季炳均，陳馨揚(yáng)

（南平市公安局刑偵支隊(duì)，福建 南平 353000）

泥土污染膠帶上脫落細(xì)胞DNA檢驗(yàn)1例

季炳均，陳馨揚(yáng)

（南平市公安局刑偵支隊(duì)，福建 南平 353000）

法醫(yī)物證學(xué)；DNA污染；膠帶；脫落細(xì)胞

1 案 例

1.1 簡要案情

某年2月春節(jié)期間，某縣夜間連續(xù)發(fā)生多起搶劫停在偏僻路段轎車內(nèi)青年男女的案件。嫌疑人蒙面持刀、戴手套將車內(nèi)人員挾持到山上，用膠帶捆綁在山上逼問受害人的銀行卡密碼?，F(xiàn)場勘驗(yàn)中僅提取到一段被雨水淋濕且附著大量黃泥土的膠帶（圖1），為偵破案件，對膠帶進(jìn)行DNA提取、分型。

圖1 現(xiàn)場勘驗(yàn)中提取的膠帶

1.2 檢材處理

膠帶長28cm、寬3.5cm，室內(nèi)晾干后用軟毛刷彈去膠帶表面的泥土，分離找到端部的單層膠帶，尋找留有手印紋線的端部并剪取兩塊面積各為1.0 cm×1.0cm的膠帶，分別標(biāo)記為檢材1、檢材2。

1.3 DNA檢驗(yàn)

DNA提取：參照GA/T 383—2014《法庭科學(xué)DNA實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)規(guī)范》，用5%Chelex-100提取膠帶檢材1的模板DNA，并用Microcon-100濃縮過柱。用MagAttract DNA Mini M48試劑盒（德國QIAGEN公司）提取膠帶檢材2的模板DNA。取1.0cm×1.0cm檢材剪碎放入1.5mL離心管中，加入190μL裂解液（G2 buffer）、10μL QIAGEN 蛋白酶 K，旋渦振蕩 10s。56℃孵育1 h，孵育過程中，取出振蕩多次。以離心半徑10cm，1 000 r/min，離心 5 min，轉(zhuǎn)移 200 μL 上清液到1.5mL離心管中。在離心管中加入3倍體積的吸附液（MTL緩沖液），搖勻磁珠，加入30μL磁珠，充分混勻溶液，吸附15min（約每2min搖勻一次）。混勻后將離心管放在磁力架上，使磁力架和樣品顛倒2～3次，吸出溶液，加入 500 μL的漂洗液（MW1緩沖液），搖勻樣品溶液，在磁力架上吸出溶液。加入500μL 80%的乙醇溶液，搖勻樣品溶液，放在磁力架上，使磁力架和樣品顛倒2～3次，吸出溶液；重復(fù)上一步驟兩次，使洗滌次數(shù)達(dá)到3次，最后一遍洗滌后去除所有的洗滌液。將離心管置于磁力架上，打開管蓋，放入65℃金屬浴中烘干（5min）。加入30μL去離子水65℃加熱10min，期間振蕩2～3次。從金屬浴上取下離心管，高速漩渦振蕩2s。迅速將其置于磁力架上；在磁力架上吸出溶液即得到所需的DNA。

擴(kuò)增及檢測：用 AmpF?STR?Identifiler?Plus試劑盒（美國AB公司）在9700型PCR儀（美國AB公司）上進(jìn)行擴(kuò)增，采用10 μL體系擴(kuò)增，模板DNA為1.0 μL，擴(kuò)增產(chǎn)物在3130xl型基因分析儀（美國 AB公司）上進(jìn)行電泳分析。

1.4 檢驗(yàn)結(jié)果

采用Chelex-100法在膠帶檢材1中未檢出DNA分型。采用MagAttract DNA Mini M48試劑盒成功提取到膠帶檢材2中DNA分型，將該分型結(jié)果導(dǎo)入本地DNA數(shù)據(jù)庫并上報(bào)到國家?guī)爝M(jìn)行查詢比對，比中上海市公安局DNA數(shù)據(jù)庫中前科人員饒某，16個(gè)基因座無容差（圖2）。

圖2 膠帶檢材2上的DNA分型圖譜

2 討 論

本案中，檢材為一段遺留在現(xiàn)場已較長時(shí)間的包裝用透明膠帶，被雨水淋濕且有泥土污染，檢材條件較差，檢驗(yàn)有一定的難度，能在膠帶上成功檢出嫌疑人脫落細(xì)胞DNA分型主要有以下原因。

（1）成功找到嫌疑人手撕膠帶的端部?，F(xiàn)場提取的捆綁受害人膠帶一般只有一端是嫌疑人用手撕開的，另一端一般是用工具剪斷。捆綁受害人的時(shí)候，為了便于找到膠帶的起點(diǎn)進(jìn)而撕開膠帶，膠帶使用者一般會(huì)脫掉手套。由于膠帶有較大的黏性，徒手撕開膠帶時(shí)極易在端部留下使用者的手部脫落細(xì)胞，因此，用手撕開的一端是我們檢驗(yàn)的重點(diǎn)。本案中，由于受害人被膠帶多層纏繞，能否找到使用人用手撕開膠帶的起點(diǎn)關(guān)系到檢驗(yàn)是否成功。膠帶被泥土嚴(yán)重污染，筆者仔細(xì)分離膠帶找到端部的單層膠帶，最終在一處單層膠帶的端部發(fā)現(xiàn)有少量手印紋線，以此確定該位置就是手撕膠帶的起點(diǎn)，這是本案能成功檢出嫌疑人DNA分型的前提。

（2）選擇正確的提取方法。泥土內(nèi)含有微生物DNA雜質(zhì)片段、離子、灰塵、微粒、色素等，這些雜質(zhì)會(huì)對DNA擴(kuò)增產(chǎn)生抑制作用，增加檢驗(yàn)的難度。檢驗(yàn)這類污染程度比較嚴(yán)重的檢材時(shí)，要去除各種可能影響擴(kuò)增的因素，技術(shù)人員可以根據(jù)各種可能的污染物特點(diǎn)和性質(zhì)，以不同的方法去除擴(kuò)增抑制物。公安部物證鑒定中心的《M48手工提取方法》（文件控制編號IFSC-02-02-05-2010）指出，M48純化試劑盒能有效對含有大量擴(kuò)增抑制物的檢材中DNA模板進(jìn)行純化，在“高濃度焦性鹽”存在的條件下，核酸特異性地吸附到二氧化硅上，經(jīng)80%乙醇溶液充分洗滌，去除雜質(zhì)后，在低鹽條件下洗脫獲得較為純凈的DNA模板[1]。筆者通過日常檢案經(jīng)驗(yàn)也進(jìn)一步證實(shí)用MagAttract DNA Mini M48試劑盒提取被泥土污染的檢材（如膠帶上脫落細(xì)胞）可以有效去除擴(kuò)增抑制物，純化后的擴(kuò)增產(chǎn)物電泳后可以得到比較滿意的DNA分型結(jié)果。本案先將膠帶放在室內(nèi)晾干，用軟毛刷盡量彈去膠帶表面附著的泥土，再通過MagAttract DNA Mini M48試劑盒提取膠帶檢材上的DNA，這是成功檢出嫌疑人完整DNA分型的關(guān)鍵。

綜上所述，膠帶上遺留的人體脫落細(xì)胞多為角質(zhì)上皮細(xì)胞，細(xì)胞核多已退化，DNA分型難度較大。在進(jìn)行膠帶上人體脫落細(xì)胞的DNA提取時(shí)，采用Chelex-100法提取DNA，并用Microcon-100濃縮過柱，省時(shí)又方便，操作簡單，條件較好的檢材一般可以得到理想的DNA分型圖譜[2]。如果由于檢材污染嚴(yán)重未能獲得有效DNA分型時(shí)，可繼續(xù)采用MagAttract DNA Mini M48試劑盒進(jìn)行DNA提取或?qū)NA模板進(jìn)行純化，以獲得較純凈的DNA模板，進(jìn)而得到更為理想的DNA分型。

[1]王華榮，廖勤，吳世青.三種磁珠法提取脫落細(xì)胞DNA的比較[J].法醫(yī)學(xué)雜志，2016，32（6）：459-460.

[2]郭燕霞，陳松，劉開會(huì)，等.人體脫落上皮細(xì)胞DNA檢驗(yàn) 2 例[J].刑事技術(shù)，2007（1）：51-52.

2016-08-18）

（本文編輯：邊英男）

DF795.2

B

10.3969/j.issn.1004-5619.2017.05.033

1004-5619（2017）05-0568-02

季炳均（1979—），男，副主任法醫(yī)師，主要從事法醫(yī)學(xué)檢案工作；E-mail：1954185928@qq.com