熊志遠(yuǎn) 倪東京 何維新★

血清GP73及DCP水平用于乙肝病毒相關(guān)肝細(xì)胞癌診斷的研究

熊志遠(yuǎn) 倪東京 何維新★

目的探討血清高爾基蛋白73（GP73）及脫-γ-羧基凝血酶原（DCP）水平用于慢性乙型肝炎病毒（HBV）相關(guān)肝細(xì)胞癌（HCC）診斷的臨床價(jià)值。方法納入2014年8月至2016年4月就診的HBV相關(guān)HCC患者126例，同時(shí)設(shè)置肝硬化患者（n=96）及慢性乙型肝炎（CHB）患者（n=68）作為對(duì)照?；颊呔驮\時(shí)記錄一般情況及常規(guī)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)，檢測(cè)血清GP73、DCP及AFP水平。ROC曲線檢測(cè)GP73、DCP及AFP單獨(dú)或聯(lián)合用于HCC診斷的價(jià)值。結(jié)果血清GP73水平由高至低依次為HCC組、肝硬化組及CHB組；DCP水平由高至低依次為HCC組、肝硬化組及CHB組。HCC組中，臨床分期分別與血清AFP、GP73及DCP水平呈正相關(guān)，AFP與GP73及DCP呈正相關(guān)。GP73單獨(dú)診斷的AUC為0.790，DCP的AUC為0.752，AFP聯(lián)合GP73及DCP的AUC為0.869。結(jié)論血清GP73及DCP水平在HBV相關(guān)HCC中顯著升高且與臨床分期正相關(guān)，GP73、DCP及AFP聯(lián)合診斷HCC的臨床價(jià)值較高。

肝細(xì)胞癌 肝硬化 慢性乙型肝炎 甲胎蛋白 高爾基體蛋白73 脫-γ-羧基凝血酶原

慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染引起的慢性乙型肝炎（CHB）在臨床上十分常見(jiàn)，未經(jīng)有效治療的患者可進(jìn)展為肝硬化及肝細(xì)胞癌（HCC），甚至導(dǎo)致病死[1]。本研究通過(guò)檢測(cè)HBV相關(guān)HCC患者外周血循環(huán)高爾基蛋白73（GP73）及脫-γ-羧基凝血酶原（DCP）水平，并與甲胎蛋白（AFP）進(jìn)行對(duì)比，探討這兩項(xiàng)指標(biāo)用于HCC診斷的臨床價(jià)值。

1 臨床資料

1.1 病例來(lái)源 納入2014年8月至2016年4月在本院感染科及腫瘤科就診的HBV相關(guān)HCC患者126例（HCC組），平均年齡（48.54±8.32）歲，性別比（男/女）為89/37；同時(shí)納入HBV相關(guān)肝硬化患者96例（肝硬化組）及CHB患者68例作為對(duì)照（CHB組）。CHB的診斷標(biāo)準(zhǔn)參考最新的《慢性乙型肝炎防治指南（2015年更新版）》：HBsAg和（或）HBV DNA陽(yáng)性＞6個(gè)月，且存在由HBV持續(xù)感染引起的慢性肝臟炎癥[2]。HBV相關(guān)肝硬化的診斷根據(jù)肝組織活檢、B超、CT、MRI、消化道內(nèi)鏡（存在食管胃底靜脈曲張）等檢查結(jié)果，結(jié)合臨床表現(xiàn)確定[3]。HCC根據(jù)肝組織活檢或影像學(xué)檢查確定。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）妊娠婦女及兒童。（2）無(wú)HBV感染的HCC患者。（3）合并HCV、HIV感染者。飲酒史定義：酒精攝入量（男性）≥40g/d，女性≥20g/d，一般持續(xù)＞5年。

1.2 患者一般情況及臨床指標(biāo)的檢測(cè) 患者就診時(shí)采集外周血2ml，分離外周血清，使用羅氏（型號(hào)：Cobas8000 C701）生化分析儀檢測(cè)谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、總膽紅素（TBIL）等生化指標(biāo)，試劑為儀器配套試劑。HBV DNA定量檢測(cè)使用TaqMan PCR方法檢測(cè)，儀器為ABI公司生產(chǎn)的ABI7500型PCR儀，試劑購(gòu)自科華生物科技有限公司，檢測(cè)下限為50 IU/ml。

1.3 血清AFP、GP73及DCP的檢測(cè) 血清AFP的檢測(cè)使用化學(xué)發(fā)光法，儀器為美國(guó)雅培公司生產(chǎn)的化學(xué)發(fā)光分析儀（型號(hào)：Architec I2000），試劑為儀器配套試劑。血清GP73及DCP的檢測(cè)均使用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）方法，GP73的試劑盒（Human GP73 ELISA Kit）購(gòu)自上海歌凡生物科技有限公司，DCP的試劑盒（Human DCP ELISA Kit）購(gòu)自上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司。GP73及DCP的檢測(cè)分別按試劑盒要求進(jìn)行操作，所有樣本設(shè)置2個(gè)復(fù)孔，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本濃度，結(jié)果取平均值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 18.0 統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以（±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以n或%表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。正態(tài)分布數(shù)據(jù)的相關(guān)性分析使用Pearson相關(guān)法，非正態(tài)分布數(shù)據(jù)使用Spearman相關(guān)法。ROC曲線檢測(cè)指標(biāo)的診斷效能，曲線下面積（AUC）≥0.700提示診斷價(jià)值較高。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 患者一般情況及臨床指標(biāo) 見(jiàn)表1。

表1 患者一般情況及臨床指標(biāo)（±s）

表1 患者一般情況及臨床指標(biāo)（±s）

注：a：HCC組中48例（38.1%）患者血清HBV DNA載量低于檢測(cè)下限；b：肝硬化組中33例（34.4%）患者血清HBV DNA載量低于檢測(cè)下限

HCC組（n=126）肝硬化組（n=96）CHB組（n=68）t或χ2P值年齡（歲）48.54±8.3245.46±9.4034.54±8.6047.911＜0.001性別（男/女）89/3770/2648/200.1660.920 BMI（kg/m2）24.54±4.6223.09±3.8524.87±4.865.3540.069吸煙[n（%）]57（45.2%）54（56.3%）41（60.3%）4.8610.088飲酒[n（%）]71（56.3%）60（62.5%）40（58.8%）0.8530.653 ALT（U/L）98.79±67.62115.79±74.97 206.05±86.9527.352＜0.001 AST（U/L）88.11±66.81106.90±77.66 196.78±87.1433.982＜0.001 TBIL（μmol/L）66.63±3.3886.04±55.9161.23±37.614.1910.123 HBV DNA（log10IU/ml）3.16±0.99a3.91±1.29b4.42±1.5028.853＜0.001 AFP（μg/L）510.24±461.56 135.47±96.15 38.51±34.53114.508＜0.001 GP73（μg/L）230.79±119.97 113.62±79.53 32.41±21.6097.168＜0.001 DCP（μg/L）13.59±5.498.70±4.524.95±3.0992.655＜0.001

2.2 血清AFP、GP73、DCP與臨床指標(biāo)的相關(guān)性分析 HCC組中，臨床分期分別與血清AFP（R=0.367，P＜0.001）、GP73（R=0.412，P＜0.001）及DCP（R=0.470，P＜0.001）水平呈顯著正相關(guān)，GP73與AFP（R=0.471，P＜0.001）、DCP（R=0.319，P＜0.001）呈顯著正相關(guān)，且DCP與AFP呈顯著正相關(guān)（R=0.285，P＜0.001）。肝硬化組及CHB組中，血清AFP、GP73、DCP與各項(xiàng)指標(biāo)均無(wú)顯著相關(guān)性。

2.3 AFP、GP73及DCP用于HBV相關(guān)HCC的診斷價(jià)值 AFP單獨(dú)用于區(qū)別診斷肝硬化及HCC的AUC為0.770（95%CI：0.707～0.834，P＜0.001），cut-off值取為235.4 μg/L時(shí)，診斷敏感度為0.659，特異度為0.875。GP73單獨(dú)診斷的AUC為0.790（95%CI：0.732～8484，P＜0.001），Cut-off值取為140.8μg/L，診斷敏感度為0.754，特異度為0.687。DCP單獨(dú)診斷的AUC為0.752（95%CI：0.688～0.815，P＜0.001），Cutoff值取為10.3 μg/L時(shí)，診斷敏感度為0.730，特異度為0.656。AFP聯(lián)合GP73區(qū)別診斷肝硬化及HCC的AUC為0.841（95%CI：0.790～0.893，P＜0.001），AFP聯(lián)合DCP的ACU為0.839（95%CI：0.784～0.893，P＜0.001），AFP聯(lián)合GP73及DCP的AUC為0.869（95%CI：0.819～0.918，P＜0.001）。

3 討論

存在慢性HBV感染的患者一旦出現(xiàn)肝硬化，除非進(jìn)行肝移植，5年內(nèi)進(jìn)展為HCC的概率可高達(dá)5%～20%[4]。而HCC患者出現(xiàn)顯著癥狀或確診時(shí)多已處于中晚期，缺少有效的治療措施，臨床預(yù)后較差。對(duì)HCC的早期準(zhǔn)確診斷可以及時(shí)指導(dǎo)臨床采取針對(duì)性治療措施，患者的預(yù)后也可以得到顯著改善。AFP是目前應(yīng)用最廣泛用于HCC診斷及預(yù)后的無(wú)創(chuàng)血清標(biāo)志物，但其準(zhǔn)確度仍受到多種因素影響，容易出現(xiàn)漏診。因此，尋找更為敏感及特異的無(wú)創(chuàng)血清學(xué)指標(biāo)具有重要的臨床意義。

本資料結(jié)果顯示，與肝硬化及CHB患者比較，HCC患者血清GP73及DCP水平存在顯著升高，且升高程度與高臨床分期相關(guān)。同時(shí)，GP73及DCP單獨(dú)或聯(lián)合AFP時(shí)可以較好的用于HCC的診斷。同時(shí)，本資料中還探討了GP73、DCP與AFP聯(lián)合用于診斷的效能，結(jié)果顯示如果三者聯(lián)合，較單項(xiàng)指標(biāo)的診斷準(zhǔn)確度更高。目前，對(duì)HCC的無(wú)創(chuàng)診斷研究熱點(diǎn)也逐漸從單一指標(biāo)向多種聯(lián)合指標(biāo)（數(shù)學(xué)模型）轉(zhuǎn)變，聯(lián)合多種指標(biāo)有助于互相彌補(bǔ)單一指標(biāo)的局限性，從而提高診斷準(zhǔn)確度[5]。然而，由于HCC生物學(xué)特性復(fù)雜，尚無(wú)指標(biāo)能夠完全準(zhǔn)確的替代肝組織活檢作為診斷金標(biāo)準(zhǔn)。

綜上所述，本資料結(jié)果顯示，血清GP73及DCP可用于HBV相關(guān)HCC的診斷，且GP73、DCP及AFP聯(lián)合能夠進(jìn)一步提高診斷效能。同時(shí)，本研究也存在一定的不足之處，如納入的總體樣本量較小，且由于臨床活檢標(biāo)本收集的限制，未同時(shí)對(duì)HCC組織中GP73及DCP的表達(dá)情況進(jìn)行觀察。在下步的深入研究中，還需要大樣本前瞻性的研究來(lái)進(jìn)一步驗(yàn)證GP73及DCP用于HCC患者早期篩查診斷及遠(yuǎn)期預(yù)后的臨床價(jià)值，從而為臨床診斷及預(yù)后提供更多可靠方便的指標(biāo)。

[1] Trepo C,Chan HL,Lok A．Hepatitis B virus infection．Lancet, 2014,384(9959):2053-2063．

[2] 中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì),中華醫(yī)學(xué)會(huì)感染病學(xué)分會(huì)．慢性乙型肝炎防治指南(2015年更新版)．臨床肝膽病雜志,2015,31(12):1941-1960．

[3] 科技部十二五重大專項(xiàng)聯(lián)合課題組專家．乙型肝炎病毒相關(guān)肝硬化的臨床診斷、評(píng)估和抗病毒治療的綜合管理．臨床肝膽病雜志,2014,30(2):99-108．

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ObjectiveTo investigate the clinical diagnostic value of serum Golgi protein-73 （GP73） and Des-γ-carboxy prothrombin（DCP） levels in patients with HBV-related HCC.MethodsA total of 126 patients with HBV-related HCC from August 2014 to April 2016 in our hospital were enrolled，and 96 cirrhosis （n=96） and chronic hepatitis B （CHB） （n=68） patients were enrolled as control. The general information and laboratory parameters were recorded，and the serum GP73，DCP and AFP levels were tested. The correlations between Persepsin and parameters were analyzed，and diagnostic efficiency of GP73 and DCP for HCC in patients infected with HBV was calculated by ROC curve.ResultsSerum GP73 levels were divided into HCC group, cirrhosis group and CHB group from high to low. The DCP levels were divided into HCC group, cirrhosis group and CHB group from high to low. In HCC group，the clinical stage was significantly positively correlated with AFP，GP73 and DCP.The AFP level was positively correlated with GP73 and DCP . AUC of GP73 used for the diagnosis of HCC was 0.790，the AUC of DCP was 0.752，and the AUC of GP73 combined with DCP was 0.869.ConclusionSerum GP73 and DCP levels are elevated in patient with HBV-related HCC，and they can be used to improve the diagnosis of HCC combined with AFP.

Hepatocellular carcinoma Cirrhosis Chronic hepatitis B α-fetoprotein Golgi protein-73 Des-γ-carboxy prothrombin

315040中國(guó)人民解放軍113醫(yī)院感染科

*通信作者