張棟 ，楊凱 ，劉波 ，劉娜 ，孔令靜

（1.山東省動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心，山東 濟(jì)南 250022；2.濟(jì)南市農(nóng)業(yè)局，山東 濟(jì)南 250022；3.山東匯眾獸醫(yī)技術(shù)服務(wù)有限公司，山東 濟(jì)南 250022）

一例蛋雞禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病和禽白血病混合感染的診治

張棟1，楊凱2，劉波3，劉娜3，孔令靜3

（1.山東省動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心，山東 濟(jì)南 250022；2.濟(jì)南市農(nóng)業(yè)局，山東 濟(jì)南 250022；3.山東匯眾獸醫(yī)技術(shù)服務(wù)有限公司，山東 濟(jì)南 250022）

某蛋雞場(chǎng)80日齡蛋雞出現(xiàn)漸進(jìn)性消瘦和生長(zhǎng)發(fā)育不良，剖檢可見(jiàn)腺胃腫大，乳頭擠壓出現(xiàn)膿性分泌物。無(wú)菌取病死雞的腺胃進(jìn)行熒光定量RT-PCR/PCR檢測(cè)，結(jié)果顯示該樣品禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病病毒、禽白血病病毒均為陽(yáng)性。結(jié)合臨床癥狀、剖檢病變和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果，該蛋雞場(chǎng)發(fā)病的原因是由禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病病毒和禽白血病病毒混合感染而引起的。

禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病病毒；禽白血病病毒；RT-PCR/PCR

禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病（RE）和禽白血病(AL)是繼馬立克?。∕D）后發(fā)現(xiàn)的兩種腫瘤性免疫抑制性疾病，其中RE是由禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病病毒（REV）引起的，單REV感染禽多不表現(xiàn)出典型的臨床癥狀，主要以病雞的生長(zhǎng)發(fā)育不良、漸進(jìn)性消瘦和因免疫抑制而繼發(fā)感染其他病原引起的病死率上升為特征[1]；AL是由禽白血病病毒（ALV）引起，發(fā)病雞主要表現(xiàn)為精神沉郁、生長(zhǎng)遲緩、雞群發(fā)育不均，感染雞群出現(xiàn)腫瘤疾病及其所導(dǎo)致的慢性消耗性死亡、生產(chǎn)性能下降和免疫抑制等。這兩種疾病均能造成禽類的免疫系統(tǒng)損傷，導(dǎo)致生產(chǎn)性能降低和死亡。近年來(lái)，ALV和REV感染有增多趨勢(shì)，這嚴(yán)重危害了養(yǎng)雞業(yè)的發(fā)展并造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失[2]。

1 雞群臨床癥狀

2016年8月，德州某蛋雞養(yǎng)殖場(chǎng)養(yǎng)殖蛋雞20000只，80日齡，病雞食欲下降(采食量一直不達(dá)標(biāo))，精神沉郁，羽毛蓬亂，雞冠蒼白，貧血，排飼料糞便，消瘦，生長(zhǎng)發(fā)育不良，發(fā)病率約為30%，零星傷亡。

2 剖檢變化

病死雞腺胃腫大（圖1、圖2），如乒乓球狀，腺胃壁顯著增厚、變硬，乳頭內(nèi)可擠出乳白色膿樣分泌物，個(gè)別腺胃粘膜出血脫落（圖3）、潰瘍；胸腺、脾臟萎縮。個(gè)別病雞盲腸扁桃體腫大、出血。其他器官無(wú)明顯病變。

圖1 外觀：腺胃腫大

圖2 剖解：腺胃腫大

圖3 腺胃粘膜脫落

3 實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)

3.1 材料與方法

3.1.1 試劑 禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病病毒單重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒購(gòu)自北京億森寶生物科技有限公司，禽白血病病毒實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)試劑盒購(gòu)自世紀(jì)元亨有限公司，病毒RNA/DNA柱式提取試劑盒購(gòu)自北京森康生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司。

3.1.2 方法 無(wú)菌采集病死雞的腺胃，將其剪碎后，研磨并勻漿，反復(fù)凍融4次，4℃ 8000r/min離心5min，取上清液分別用病毒RNA/DNA柱式提取試劑盒提取核酸，置于-20℃保存?zhèn)溆谩EV的反轉(zhuǎn)錄、擴(kuò)增，ALV的擴(kuò)增均按試劑盒說(shuō)明進(jìn)行操作。

3.2 檢測(cè)結(jié)果

3.2.1 REV的RT-PCR檢測(cè)結(jié)果 REV陽(yáng)性對(duì)照Ct值為12.909，呈 S型特異性曲線，陰性對(duì)照 Ct值為 0， 樣品 （B、C、D）Ct值分別為 15.772、15.455、16.208，樣品均呈擴(kuò)增曲線，如圖4所示，表明樣品感染了REV。

圖4 REV PCR圖

3.2.2 ALV的PCR檢測(cè)結(jié)果 ALV陽(yáng)性對(duì)照Ct值為15.74，呈S型特異性曲線，陰性對(duì)照Ct值為0，樣品（B、C、D）Ct值分別為 17.33、18.70、19.51，樣品均呈擴(kuò)增曲線，如圖5所示，表明樣品感染了ALV。

圖5 ALV PCR圖

4 診斷結(jié)果

結(jié)合臨床癥狀、剖檢變化以及實(shí)驗(yàn)室病毒RT-PCR/PCR檢測(cè)結(jié)果，可以明確該蛋雞場(chǎng)的發(fā)病原因是由REV和ALV混合感染所引起的。

5 討論

5.1 REV和ALV具有垂直傳播的特性，因此建議養(yǎng)殖戶從正規(guī)孵化場(chǎng)引進(jìn)健康雞苗，避免從疫區(qū)引進(jìn)種蛋和雛雞。對(duì)引進(jìn)的種雞要嚴(yán)格執(zhí)行先隔離觀察，之后再轉(zhuǎn)入生產(chǎn)群的制度。疫苗中兩者的污染和傳播是引起其感染和流行的重要原因[3]，此外所用疫苗也應(yīng)從正規(guī)廠家引進(jìn)，避免免疫造成二次污染。

5.2 REV和ALV是引起雞腺胃炎的重要因素。臨床上腺胃炎病雞的腺胃組織中這兩種病原檢出率顯著升高，可能是由于這兩種病原的混合或繼發(fā)感染所致，因此對(duì)兩者的有效防控，除凈化雞群外，應(yīng)防止繼發(fā)感染或混合感染。

5.3 加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，改善雞舍的飼養(yǎng)環(huán)境，保證舍內(nèi)溫度、濕度和合理通風(fēng)，為其健康創(chuàng)造有利條件。加強(qiáng)生物安全措施，發(fā)現(xiàn)病雞，及早隔離，避免接觸傳播。定期消毒，尤其是各種生產(chǎn)用具和運(yùn)輸車輛及種蛋的消毒。做好雞場(chǎng)的衛(wèi)生管理，墊料的消毒及處理、病死雞的無(wú)害化處理等工作。

[1] 任玉鵬,張煥容,王小楠,等.四川部分雞場(chǎng)禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒感染情況調(diào)查 [J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展.2015，36（6）:162-166.

[2] 沈清霞,任冬梅,丁紅雷,等.重慶市禽白血病及禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥的血清流行病學(xué)調(diào)查[J].黑龍江畜牧獸醫(yī),2014,11,54-55.

[3] 莊金秋,畢妍麗,梅建國(guó),等.應(yīng)用PCR法檢測(cè)禽源生物制品中禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī),2012,39（7）：36-39.

S858.31

B

1673-1085（2017）10-0038-03

2017-09-23