趙永峰，鄭凱旋，李藝丹，張婷婷，陳達，胡昌江

益智仁鹽炙前后分別組成縮泉丸對大鼠HPT軸功能的影響

趙永峰，鄭凱旋，李藝丹，張婷婷，陳達，胡昌江

目的：觀察益智仁炮制前后分別組成縮泉丸對大鼠下丘腦-垂體-甲狀腺軸（HPT軸）功能的影響，擬闡明縮泉丸中益智仁鹽炙前后的科學內(nèi)涵。方法：取SD大鼠隨機分成4組。采用腺嘌呤灌胃復制腎陽虛多尿模型，造模成功后開始分別給予益智仁鹽炙前后組成的縮泉丸，空白組和模型組給予等量蒸餾水。實驗結束后股動脈取血同時取下丘腦，測定各組大鼠血清三碘甲酸原氨酸（T3）、甲狀腺素（T4）、促甲狀腺激素（TSH）、血清和下丘腦促甲狀腺激素釋放激素（TRH）。結果：與空白組比較，模型組大鼠血清中T3、T4、TSH、TRH以及下丘腦TRH含量均顯著降低（P＜0.05）。與模型組比較，縮泉丸益智仁生品組以及縮泉丸益智仁鹽炙品組血清T3、T4、TSH、TRH以及下丘腦TRH含量均顯著升高（P＜0.05），且鹽炙品組含量高于生品組含量（P＜0.05）。結論：腺嘌呤所致的腎陽虛模型存在下丘腦-垂體-甲狀腺軸功能紊亂，縮泉丸中益智仁鹽炙前后對腎陽虛模型的甲狀腺功能均有不同程度的改善作用，尤以縮泉丸中益智仁鹽炙品效果較好，說明縮泉丸中益智仁用鹽炙品的合理性。

鹽炙；縮泉丸；甲狀腺激素；益智仁

縮泉丸出自《婦人良方》[1]，由益智仁、山藥和烏藥三味藥組成，功效溫腎驅寒，縮尿止遺，在臨床上常用治小便頻數(shù)或遺尿不止[2～3]。益智仁為方中君藥，生品功效主要偏于溫脾攝唾，鹽炙后功效偏于溫腎縮尿。根據(jù)“縮泉丸”的功效，方中應該用鹽炙品較好，但僅僅局限在中醫(yī)傳統(tǒng)理論，缺乏科學內(nèi)涵的解釋。中醫(yī)的腎陽虛的臨床癥狀常常表現(xiàn)為畏寒肢冷，小便頻數(shù)、喜靜萎靡等癥狀。當甲狀腺激素釋放減少，機體則會產(chǎn)生怕冷等一系列癥狀，符合中醫(yī)腎陽虛的臨床表現(xiàn)，故本實驗在前期的研究基礎上[4～7]，從甲狀腺功能角度[8]，以下丘腦-垂體-甲狀腺軸（HPT軸）為切入點，研究益智仁鹽炙前后分別組成縮泉丸對機體下丘腦-垂體-甲狀腺軸的影響，擬闡述縮泉丸中益智仁鹽炙的作用機制以及“鹽炙入腎-腎主水”的炮制機理。

1 實驗材料

1.1 動物

SD雄性大鼠40只，體重220-250g，由四川達碩動物實驗中心提供。實驗動物生產(chǎn)許可號：SCXK（川）2013-0024。

1.2 材料及試劑

益智仁（批號：20150312）、山藥（批號：20150305）、烏藥（批號：20150314）均購于荷花池藥材市場，經(jīng)鑒定均符合《中國藥典》2010版Ⅰ部相關項下要求。大鼠促甲狀腺激素（TSH）ELISA試劑盒（批號:201605-B17-2）大鼠促甲狀腺激素釋放激素（TRH）ELISA 試劑盒（批號:201605-B16-2）；大鼠甲狀腺素（T4）ELISA 試劑盒（批號:201605-B22-2）；大鼠三碘甲腺原氨酸（T3）ELISA 試劑盒（批號:201605-B26-2）；大鼠組織促甲狀腺激素釋放激素（TRH）ELISA 試劑盒批號:201605-B11-2（艾博抗(上海) 貿(mào)易有限公司）。腺嘌呤（D110160）（成都貝斯特試劑有限公司）。

1.3 儀器

TG16W型微量高速離心機；GNP-9080型隔水式恒溫培養(yǎng)箱；352型酶標儀（芬蘭Labsystems Multiskan MS）；AC8型洗板機（芬蘭Thermo Labsystems）。

2 方法

2.1 藥液的制備

2.1.1 腺嘌呤混懸液 臨用時配置成20 g﹒L-1的混懸液。

2.1.2 益智仁鹽炙前后分別組成縮泉丸 將生益智仁、山藥、烏藥分別粉碎過7號篩，按照2015版《中國藥典》規(guī)定，按照1:1:1的比例混合成縮泉丸中益智仁生品，臨用時配制成0.117 g﹒mL-1混懸液。鹽炙益智仁按照前期工藝[9]益智仁鹽炙后組成縮泉丸，其制備方法同生品。

2.2 動物模型及分組

取40只SD雄性大鼠隨機分成正常組、模型組、縮泉丸中益智仁生品組、縮泉丸中益智仁鹽炙品組共4組。除正常組外，其余3組按照200 mg?kg-1的劑量灌胃腺嘌呤造模4周，造模2周后，大鼠出現(xiàn)體重減輕，體毛疏松，倦怠嗜臥，畏寒蜷縮，尿量增加等陽虛癥狀后，開始給藥2周，股動脈取血，靜置，4000 r﹒min-1離心10分鐘，取血清，-20℃保存待用。同時在冰盤上迅速取下丘腦，稱取重量。然后加入一定量的PBS緩沖液，低溫離心20 min（3000 r﹒min-1）。取上清液于-20℃保存待測。

2.3 指標測定

血清T3、T4、TSH、TRH及下丘腦TRH采用酶聯(lián)免疫吸附法，按照試劑盒說明書操作。

2.4 數(shù)據(jù)分析

采用SPSS20.0軟件對數(shù)據(jù)進行處理，計量資料以（x±s）表示。數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布，使用單因素方差分析;多組間比較采用LSD檢驗。以P＜0. 05為有統(tǒng)計學意義。

3 結果

3.1 對大鼠血清中T3、T4、TSH的影響

結果表明，與空白組比較，模型組大鼠血清中T3、T4、TSH含量均顯著降低（P＜0.05）。與模型組比較，縮泉丸生品組以及縮泉丸鹽炙品組血清T3、T4、TSH含量均顯著升高（P＜0.05），且鹽炙品組含量高于生品組含量，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。結果見表1。

表1 益智仁鹽炙前后分別組成縮泉丸對大鼠血清中T3、T4、TSH含量的影響

3.2 對大鼠血清及下丘腦TRH的影響

結果表明，與空白組比，模型組下丘腦TRH及血清TRH含量均顯著降低（P＜0.05）。與模型組比，縮泉丸生品組以及縮泉丸鹽炙品組下丘腦TRH及血清TRH含量均有不同程度的升高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），且縮泉丸生品組和鹽炙品組比較，鹽炙品組含量高于生品組（P＜0.05）。結果見表2。

表2 益智仁鹽炙前后分別組成縮泉丸對大鼠血清中TRH及下丘腦TRH含量的影響

4 討論

中醫(yī)認為，腎中陽氣具有主持和調(diào)節(jié)機體水液代謝平衡的功能，即“腎主水”。機體的水液代謝有多個臟腑參與，但腎陽的功能最為重要，若腎陽不足，則會引起水液代謝障礙可能會出現(xiàn)小便清長或尿失禁、遺尿等癥狀。在中醫(yī)臨床應用中，縮泉丸是作為治療腎陽虛所致的小便頻數(shù)等癥的基礎方，具有溫腎驅寒，縮尿止遺的功效。腺嘌呤所致的大鼠腎陽虛模型尿量明顯增加，同時所伴隨的癥狀均符合中醫(yī)腎陽虛癥候[10]，故選用此模型作為本實驗研究對象。

甲狀腺為機體能量代謝的主要腺體之一，在熱量產(chǎn)生的過程中起著至關重要的作用。甲狀腺激素的產(chǎn)生與分泌依賴垂體的促甲狀腺激素激素的產(chǎn)生與分泌，而垂體激素又依靠下丘腦促甲狀腺激素釋放激素的分泌，從而構成下丘腦-垂體-甲狀腺軸，影響機體的產(chǎn)熱機能等。正常情況下這個四種激素處于一個相對平衡的狀態(tài)，當機體出現(xiàn)腎陽虛的表現(xiàn)，其下丘腦-垂體-甲狀腺軸功能出現(xiàn)紊亂，且黃俊山[11]等在探討寒癥熱癥的本質時發(fā)現(xiàn)甲狀腺水平的降低是構成虛寒證的主要勝利病例基礎之一。本實驗用腺嘌呤復制的腎陽虛模型不僅在癥狀上表現(xiàn)出明顯的腎陽虛癥狀，而且血清TRH、TSH、T3、T4水平以及下丘腦TRH水平也明顯下降，提示模型組大鼠出現(xiàn)了HPT軸功能的紊亂；而服用的益智仁鹽炙前后分別組成的縮泉丸治療組，大鼠外表癥狀及體征具有不同程度的減輕，同時血清TRH、TSH、T3、T4水平以及下丘腦TRH水平也明顯升高，說明了縮泉丸可以改善機體下丘腦-垂體-甲狀腺軸的功能，且縮泉丸中益智仁鹽炙品效果要比生品效果好，說明了益智仁炮制入藥的科學內(nèi)涵。

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Effects of stir-frying with salt-water of Yizhiren in Suoquan Wan on the function of hypothalamus pituitary thyroid axis

/ZHAO Yong-feng, ZHENG Kai-xuan, LI Yi-dan, ZHANG Ting-ting, CHEN Da, HU Chang-jiang//( School of Pharmacy,Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, Chengdu 611137,Sichuan)

Objective:To observe the effect of stir-frying with salt-water of Yizhiren in Suoquan Wan on the function of hypothalamus pituitary thyroid (HPT) axis in rats and clarify the scientific connotation Yizhiren in Suoquan Wan by stir-frying with salt-water.Method:SD rats were randomly divided into 4 groups: blank group, model group, Suoquan Wan crude group and Suoquan Wan salt-processed group. Kidney-yang deficiency polyuria rats model was induced by adenine. Then Suoquan Wan crude group and Suoquan Wan salt-processed group were given Suoquan Wan crude and processed product. The blank group and model group were given equal volume of distilled water. Finally, the rat femoral artery blood and the hypothalamus was collected and the contents of rat serum triiodothyronine orthoformate ammonia acid (T3), thyroxine (T4), promoting thyroid stimulating hormone(TSH), serum and hypothalamus promote thyroid hormone releasing hormone (TRH) were detected.Result:Compared with the blank group, the contents of serum T3, T4, TSH, TRH and hypothalamic TRH in the model group were significantly decreased(P＜0.05). Compared with the model group, the levels of serum T3, T4, TSH, TRH and hypothalamic TRH in Suoquan Wan crude group and Suoquan Wan salt-processed group were significantly increased (P＜0.05) and salt-processed product group showed better effect than the Suoquan Wan crude group (P＜0.05).Conclusion:The dysfunction of HPT axis is observed in adenineinduced kidney-yang deficiency polyuria rats model. Suoquan Wan crude group and Suoquan Wan salt-processed group model both improve the thyroid function of kidney-yang deficiency rat, and the salt-processed Yizhiren has better effect. The results indicate the rationality of stir-frying with salt-water of Yizhiren in Suoquan Wan.

Stir-frying with salt-water; Suoquan Wan; thyroid hormone; Yizhiren

R 285.5

A

1674-926X(2017)05-008-03

國家自然科學基金面上項目(81473353，30973941)

成 都中醫(yī)藥大學藥學院，四川 成都 611137

趙 永峰（1992-），男，碩士研究生，主要從事中藥炮制與制劑研究Tel:15184478991 Email:625789302@qq.com

胡 昌江，男，教授，博士生導師，主要從事中藥炮制原理及炮制工藝研究Tel:13980980796 Email:hhccjj@hotmail.com

2016-12-27

（責任編輯：陳思敏）