黎才麗，黃 勇，許政衡

老年冠心病急性發(fā)作期病人血清同型半胱氨酸與LPL基因多態(tài)性相關(guān)分析

黎才麗，黃 勇，許政衡

目的探討老年冠心病急性發(fā)作期病人血清同型半胱氨酸(Hcy)與脂蛋白脂肪酶(LPL)基因多態(tài)性的關(guān)系。方法選取2015年1月—2016年3月在我院治療的冠心病病人84例(觀察組)，同時(shí)選取健康者53名作為對照組，檢測兩組LPL基因位點(diǎn)rs11570892多態(tài)性以及血清Hcy 、總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)水平。結(jié)果觀察組Hcy和TG分別為(20.10±6.43)μmol/L和(1.81±0.93)mmol/L，明顯高于對照組，而HDL-C為(0.81±0.21)mmol/L，明顯低于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Plt;0.05)；觀察組和對照組LPL rs11570892位點(diǎn)基因型及等位基因分布比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Pgt;0.05)；觀察組GG型病人TG為(2.13±0.41)mmol/L，明顯高于AA和GA型病人，而HDL-C為(0.71±0.18)mmol/L，明顯高于AA和GA型病人，差異比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Plt;0.05)；不同基因型血清Hcy、TC和LDL-C比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Pgt;0.05)。結(jié)論LPL基因多態(tài)性與老年冠心病急性發(fā)作期血清Hcy無關(guān)，其可能與病人血脂水平有關(guān)。

冠心病；血清同型半胱氨酸；脂蛋白脂肪酶基因多態(tài)性；老年；血脂

高脂血癥、吸煙及高血壓等均可以促進(jìn)冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病(CHD)的發(fā)生，我國現(xiàn)階段的CHD發(fā)病率可達(dá)0.6%以上，且近三年來呈現(xiàn)上升趨勢[1]。脂蛋白代謝紊亂可以導(dǎo)致冠狀動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，促進(jìn)泡沫細(xì)胞、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、總膽固醇(TC)等對于冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮的侵蝕。而在這一過程中，血清同型半胱氨酸(Hcy)可以促進(jìn)氧化應(yīng)激損傷，加劇冠狀動(dòng)脈粥樣斑塊的形成[2-3]。隨著研究的深入，部分研究者發(fā)現(xiàn)脂蛋白脂肪酶(LPL)可以調(diào)節(jié)Hcy的活性，影響到的Hcy羧基末端的生物學(xué)功能，進(jìn)而參與到CHD的發(fā)生發(fā)展過程中[4- 5]，但迄今缺乏相關(guān)的研究。本研究探討LPL基因多態(tài)性與CHD病人血清Hcy的關(guān)系，進(jìn)一步分析不同基因型LPL與血脂的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2015年1月—2016年3月在我院治療的冠心病病人84例(觀察組)，納入標(biāo)準(zhǔn)：①診斷符合國際心臟病學(xué)會(huì)和協(xié)會(huì)/WHO臨床命名標(biāo)準(zhǔn)化專題組聯(lián)合制定的缺血性心肌病的命名及診斷[6]，或至少一支冠狀動(dòng)脈直徑狹窄≥50%；②急性發(fā)作期，年齡≥60歲；③病人及家屬知情同意并簽署同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并有先天性心臟病、心肌病等心臟疾??；②合并肝腎功能異常、惡性腫瘤等疾病者。同時(shí)選取在我院體檢的健康者53名作為對照組，兩組一般資料差異比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。詳見表1。

表1 兩組病人一般資料比較

1.2 生化指標(biāo)測定 清晨采集空腹靜脈血，分離血清后，-20℃保存待測，采集標(biāo)本后1周內(nèi)檢測三酰甘油(TG)、TC、HDL-C、LDL-C、Hcy，相關(guān)指標(biāo)測定采用電化學(xué)發(fā)光全自動(dòng)免疫分析儀(美國雅培i2000)，檢測試劑盒購自福建新大陸生物技術(shù)有限公司。

1.3 基因多態(tài)性檢測 LPL rs11570892基因多態(tài)性檢測：取凍存的血清保存液體，按照10 000 r/min的離心速度進(jìn)行離心分離，每1 mL的TRIZOL試劑裂解樣品中加入0.2 mL氯仿，進(jìn)行裂解操作，4 ℃采用無酶的RNA沖洗液進(jìn)行洗滌，再次10 000 r/min離心5 min，得到RNA?；旌弦涸诩尤肽孓D(zhuǎn)錄酶MMLV 之前先70 ℃干浴3 min，取出后立即冰水浴至管內(nèi)外溫度一致，然后加逆轉(zhuǎn)錄酶0.5 μL，37℃水浴60 min，室溫放置5 min使其完全溶解，逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。以β-actin為模版，在反應(yīng)體系中加入SYBR Green 1 染料、上游引物、下游引物、dNTP，總體積達(dá)20 μL，上機(jī)，反應(yīng)條件為：93℃2 min，93℃ 1 min，55℃ 2 min，共40個(gè)循環(huán)。

PCR產(chǎn)物擴(kuò)增后進(jìn)行基因多態(tài)性檢測：參考multiplexkit試劑盒(南京凱基生物科技有限公司)使用說明，加入各位點(diǎn)對應(yīng)延伸引物進(jìn)行單堿基測序反應(yīng)。并在ABI1310( Life Technologies，美國)進(jìn)行電泳，結(jié)果用GENEMAPPER軟件( Life Technologies，美國)進(jìn)行分析。 rs11570892上游引物：5’-3’ GGATTGTGGCCTTCTTTGAG，下游引物：5’-3’ CCAAACTGAGCAGAGTCTTC。

2 結(jié) 果

2.1 兩組血清Hcy及血脂比較 觀察組Hcy和TG明顯高于對照組，而HDL-C明顯低于對照組，差異比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Plt;0.05)。詳見表2。

表2 兩組血清Hcy及血脂比較(±s)

2.2 兩組Hardy-winberg遺傳平衡定律檢驗(yàn) Hardy-winberg遺傳平衡定律檢驗(yàn)，LPL rs11570892位點(diǎn)基因型在觀察組和對照組中分布符合Hardy-winberg平衡(Pgt;0.05)。兩組研究對象具有群體代表性。詳見表3。

2.3 兩組基因型及等位基因頻率比較 觀察組和對照組LPL rs11570892位點(diǎn)基因型及等位基因分布比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Pgt;0.05)。詳見表4。

表3 Hardy-winberg遺傳平衡定律檢驗(yàn)

表4 兩組基因型及等位基因頻率比較 例(%)

2.4 觀察組LPL rs11570892位點(diǎn)不同基因型與Hcy及血脂的關(guān)系 GG型病人TG為(2.13±0.41)mmol/L，明顯高于AA和GA型病人，而HDL-C為(0.71±0.18)mmol/L，明顯高于AA和GA型病人，差異比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Plt;0.05)；不同基因型血清Hcy、TC和LDL-C比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Pgt;0.05)。詳見表5。

表5 觀察組LPL rs11570892位點(diǎn)不同基因型與Hcy及血脂的關(guān)系(±s)

3 討 論

冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞在脂蛋白代謝紊亂的基礎(chǔ)上，可由于局部的氧化應(yīng)激障礙、自由基損傷等，導(dǎo)致內(nèi)皮功能細(xì)胞的壞死和凋亡，單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等在此過程中通過加劇對于內(nèi)皮下平滑肌層的侵蝕，促進(jìn)粥樣斑塊的形成。CHD的發(fā)生嚴(yán)重影響到了生命健康，導(dǎo)致病死率、病殘率的上升[7- 8]。對于CHD發(fā)病過程中的相關(guān)生物學(xué)機(jī)制的研究，可以為后續(xù)臨床上CHD病人的臨床轉(zhuǎn)歸及輔助治療提供理論參考。Hcy是缺氧條件下通過脫硫氫酶作用分解的含有硫化氫的化合物，其羧基末端含有多個(gè)重復(fù)結(jié)構(gòu)的糖蛋白結(jié)合區(qū)域，可以通過結(jié)合半胱氨酸酶、巰基化合物酶等，加劇下游細(xì)胞炎癥因子如IL-6、IL-8及腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor α，TNF-α)的釋放，促進(jìn)泡沫細(xì)胞在內(nèi)皮下層的沉積[9- 10]。研究顯示在CHD病人中存在著明顯的Hcy異常表達(dá)，Hcy表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化可以作為預(yù)測CHD病人不良心血管結(jié)局事件的重要依據(jù)[11- 12]。

Hcy存在著多種調(diào)節(jié)因子，部分學(xué)者認(rèn)為LPL可以通過誘導(dǎo)甘油三酯酶的活性，協(xié)同調(diào)節(jié)Hcy的代謝，進(jìn)而參與到CHD的發(fā)生發(fā)展過程。LPL是細(xì)胞溶酶體中的一種水解酶，通過在血管內(nèi)皮表面發(fā)生作用，參與體內(nèi)的脂肪、膽固醇等的代謝[13]?；蚨鄳B(tài)性在惡性腫瘤、心血管疾病等的發(fā)生中發(fā)揮了重要的作用，特點(diǎn)位點(diǎn)基因的變換可以影響到轉(zhuǎn)錄基因的轉(zhuǎn)錄活性，調(diào)節(jié)蛋白的表達(dá)，發(fā)揮其生物學(xué)效應(yīng)。已有的研究探討了LPL多態(tài)性與脂質(zhì)代謝的關(guān)系，但與CHD的探討不足，本研究的創(chuàng)新性在于探討不同分型的LPL與脂質(zhì)代謝的聯(lián)系。

血清三酰甘油可以促進(jìn)脂質(zhì)沉積和單核細(xì)胞等浸潤，促進(jìn)CHD病情進(jìn)展。本研究中觀察組的TG明顯高于對照組，而脂蛋白保護(hù)性因素HDL-C明顯下降，表明脂蛋白代謝的紊亂在CHD的冠狀動(dòng)脈病變中發(fā)揮了重要作用。Zvyagina 等[14- 15]回顧性分析了46例冠心病病人的血清脂蛋白資料，發(fā)現(xiàn)血清TG可平均上升25%，而HDL-C也可下降至0.70 mmol/L，這與本研究的結(jié)論較為一致。Hardy-winberg遺傳平衡定律基因型頻率的檢測，可以評估所選樣本是否符合遺傳平衡定律，LPL rs11570892位點(diǎn)各組基因型的實(shí)際頻數(shù)和理論頻數(shù)無明顯差異，符合Hardy-winberg遺傳，表明本研究所選擇的樣本具有群體代表性。但本研究并未發(fā)現(xiàn)LPL rs11570892位點(diǎn)基因型AA、GA、GG間的差異，同時(shí)等位基因頻率同樣無明顯差異，表明LPL rs11570892基因多態(tài)性并未參與到冠心病的發(fā)生發(fā)展過程。LPL rs11570892基因型或者基因的多態(tài)性并不影響到LPL蛋白的轉(zhuǎn)錄或者翻譯，不會(huì)影響到血清Hcy或者冠狀動(dòng)脈病變的進(jìn)展。但對于具體的基因型的分析可見，GG型病人的血清TG及HDL-C均明顯高于AA型及GA型，表明LPL rs11570892基因的多態(tài)性可以影響到脂質(zhì)的代謝，TG及HDL-C的同時(shí)上升表明體內(nèi)的脂質(zhì)代謝紊亂較為嚴(yán)重，LPL rs11570892的多態(tài)性可能影響到了甘油三酯酶、膽固醇脂酶的活性，抑制了肝臟對于TG的逆向轉(zhuǎn)運(yùn)，導(dǎo)致脂質(zhì)代謝異常。但本研究并未發(fā)現(xiàn)LPL rs11570892與LDL-C、Hcy的關(guān)系，雖然Hcy在CHD組中存在一定程度的異常表達(dá)，但Hcy與多態(tài)性無明顯關(guān)系，提示LPL rs11570892并不參與到Hcy的代謝調(diào)節(jié)過程中。

綜上所述，CHD病人體內(nèi)存在著明顯的脂質(zhì)代謝紊亂，Hcy表達(dá)明顯上升，雖然LPL rs11570892基因多態(tài)性本身并不影響Hcy的表達(dá)，但可以參與到TG、HDL-C等的代謝調(diào)節(jié)過程，影響血脂水平。后續(xù)研究可以增加LPL多個(gè)位點(diǎn)的多態(tài)性研究分析。

[1] 曲穎，何瑞，張純利，等.左卡尼汀聯(lián)合辛伐他汀治療老年冠心病合并2型糖尿病療效觀察[J].現(xiàn)代儀器與醫(yī)療，2014，22(6)：24-26.

[2] 鄧遠(yuǎn)瓊，張志娟，李宏翔，等.血管內(nèi)皮功能及同型半胱氨酸對冠心病的預(yù)測價(jià)值研究[J].中國全科醫(yī)學(xué)，2013，42(37)：3672-3675.

[3] 康健，趙興山，丁幼楠.同型半胱氨酸對老年女性冠心病患者的影響[J].重慶醫(yī)學(xué)，2014，26(35)：4820-4822.

[4] 李漢穎.血清同型半胱氨酸與LPL基因多態(tài)性在冠心病風(fēng)險(xiǎn)中的相關(guān)分析[J].醫(yī)學(xué)理論與實(shí)踐，2015，22(12)：1588-1589.

[5] 李研研，王洪云，馬龍樂，等.LPL基因突變與高甘油三酯血癥相關(guān)性研究進(jìn)展[J].中華臨床醫(yī)師雜志(電子版)，2014，25(2)：331-336.

[6] Kolovou GD， Kolovou V，Panagiotakos DB，et al.Study of common variants of the apolipoprotein E and lipoprotein lipase genes in patients with coronary heart disease and variable body mass index[J].Hormones (Athens)，2015，14(3)：376-382.

[7] 李楊，沈潔，申亞麗，等.高同型半胱氨酸血癥在冠心病患者中的意義[J].中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，26(10)：885-888.

[8] 于哲新，李虹偉，顧復(fù)生，等.北京市大興區(qū)西紅門社區(qū)居民冠心病危險(xiǎn)因素變化分析[J].中國全科醫(yī)學(xué)，2015，42(28)：3452-3455.

[9] 張雙元，張艷菊，李志斐.冠心病患者血清Hcy、GGT 水平變化及其意義[J].山東醫(yī)藥，2015，42(26)：64-65.

[10] 章火祥，沈月爽，陳建明，等.外周血同型半胱氨酸和游離脂肪酸水平與冠心病的關(guān)系[J].中國動(dòng)脈硬化雜志，2014，25(8)：831-834.

[11] 楊馭媒，翟亞茹，劉小琦，等.血清同型半胱氨酸水平及CPS1基因多態(tài)性與冠心病的相關(guān)性分析[J].中國分子心臟病學(xué)雜志，2014，22(5)：1098-1102.

[12] 王佳琪，王陽，徐海明，等.老年冠心病患者同型半胱氨酸水平與血脂相關(guān)性[J].中國老年學(xué)雜志，2015，25(5)：1284-1286.

[13] Hamid M，Ahmed S，Salah A，et al.Association of lipoprotein lipase gene with coronary heart disease in Sudanese population[J].Journal of Epidemiology amp;amp； Global Health，2015，26(5)：90-92.

[14] Jelassi A，Jguirim I，Slimani A，et al.Association between variants of lipoprotein lipase and coronary heart disease in a Tunisian population[J].Pathol Biol (Paris)，2012，60(3)：180-184.

[15] Zvyagina MV，Mal GS，Bushueva OY，et al.Estmating the effectiveness of hypolipidemic therapy with rosuvastatin in paients with coronary heart disesse depnding on the genotype of lipoprotein lipase[J].Eksperimentalnaia I Klinicheskaia Farmakologiia，2016，25(5)：102-104.

2016-07-11)

(本文編輯 王雅潔)

Correlation between Serum Homocysteine and LPL Gene Polymorphism in Elderly Patients with Acute Coronary Heart Disease

Li Caili， Huang Yong， Xu Zhengheng

Haikou Hospital of Traditional Chinese Medicine， Haikou 570216， Hainan， China

ObjectiveTo investigate the correlation between serum homocysteine (Hcy) and Lipoprotein lipase (LPL) gene polymorphism in elderly patients with acute coronary heart disease.MethodsEighty-four patients with coronary heart disease in our hospital from January 2015 to March 2016 were as observation group.Fifty-three healthy individuals were as controls.The polymorphism of LPL gene locus rs11570892 and serum Hcy， total cholesterol (TC)， triglyceride (TG)， low density lipoproteincholesterol (LDL-C) and high density lipoprotein cholesterol (HDL-C) levels were detected.ResultsThe levels of Hcy and TG were (20.10±6.43) mmol/L and (1.81±0.93) mmol/L in observation group， which was significantly higher than that in control group (Plt;0.05).HDL-C level was (0.81±0.21) mmol/L， which was significantly lower than that in control group (Plt;0.05).There was no difference in LPL rs11570892 locus genotype and allele between two groups (Pgt;0.05).TG level in observation group with GG patients was significantly higher than that in patients with AA and GA (Plt;0.05).HDL-C level in observation group with GG patients was significantly higher than that in patients with AA and GA (Plt;0.05).There was no difference in serum Hcy， TC and LDL-C among patients with different genotypes (Pgt;0.05).ConclusionLPL gene polymorphism was not associated with serum Hcy in elderly patients with acute coronary heart disease， which may be related to the serum lipid level.

coronary heart disease；serum homocysteine;LPL gene polymorphism；elderly patients；blood lipid

R541.4 R256.2

B

10.3969/j.issn.1672-1349.2017.21.028

1672-1349(2017)21-2750-04

海南省?？谑兄嗅t(yī)醫(yī)院 (?？?570216)，E-mail：lan86453@163.com

信息：黎才麗，黃勇，許政衡.老年冠心病急性發(fā)作期病人血清同型半胱氨酸與LPL基因多態(tài)性相關(guān)分析[J].中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2017，15(21)：2750-2753.