8]YANG L,ZHAO T,WEI H,et al.Carboxymethylation of polysaccharides from Auricularia auricula,and their antioxidant activities in vitro[J].International Journal of Biological Macromolecules,2011,49(5):1124-1130

[9]辛勛,陸紅云.紫外分光光度法測定速效傷風(fēng)膠囊中膽酸含量[J].中國藥業(yè),2000,9(1):36-37

[10]Jiao Rui,Zhang Zesheng,Yu Hongjian,et al.Hypo-cholesterolemic activity of grape seed proantho-cyanidin is mediated by enhancement of bile acid excretion and up-regulation of CYP7A1[J].J Nutr Biochem,2011,21(11):1134-1139

[11]王辰龍,張子奇,王曼,等.黑木耳多糖的提取分離及體外抗凝血作用研究[J].食品工業(yè)科技,2013(9):238-241

[12]張麗嬌,董軍,陳文祥.卵磷脂膽固醇?；D(zhuǎn)移酶與動脈粥樣硬化性心血管病[J].中國動脈硬化雜志,2016,24(8):845-849

[13]Weidong Xie,Dongming Xing,Hong Sun,et al.The Effects of Ananas comosus L.Leaves on Diabetic-Dyslipidemic Rats Induced by Alloxan and a High-Fat/High-Cholesterol Diet[J].American Journal of Chinese Medicine,2012,33(1):95-105

[14]蘇德奇.復(fù)方降脂軟膠囊的研制及作用機(jī)制研究[D].烏魯木齊:新疆醫(yī)科大學(xué),2013

[15]李孟婕,范秀萍,吳紅棉,等.翡翠貽貝粗多糖降血脂作用的研究[J].食品科學(xué),2012(1):257-261

[16]王晶,王晴,孫吉葉,等.血脂康抑制HMG-CoA還原酶活性的定量測定研究[J].中國新藥雜志,2015.24(16):1825-1830

[17]Lee J,Hong E M,Koh D H,et al.Hmg-coa reductase inhibitors(statins)activate expression of pparalpha/ppargamma and abca1 in culturedgallbladder epithelial cells[J].Dig Dis Sci,2010,55(2):292-299

[18]YEAMAN S J.Hormone-sensitive lipase--new roles for an old enzyme[J].Biochem J,2004,379(Pt 1):11-22

[19]謝芳一.溫陽藥在干預(yù)早期2型糖尿病中的作用及其機(jī)理研究[D].廣州:廣州中醫(yī)藥大學(xué),2012

The Blood Lipids-lowering Effects of Auricularia Polysaccharide on the Hyperlipidemia Mice

LIU Rong1，ZHAO Ying1，LUAN Shu-ying1，WANG Zhen-yu2，*
（1.School of Forestry，Northeast Forestry University，Harbin 150040，Heilongjiang，China；2.School of Food Science and Engineering，Harbin Institute of Technology，Harbin 150090，Heilongjiang，China）

To explore the lipid-lowering effect of polysaccharides from Auricularia auricula in hyperlipidemia mice，two kinds of polysaccharides from Auricularia was extracted at different doses，intragastrically given to hyperlipidemic model mice to explore their effects on fat index and related enzymes.Text results showed that two kinds of AP both could increase the content of cholate in faeces，the content of lecithin cholesterol acyltrans ferase（LCAT）and the content of hormone sensitive lipase（HSL）in the mice，the effect was significant（p<0.05）.They could decreased the fat index，the content of HMGR and the activity of Insulin（INS）obviously，too.the effect was significant（p<0.05）.Group JC was better than group J.The result showed that two kinds of AP could significantly reduce blood lipid levels by agenting the activity of related enzymes，the effect of JC group was better.

Auricularia polysaccharide；hyperlipidemia；blood lipids reduction

10.3969/j.issn.1005-6521.2017.23.034

黑龍江省林業(yè)科學(xué)院2014年度科學(xué)試驗(yàn)研究實(shí)施計(jì)劃（GA13B202）

劉榮（1971—），女（漢），副研究員，博士，研究方向：功能食品。

*通信作者

2017-03-10