張立 許婷姝 趙軍 臧嘉

輕重度乳腺癌患者血清IL-6 IL-8 IL-10與TNF-α水平檢測與臨床意義

張立 許婷姝 趙軍 臧嘉

目的探討血清IL-6、IL-8、IL-10與TNF-α在乳腺癌發(fā)生、轉移及預后中的作用與臨床意義。方法空腹抽取靜脈血后，ELISA測定IL-6、IL-8、IL-10與TNF-α水平，并分析放療前后患者血清內上述因子變化。結果與對照組比較，輕度組和重度組患者血清IL-6、IL-8、IL-10及TNF-α水平均明顯升高。放療有效患者IL-6、IL-8、IL-10及TNF-α水平較基線水平明顯降低（P＜0.05）。無效或進展患者IL-8與TNF-α水平與基線水平比較明顯升高，而IL-6與IL-10與基線水平無差異。IL-6、IL-8、IL-10及TNF-α相關性分析表明，IL-6、IL-8、IL-10升高與TNF-α正相關（P＜0.05），而正常受試者患者體內四者具有明顯相關性。結論ELISA可有效測定乳腺癌患者血清IL-6、IL-8、IL-10及TNF-α水平。血清IL-6、IL-8、IL-10及TNF-α與乳腺癌放療療效密切相關。

乳腺癌 腫瘤轉移 放療 炎癥反應

乳腺癌是一種常見于女性的惡性腫瘤，每年我國新診斷女性乳腺癌患者21萬例，占全球新增病例的20%[1]，給社會與家庭帶來了重大影響。目前，已證實炎癥反應與腫瘤發(fā)生密切相關[2]。作為炎性細胞因子，IL-6、IL-8、IL-10及TNF-α不僅與炎癥相關，還與腫瘤發(fā)生密切相關。有研究對肺癌、肝癌患者的炎癥因子如IL-6、IL-8或IL-10進行了研究[3]，但少有研究對不同病變程度的乳腺癌患者IL-6、IL-8、IL-10及TNF-α進行研究。本文對乳腺癌患者放療前后的IL-6、IL-8、IL-10及TNF-α進行比較，以探討該類因子在腫瘤發(fā)生、轉移及預后中的作用。

1 臨床資料

1.1 一般資料 本研究納入768例于2010年12月至2014年1月入住本院接受治療的乳腺癌患者。乳腺癌診斷依據(jù)組織學、細胞學或影像學檢查。排除合并其他重癥疾病或并發(fā)癌癥的患者。乳腺癌患者按照TNM分期進行分組，其中I、II期患者設為輕度組，III、IV期患者設為重度組。同時，納入685例同期于本院接受體檢的患者，作為正常對照。

1.2 血液學檢查 所有受試者空腹清晨抽取靜脈血3ml，收集在非抗凝無菌試管內，3000r/min離心10min后留取血清，待下一步測定。

1.3 ELISA分析 根據(jù)既往文獻，對血清中IL-6、IL-8、IL-10及TNF-α含量采用ELISA分析[4]。所有測定均重復＞3次，計算平均值與標準偏差。標準品濃度為縱坐標，測定所得OD值為橫坐標，繪制標準曲線，據(jù)此計算每個樣本的濃度。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件。計量資料以（±s）表示，組間比較采用t檢驗。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 受試者一般特征比較 見表1。

表1 受試者一般特征比較（±s）

表1 受試者一般特征比較（±s）

項目輕度組（n=316）重度組（n=452）對照組（n=685）年齡（歲）45.65±8.7944.12±9.6843.55±3.56體重（kg）56.98±11.0457.76±12.1255.72±10.25臨床癥狀乳腺腫塊有有無乳頭、乳暈異常有有無淋巴結腫大有有無

2.2 受試者血清IL-6、IL-8、IL-10及TNF-α比較 見表2。

表2 受試者血清IL-6、IL-8、IL-10及TNF-α比較[pg/ml，（±s）]

表2 受試者血清IL-6、IL-8、IL-10及TNF-α比較[pg/ml，（±s）]

注：與對照組比較，*P＜0.05；與輕度組比較，#P＜0.05

組別nIL-6IL-8IL-10TNF-α對照組6857.58±1.259.98±0.974.92±0.845.62±1.23輕度組31668.12±7.59*44.62±11.25*50.35±12.46*50.67±15.47*重度組45287.19±8.91*#90.64±20.67*#78.63±15.83*#62.39±19.64*#臨床分期 I20065.34±12.4535.93±9.9745.63±8.1148.55±10.09 II11670.25±15.3950.26±17.2955.86±11.2752.37±11.77 III28985.23±18.3483.42±19.0776.29±19.3360.29±18.88 IV163129.37±26.97100.29±32.7490.47±20.4775.97±17.96

2.3 乳腺癌患者放療前后血清IL-6、IL-8、IL-10及TNF-α比較 見表3。

表3 乳腺癌患者放療前后血清IL-6、IL-8、IL-10及TNF-α比較（±s）

表3 乳腺癌患者放療前后血清IL-6、IL-8、IL-10及TNF-α比較（±s）

放療無效（n=263）IL-6（pg/ml）30.21±9.8867.52±8.8333.68±6.4188.51±10.98 IL-8（ng/ml）22.74±8.1256.24±10.3742.19±9.83110.54±17.32 IL-10（ng/ml）30.55±9.7950.05±9.9830.95±6.1177.25±10.94 TNF-α（ng/ml）29.36±6.4871.23±10.5529.87±5.3980.25±10.87項目輕度組（n=316）重度組（n=452）放療有效（n=107）放療無效（n=209）放療有效（n=189）

2.4 乳腺癌患者血清IL-6、IL-8、IL-10及TNF-α相關性 相關性分析表明，IL-6、IL-8、IL-10升高與TNF-α正相關（P＜0.05），相關系數(shù)分別為0.573、0.723、0.691。而正常受試者患者體內四者具有明顯相關性。

3 討論

研究證實，IL-6作為自分泌或旁分泌因子可調控小細胞肺癌細胞生長[5]。此外，其可誘導急性期反應及促進新生血管生成促進腫瘤細胞增殖。有研究稱，IL-6可促進卵巢癌細胞增殖，該過程依賴MAPK信號通路[6]。再者，IL-6可調控卵巢癌細胞的細胞凋亡相關蛋白（如Bcl-2）與細胞周期蛋白（如CyclinD1）表達，進而影響卵巢癌SKOV3細胞株生長。本研究證實，輕、重度乳腺癌患者IL-6表達升高，腫瘤分期越晚，腫瘤負荷越大，其表達則越高。存在轉移的乳腺癌患者血清IL-6表達高于未發(fā)生轉移的患者。而放療有效患者IL-6表達較基線水平降低，提示降低IL-6表達可能為一種有效控制乳腺癌發(fā)生及進展的有效途徑。

IL-8為一種可促進中性粒細胞趨化的一類炎癥因子，可提高腫瘤細胞的轉移性與侵襲能力。腫瘤細胞可通過自分泌IL-8提高腫瘤細胞的增殖能力。此外，腫瘤細胞自分泌的IL-8可激活腫瘤血管內皮細胞增殖，以促進血管生成。IL-8信號可通過活化NFκB增加前列腺腫瘤增殖能力。具體機制是，IL-8可調控Erk1/2-MAPK信號通路的下游磷酸化，引起E2F的活化進而激活相應蛋白轉錄因子，進而調控細胞增殖的基因轉錄。臨床上，術后血清IL-8可作為子宮癌患者預后的評價指標。本研究結果表明，與正常對照比較，乳腺癌患者血清IL-8水平明顯升高，而放療有效患者，血清IL-8水平降低，提示降低IL-8可能對提高乳腺癌療效有一定意義，再者，IL-8降低可能作為評價乳腺癌放療后療效的評價指標。

作為負調控因子，IL-10可抑制T淋巴細胞的增殖與分化，并抑制單核細胞和自然殺傷細胞（NK）的活性，從而下調抗腫瘤機制。研究稱，腫瘤細胞內IL-10高表達，并可下調抗腫瘤細胞因子的產(chǎn)生，降低巨噬細胞對腫瘤細胞的吞噬作用[7]。此外，IL-10可降低小細胞肺癌（SCLC）細胞的凋亡。與非表達IL-10的黑色素瘤細胞比較，表達IL-10的黑色素瘤細胞發(fā)生轉移的幾率升高。因此，IL-10的升高與腫瘤細胞增殖與轉移密切相關。本資料發(fā)現(xiàn)，重度乳腺癌患者IL-10水平明顯高于對照組與輕度組，且放療有效患者IL-10水平較基線水平降低。這從側面證實上述報道結果。

TNF-α是由活化的單核細胞或巨噬細胞產(chǎn)生的一類可引起腫瘤細胞壞死的細胞因子。其在機體應答腫瘤免疫應答中發(fā)揮重要作用。TNF-α可直接殺死腫瘤細胞，也可通過與腫瘤細胞表面受體互相作用，介導細胞吞噬。此外，還可誘導腫瘤組織微血管受損與抑制腫瘤組織血管生成促進腫瘤細胞壞死。在免疫反應方面，TNF-α可活化單核/巨噬細胞、淋巴細胞與中性粒細胞性能，并可誘導IL2與IL-6的表達。本研究中放療有效患者TNF-α水平較基線水平明顯降低，推測抑制TNF-α表達可促進腫瘤細胞凋亡或壞死。

綜上所述，IL-6、IL-8、IL-10及TNF-α與乳腺癌放療療效密切相關。ELISA可有效測定血清IL-6、IL-8、IL-10及TNF-α水平，具有一定的臨床應用價值。上述指標可以作為評價乳腺癌放療療效評價及預后的有效指標。

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ObjectiveTo investigate the roles of serum IL-6，IL-8，IL-10 and TNF-α in the metastasis and prognosis of breast cancer.MethodsIn this retrospective analysis，breast cancer patients admitted to our hospital from December 2010 to January 2014 were included，and 685 normal control were included. Fasting IL-6，IL-8，IL-10 and TNF-α were determined using ELISA to compare the changes before and after radiotherapy.ResultsCompared with the control group，remarkable increase was noticed in the serum IL-6，IL-8，IL-10 and TNF-α in breast cancer patients，especially those with severe conditions （P＜0.01）. The serum IL-6，IL-8，IL-10 and TNF-α were remarkably increased in the patients with severe breast cancer compared with those with mild conditions （P＜0.05）. For the patients with response after radiotherapy，the serum IL-6，IL-8，IL-10 and TNF-α were remarkably decreased compared with the baseline levels （P＜0.05）. Those with stable disease or progression showed elevation of serum IL-8 and TNF-α compared with the baseline levels （P＜0.05）. No difference was obtained in the serum IL-6 and IL-10 compared with the baseline levels （P＞0.05）. Regression analysis revealed the serum IL-6，IL-8 and IL-10 were positively with serum TNF-α（P＜0.05）.ConclusionsELISA assay is effective for the determination of serum IL-6，IL-8，IL-10 and TNF-α. Serum IL-6，IL-8，IL-10 and TNF-α are closely related to the efficiency of the outcome of treatment after radiotherapy.

Breast cancer Metastasis Radiotherapy Inflammation

214002 江蘇省無錫市婦幼保健院檢驗科