劉 彬 畢鴻艷 張凌峰 楊秋萍 龍 娟 黃亞利 任 惠※

作者單位：1.昆明醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院 老年神經(jīng)內(nèi)科 6500322.昆明醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院 老年內(nèi)分泌科 6500323.昆明醫(yī)科大學神經(jīng)內(nèi)科?？蒲芯可?650032

老年人群中AD7c-NTP檢測的意義

劉 彬1畢鴻艷2張凌峰1楊秋萍2龍 娟1黃亞利3任 惠1※

作者單位：1.昆明醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院 老年神經(jīng)內(nèi)科 6500322.昆明醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院 老年內(nèi)分泌科 6500323.昆明醫(yī)科大學神經(jīng)內(nèi)科?？蒲芯可?650032

目的研究在高原地區(qū)老年人群中進行尿中阿爾茨海默病(AD)相關的神經(jīng)絲蛋白(AD7c-NTP)含量檢測，對AD的早期診斷價值。方法采用ELISA檢測40例AD和50例智能正常老年人尿中AD7c-NTP含量。結果AD組和正常對照組尿中AD7c-NTP的含量分別為2.78±0.72ng/ml和0.96±0.45ng/ml，AD組尿液中AD7c-NTP的含量明顯高于正常對照組(P<0.01)；中重度AD組尿液中AD7c-NTP的含量明顯高于輕度AD組(P<0.01)。結論在高原地區(qū)應用對疑似患者尿液中AD7c-NTP的含量檢測，對AD的早期診斷和AD嚴重程度的評估是有顯著價值的。

AD7c-NTP 阿爾茨海默病

我國目前有老年性癡呆(阿爾茨海默病，AD)患者約700萬人，且每年約新增30萬人，癡呆基數(shù)較大，不僅危害人民健康和生活質量，也給國家及患者家庭帶來嚴重的經(jīng)濟和社會負擔?；颊叱３３霈F(xiàn)明顯認知功能異常時才引起家屬的重視，由家屬帶來醫(yī)院神經(jīng)科或精神科就診，此時往往已經(jīng)為中晚期，治療效果不明顯。因此，對癡呆進行早期、正確的診斷、干預治療，是迫切需要的，尤其是對社區(qū)醫(yī)院第一接診老年患者人群的全科醫(yī)師提出了更高要求。

本研究針對來我院記憶門診就診或普通老年內(nèi)科就診的老年人群，認為自己或家人發(fā)現(xiàn)其有記憶逐漸下降，或性格改變的患者，獨立生活能力下降等異常情況的60歲以上人群，排外腦梗死病史，以檢測尿AD7c-NTP含量作為初篩，并同時進行簡易精神神經(jīng)量表評定(MMSE)、Hachinski缺血指數(shù)(HIS)、日常生活能力量表(ADL)測定，具體研究情況如下。

1.資料與方法

1.1 研究對象 2016年3月至2017年3月在昆明醫(yī)科大學第一附屬神經(jīng)內(nèi)科及記憶門診就診的老年志愿者共130例。入選標準：①所有病例均取得知情同意；②進行病史采集、全身及?？企w格檢查、頭顱CT或MRI顯示有腦萎縮，排除腦血管病引起的癡呆；③簡易精神神經(jīng)量表評定(MMSE)、Hachinski缺血指數(shù)(HIS)、日常生活能力量表(ADL)、漢密爾頓抑郁量表(HAMD)≤7；④甲狀腺功能正常、梅毒抗體陰性；⑤血尿常規(guī)、肝腎功能、血糖、血脂、心電圖、血壓正常。MCI(輕度認知功能障礙)組40例，男性25例，女性15例，年齡60～91歲，平均年齡67.20±8.3歲；AD組40例，輕度22例，男性13例，女性9例，平均年齡73.80±8.35歲；中重度18例，男性7例，女性11例，年齡65～93歲，平均年齡71.63±9.56歲；智能正常對照組50例，男性27例，女性23例，年齡60～90歲，平均年齡72.83±8.42歲。

1.2 評定標準 AD符合美國美國國立神經(jīng)病語言障礙腦卒中研究所和AD病及相關疾病協(xié)會(NINCDS-ADRDA)的很可能AD診斷標準[2]，MMSE:文盲≤17分，小學≤20分，中學及以上≤26分；HIS≤4分，HAMD≤8分。輕度的AD:19分≤MMSE≤26分；中重度的AD:MMSE<19分。MCI符合美國Mayo神經(jīng)病學研究中心的Petersen診斷標準，MMSE:文盲18～27分，小學21～27分，中學及以上25～27分；HIS≤4分，HAMD≤8分。正常對照組為年齡性格匹配智能檢查正常的老年人，無嚴重軀體疾病及精神障礙，MMSE 26～30分，HIS≤4分，ADL=20分。

1.3 AD7c-NTP測定 采用深圳市安群生物工程有限公司提供的AD7c-NTP檢測試劑盒。留取被檢測者中段晨尿，選取經(jīng)尿常規(guī)檢測合格的清亮標本，經(jīng)過離心、過濾，取上清液2ml作為待測試液即樣本，采用改良的ELISA雙抗體夾心法，將樣本加入試劑盒中，存在于樣本中的AD7c-NTP與板上包被的抗體結合，通過洗板，將未結合的游離成分洗去；加入AD7c-NTP的多抗，溫育后洗滌，再加入辣根過氧化物酶標記的酶結合物，最終形成抗體/抗原/抗體/酶標二抗的復合物，加入顯色劑顯色，15分鐘后終止反應，在450nm處測OD值，根據(jù)已知濃度的校準品繪制出標準曲線，最終算出樣本的AD7c-NTP含量，正常參考值≤1.5ng/ml。

2.結果

2.1 總AD組與MCI組及正常對照組 三組年齡構成經(jīng)方差分析，差異無顯著性(F=0.563,P=0.748)；三組性別構成，差異無顯著性(χ2=0.12,P=0.86),總AD組MCI組，總AD組與正常對照組，尿液中AD7c-NTP比較均有差異顯著性(P<0.01)，見表1。

表1 各組尿液AD7c-NTP含量比較

注：與總AD組比較：*P<0.01。

2.2 輕度AD組與中重度AD組尿液中AD7c-NTP比較均有差異顯著性(P<0.01)，見表2。在重度AD組中有4例患者的7c-NTP含量<1.5ng/ml。

表2 各組尿液AD7c-NTP含量比較

注：與輕度AD組比較：*P<0.01。

3.討論

1992年，麻省總醫(yī)院的Suzanne de la Monte等人在AD腦中發(fā)現(xiàn)大量與神經(jīng)元纖維纏結有關的神經(jīng)絲蛋白(neural thread protein，NTP)[1]。1997年，De la Monte團隊成功分離出AD7c的cDNA，命名為AD7c-NTP。尿AD7c-NTP可特異性反映大腦神經(jīng)損傷，與Tau蛋白具有同等效力AD7c-NTP特異性分布大腦額葉、顳葉，只反映大腦神經(jīng)元損傷；AD7c-NTP為神經(jīng)元軸突跨膜蛋白，與Tau蛋白共同定位；尿AD7c-NTP蛋白特異性反映腦神經(jīng)元損傷[2]。De la monte發(fā)現(xiàn)AD7c-NTP后，用尸檢確診的AD患者大腦切片進行研究。原位雜交和免疫組化染色發(fā)現(xiàn)：表達增加出現(xiàn)在組織學尚完整的變性神經(jīng)元，證明異常AD7c-NTP蛋白表達增加是AD神經(jīng)變性的早期事件[2]。

AD是一個進展性疾病，而AD7c-NTP是神經(jīng)元損傷標志物，反映大腦神經(jīng)元損傷的速度。文獻表明AD7c-NTP的免疫反應性在早期神經(jīng)炎性斑塊中可以檢測到，證明異常AD7c-NTP表達是AD的早期事件[2],在疾病的早期檢測濃度可能更高更靈敏。MCI期患者由于大腦神經(jīng)元開始大范圍凋亡，分泌出AD7c-NTP蛋白，故根據(jù)不同受檢者的疾病發(fā)展速度可檢測到不同濃度水平的表達。國內(nèi)臨床實踐表明MCI患者尿液AD7c-NTP水平顯著高于健康組[3]。此外，早期AD7c-NTP濃度高低對疾病發(fā)展與預后有很好的提示作用。收集MCI患者尿液檢測AD7c-NTP濃度，隨后進行隨訪研究2年，結果表明：轉化為AD的MCI組尿液AD7c-NTP水平顯著高于穩(wěn)定期MCI組，顯示尿AD7c-NTP對疾病轉歸與預后具有一定的預測效力[4]。

在本研究中，我們觀測到AD組的尿AD7c-NTP明顯高于正常組，但是也檢測到部分重度AD組的尿AD7c-NTP低于輕-中度AD組，甚至在正常范圍即為陰性。文獻研究表明：AD7c-NTP過度表達是AD的早期病理事件，AD7c-NTP表達的增加出現(xiàn)在組織學尚完整的變性神經(jīng)元中[5]。而在另外一篇文獻研究中也顯示：AD7c-NTP的免疫反應性在早期神經(jīng)炎性斑塊中可以檢測到，而在成熟斑塊中卻沒有發(fā)現(xiàn)[6]，證明異常AD7c-NTP表達是AD的早期事件。因為隨著疾病發(fā)展到重度時期，神經(jīng)元發(fā)生變性和凋亡，而AD7c-NTP這樣的神經(jīng)絲蛋白也會隨著被溶解和吸收。有文獻研究證明：在凋亡的神經(jīng)元中，未發(fā)現(xiàn)AD7c-NTP抗體免疫反應[6]。所有部分AD中晚期忠者，其尿AD7c-NTP很低。

尿AD7c-NTP陽性，說明腦額葉、顳葉神經(jīng)元中Tau蛋白出現(xiàn)異常磷酸化的可能，正發(fā)生廣泛性神經(jīng)元損傷，提示大腦神經(jīng)元發(fā)生異常損傷，建議：①控制高風險因素，②關注大腦健康，適當用腦，補充大腦營養(yǎng)。尿AD7c-NTP陰性，MMSE評分正?；蛏缘?，說明腦額、顳葉未見廣泛性腦神經(jīng)元損傷，提示患者當前暫無異常腦損傷；而對于MMSE評分很低，達到認知功能嚴重障礙者說明AD中重度期[7]。

尿液AD7c-NTP檢測技術對AD臨床早期篩查意義重大，值得重視和推廣應用。

1 DE LA MONTE SM，WANDS JR.Neuronal thread protein over-expression in brains with Alzheimer’s disease lesions.J Neurol Sci，1992，113(2):152-164.

2 De la Monte SM，Kasra Ghanbari.J Clin Invest,1997，100(12):3093-1041.

3 MA L，CHEN J，WANG R，HAN Y，ZHANG J，DONG W，ZHANG X，WU Y，ZHAO Z.The level of Alzheimer-associated neuronal thread protein in urine may be an important biomarker of mild cognitive impairment.J Clin Neurosci，2015，22(4):649-652.DOI：10.1016/j.jocn.2014.10.011.

4 Wang C, Cui Y, Yang J, et al. Combining serum and urine biomarkers in the early diagnosis of mild cognitive impairment that evolves into Alzheimer’s disease in patients with the apolipoprotein E ∈4 genotype[J]. Biomarkers Biochemical Indicators of Exposure Response & Susceptibility to Chemicals, 2015, 20(1):84-88.

5 MONTE SM，GHANBARI K，F(xiàn)REY WH，BEHESHTI I，AVERBACK P，HAUSER SL，GHANBARI HA，WANDS JR.Characterization of the AD7C-NTP cDNA expression in Alzheimer’s disease and measurement of a 41-kD protein in cerebrospinal fluid.J Clin Invest，1997，100(12):3093-3104.DOI：10.1172/JCI119864.

6 DE LA MONTE SM，CARLSON RI，BROWN NV，WANDS JR.Profiles of neuronal thread protein expression in Alzheimer’s disease.J Neuropathol Exp Neurol，1996，55(10):1038-1050.

7 彭丹濤.阿爾茨海默病診治進展.中華老年醫(yī)學雜志，2009，28(2):91-92.DOI：10.3760/cma.j.issn.0254-9026.2009.02.028.

云南省衛(wèi)生科技計劃項目(編號2014NS140)

劉彬，碩士，副主任醫(yī)師，主要研究領域：癡呆及腦血管病。

※通訊作者：任惠，碩士，主任醫(yī)師，碩士生導師，主要研究領域：癡呆、帕金森病、癲癇。

10.3969/j.issn.1672-4860.2017.05.008

2017-8-21