楊 電 ，陳俊璋，李 越

（1.廣州市刑事科學技術(shù)研究所，廣東 廣州 510030；2.廣州市公安局南沙區(qū)分局，廣東 廣州 510410）

擦拭直擴法和粘取磁珠法檢測衣物脫落細胞DNA的比較

楊 電1，陳俊璋2，李 越1

（1.廣州市刑事科學技術(shù)研究所，廣東 廣州 510030；2.廣州市公安局南沙區(qū)分局，廣東 廣州 510410）

法醫(yī)遺傳學；直接擴增法；磁珠法；接觸DNA；脫落細胞；衣物

法醫(yī)檢案中經(jīng)常遇到對衣物接觸DNA檢驗的要求，目前多為先用真空吸附或膠帶粘取的方法富集衣物上的脫落細胞，然后用Chelex-100法、磁珠法或硅珠法提取DNA進行STR分型檢測[1-5]。上述方法操作均較繁瑣，且容易污染。本研究用生物檢材采集與保存套管的尖頭棉簽擦拭穿過的衣物上的脫落細胞，然后剪取少量棉簽頭部，采用直接擴增法及用脫落細胞粘取器粘取后磁珠提取法獲得脫落細胞DNA，并使用PowerPlex?21試劑盒（美國Promega公司）進行STR檢測，對兩種方法所得STR分型結(jié)果進行比較，結(jié)果報道如下。

1 材料與方法

1.1 樣本

按照知情同意的原則，收集志愿者11月份穿過1d的上衣15件、褲子10條、棉線襪子10雙。上衣的衣領(lǐng)部位以標牌位置為分界，左邊一半用1滴提取液濕潤的生物檢材采集與保存套管（廣州浩源實驗器材科技有限公司）的棉簽尖頭反復擦拭，右邊一半用脫落細胞粘取器（公安部物證鑒定中心）反復粘取。褲子的褲腰部位以中縫為界，左半擦拭右半粘取。每雙襪子，其中一只用棉簽擦拭襪腿內(nèi)側(cè)，另一只用粘取器粘取相同部位。所有樣本于采集后室溫放置，1周內(nèi)進行檢驗。

每個志愿者均采集口腔拭子提取DNA，用Power-Plex?21試劑盒擴增，獲得明確的STR分型作為對照。

1.2 方法

1.2.1 DNA提取

直接擴增：于每根擦拭棉簽頭部剪取芝麻粒大小，放入0.2mL擴增管中。

磁珠提取：用鑷子將粘取后的脫落細胞粘取器上的膠帶取下，放入96深孔板中，在Microlab?STAR自動化液體處理工作站（瑞士Hamilton公司）中用磁性DNA半定量提取試劑盒（長春博坤生物科技有限公司）進行提取，洗脫體積選取40μL。

1.2.2 PCR擴增和STR分型

按文獻[6]在直接擴增樣品管和磁珠提取樣品管中加入PowerPlex?21擴增試劑后在同一臺9700型PCR儀（美國AB公司）上擴增。

擴增產(chǎn)物取1 μL按文獻[6]在3130xl基因分析儀（美國AB公司）上進行毛細管電泳檢測分型，用GeneMapper?ID v3.2軟件（美國Thermo Fisher Scientific公司）進行結(jié)果分析。

1.2.3 統(tǒng)計學分析

和志愿者口腔拭子檢出的基因型進行比對，以檢出全部完整均衡的基因分型且峰高＞100RFU視為檢出成功。采用SPSS 16.0軟件進行χ2檢驗，對擦拭后直接擴增的方法（簡稱“擦拭直擴法”）和粘取后磁珠提取的方法（簡稱“粘取磁珠法”）獲得的衣物接觸DNA的檢出情況進行比較，檢驗水準α＝0.05。

2 結(jié)果和討論

35例衣物分別采用擦拭直擴法和粘取磁珠法獲得的接觸DNA檢驗結(jié)果見表1。經(jīng)χ2檢驗，兩種方法對衣物接觸DNA的STR分型成功率差異無統(tǒng)計學意義。

兩種方法獲得的衣物接觸DNA的STR圖譜在峰型、峰高和均衡性方面無明顯差別，圖1為同一件上衣采用擦拭直擴法與粘取磁珠法獲得的STR圖譜。2雙襪子采用兩種方法檢驗峰值均較低，有2～3個基因座出現(xiàn)了等位基因缺失。1條褲子用粘取磁珠法檢驗有2個基因座出現(xiàn)等位基因缺失，用擦拭直擴法雖檢出全部基因型，但峰值較低。

表1 兩種方法對衣物脫落細胞STR分型的檢出情況

圖1 同一件上衣采用兩種方法獲得的STR分型

衣服、褲子和襪子均屬于滲透性載體，以往認為其中黏附的脫落細胞較難擦拭下來，故多用真空吸附的方法采集，然后用Chelex-100法、磁珠法或硅珠法提取DNA后進行STR檢測分型[1-2]。筆者在實際工作中發(fā)現(xiàn)，真空吸附的方法富集的細胞雖然較多，但因吸附面積大容易造成污染，給基因型的判讀帶來困擾。膠帶粘取法通過膠帶粘取富集細胞，然后將膠帶取下進行DNA提取，污染的可能性較真空吸附法減少，所以現(xiàn)在多用膠帶粘取的方法。但是膠帶的黏性大，難以進行直接擴增，需采用磁珠法或硅珠法提取DNA后再行擴增檢測[3-5]。生物檢材采集與保存套管的棉簽為尖頭，以此擦拭衣物上可能黏附脫落細胞的部位，細胞集中在棉簽尖頭上，因棉簽懸空放置在試管中沒有損失，剪取部分進行直接擴增，對衣物接觸DNA的檢出率雖然和粘取磁珠法相當，但可以達到簡化實驗步驟、縮短檢驗時間、降低檢驗成本的目的[7]，同時還節(jié)約檢材、方便復檢。因此，對衣物脫落細胞DNA的檢驗，尤其是重大緊急案件中的衣物脫落細胞DNA檢驗，擦拭直擴法無疑為首選方法。

本研究中的襪子只采集了襪腿部位的脫落細胞，無論擦拭直擴法還是粘取磁珠法，獲得的STR分型峰高均較低，并有2雙襪子出現(xiàn)等位基因缺失的現(xiàn)象，這說明襪腿上的脫落細胞較少，要保證獲得完整的STR分型，可增加采集面積，如增加襪底部位的采集等。筆者也對實際案件中遇到的2例襪子同時擦拭襪腿和襪底部位然后直接擴增，均成功獲得完整STR分型。李長征等[8]直接剪取10件上衣和10只手套可能含有脫落細胞的部位，采用AmpF?STRTMIdentifilerTM直擴試劑盒（美國Thermo Fisher Scientific公司）直接擴增，發(fā)現(xiàn)有7件上衣、9只手套可獲得全部基因型。與其相比，本研究采用擦拭的方法將脫落細胞集中到棉簽的尖頭部位，再剪取部分檢材直接擴增，檢測成功率有所增加。分析原因為擦拭直擴法可以在保證擴增體系中細胞數(shù)量足夠的同時，減少載體對直接擴增體系的影響，從而提高直接擴增的成功率。

[1]楊電，劉超，徐曲毅，等.Chelex-100法提取脫落細胞檢材 DNA 的實時定量研究[J].刑事技術(shù)，2009（5）：30-31，34.

[2]王華榮，廖勤，吳世青.三種磁珠法提取脫落細胞DNA的比較[J].法醫(yī)學雜志，2016，32（6）：459-460.

[3]VERDON T J， MITCHELL R J， VAN OORSCHOT R A.Evaluation of tapelifting as a collection method for touch DNA[J].Forensic Sci Int Genet，2014，8（1）：179-186.

[4]趙春鶴，郭業(yè)明，江煜靈，等.利用自研新型脫落細胞粘取器提取接觸類檢材 DNA[J].刑事技術(shù)，2014（4）：51-53.

[5]安宇然.應(yīng)用透明膠布黏附法提取人體脫落細胞1例[J].法醫(yī)學雜志，2014，30（5）：407.

[6]高波，唐振亞，楊電.PowerPlex21直擴法與磁珠法用于毛發(fā) STR 檢驗的比較[J].中國公共安全（學術(shù)版），2015（2）：111-113.

[7]楊電，劉超，李越，等.生物檢材采集與保存套管的應(yīng)用[J].中國法醫(yī)學雜志，2014，29（4）：352-354.

[8]李長征，劉海東.直擴試劑盒檢驗接觸DNA檢材初探[J].中國法醫(yī)學雜志，2013，28（3）：247.

2016-03-09）

（本文編輯：張素華）

DF795.2

B

10.3969/j.issn.1004-5619.2017.05.020

1004-5619（2017）05-0538-02

楊電（1969—），女，碩士，主任法醫(yī)師，主要從事法醫(yī) DNA檢驗與研究；E-mail：yangdianyy@163.com

李越，男，碩士，主任法醫(yī)師，主要從事法醫(yī)DNA檢驗與研究；E-mail：13570128202@163.com