宋鎖柱

（盤錦市傳染病醫(yī)院檢驗(yàn)科，遼寧 盤錦 124000）

漿膜腔積液采集后質(zhì)量控制在細(xì)胞學(xué)檢查中的必要性

宋鎖柱

（盤錦市傳染病醫(yī)院檢驗(yàn)科，遼寧 盤錦 124000）

目的 本文旨在分析充池后靜置時(shí)間、混勻程度、樣本采集后放置時(shí)間對(duì)漿膜腔積液細(xì)胞學(xué)檢測結(jié)果的影響。方法 隨機(jī)抽取本院在2016年8月采集的32例漿膜腔積液作為研究對(duì)象分別進(jìn)行①、②、③實(shí)驗(yàn)：①混勻樣本充池放置0～1min、1～2min、2～3min、3～4min后進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。②分析混合不均勻樣本，分析混合均勻樣本；③樣本被放置1 h、3 h、5 h、10 h后進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。結(jié)果 ①充池后，隨靜置時(shí)間推移，白細(xì)胞（WBC）、紅細(xì)胞（RBC）數(shù)均逐漸增加，0～1min同1～2min比較、2～3min同3～4min比較，白細(xì)胞數(shù)、紅細(xì)胞數(shù)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；0～1min同2～3min、3～4min相比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；1～2min同2～3min、3～4min分別比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。②不同混勻程度組間的白細(xì)胞、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。③白細(xì)胞數(shù)、紅細(xì)胞數(shù)隨積液放置時(shí)間推移均有所減少。1 h和3 h比較，白細(xì)胞數(shù)、紅細(xì)胞數(shù)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；1 h和5 h、10 h比較，白細(xì)胞數(shù)方面差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而紅細(xì)胞數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論 充池后靜置時(shí)間、混勻程度、樣本采集后放置時(shí)間會(huì)對(duì)某些檢驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生影響。

漿膜腔積液；質(zhì)量控制；時(shí)間；白細(xì)胞；紅細(xì)胞

漿膜腔積液標(biāo)本采集與處理[1]是樣本質(zhì)量控制環(huán)節(jié)中的重要部分，采集不當(dāng)、轉(zhuǎn)運(yùn)檢驗(yàn)不及時(shí)、以及檢驗(yàn)中樣本處理不恰當(dāng)?shù)榷紩?huì)導(dǎo)致檢驗(yàn)結(jié)果的不準(zhǔn)確?，F(xiàn)對(duì)32例隨機(jī)樣本按實(shí)驗(yàn)需求進(jìn)行下列實(shí)驗(yàn)，僅探尋樣品采集后：樣本充池后靜置時(shí)間、混勻程度、樣本采集后放置時(shí)間會(huì)對(duì)某些檢驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生影響。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 現(xiàn)隨機(jī)抽取本院在2016年8月期間采集到的漿膜腔積液32例，包括男18例，女14例，年齡24～65歲，平均（53.3±4.6）歲。其中胸水20例，腹水12例。納入標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)EDTA-K2（100mg/mL）抗凝（6mL積液加入EDTA-K 20.1mL）后流動(dòng)性好無凝固現(xiàn)象、無大小凝塊、標(biāo)識(shí)清晰、非膿性及乳糜積液。排除標(biāo)準(zhǔn)：凡不符合納入標(biāo)準(zhǔn)者。

1.2 實(shí)驗(yàn)器材 改良牛鮑血細(xì)胞計(jì)數(shù)板和蓋玻片（上海求精生化儀器試劑有限公司）、OLYMPUS光學(xué)顯微鏡（日本OLYMPUS公司）、一次性微量吸管和EDTA-K2真空采集管（煙臺(tái)永明醫(yī)療科技有限公司）。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法 手工顯微鏡鏡檢按《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》第4版[2]操作，對(duì)采集的樣本混勻后均分為3份，分別進(jìn)行試驗(yàn)①、②、③。①充池后靜置0～1min、1～2min、2～3min、3～4min分別進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)；②分析混合不均勻樣本，分析混合均勻樣本；③樣本被放置1 h、3 h、5 h、10 h后混勻進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。三個(gè)實(shí)驗(yàn)均是計(jì)數(shù)白細(xì)胞（WBC）、紅細(xì)胞（RBC）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 本研究數(shù)據(jù)均用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，計(jì)量資料采用“x±s”表示,組間比較采用t檢驗(yàn),計(jì)數(shù)資料以率（%）表示,采用χ2檢驗(yàn)；P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。細(xì)胞計(jì)量單位（109/L）

2 結(jié)果

2.1 充池后靜置不同時(shí)間的比較 隨靜置時(shí)間推移，白細(xì)胞、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)均逐漸增加。在白細(xì)胞、紅細(xì)胞各自差異方面：0～1min同1～2min差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；2～3min同3～4min比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；1～2min同2～3min、3～4min分別比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；0～1min同2～3min、3～4min比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表1。

表1 充池后靜置不同時(shí)間細(xì)胞計(jì)數(shù)的比較

表1 充池后靜置不同時(shí)間細(xì)胞計(jì)數(shù)的比較

注：和2～3min、3～4min比較，a P＜0.05；和2～3min，3～4min比較，b P＜0.05

紅細(xì)胞78.2±2.3a 88.4±3.0b 106.6±3.3 107.0±3.7時(shí)間（min）0～1 1～2 2～3 3～4白細(xì)胞1.12±0.04a 1.50±0.09b 1.89±0.11 1.90±0.13

2.2 積液不同混勻程度細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果的比較 不均勻組同均勻組白細(xì)胞數(shù)差異、紅細(xì)胞數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表2。

表2 積液不同混勻程度細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果的比較

表2 積液不同混勻程度細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果的比較

注：和均勻組相比較，a P＜0.05

組別不均勻組均勻組例數(shù)32 32白細(xì)胞0.76±0.08a 1.05±0.12紅細(xì)胞50.4±2.7a 77.5±3.3

2.3 不同放置時(shí)間后檢查結(jié)果比較 隨放置時(shí)間推移，白細(xì)胞數(shù)、紅細(xì)胞數(shù)均有所減少。1 h和3 h比較，白細(xì)胞數(shù)、紅細(xì)胞數(shù)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；1 h和5 h、10 h分別比較，白細(xì)胞數(shù)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而紅細(xì)胞數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表3。

表3 積液放置不同時(shí)間后細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果得比較

表3 積液放置不同時(shí)間后細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果得比較

注：和5 h、10 h比較，b P＜0.05

紅細(xì)胞88.5±4.5b 86.4±4.1 77.2±4.1 73.7±3.8時(shí)間（h）1 3 5 1 0例數(shù)32 32 32 32白細(xì)胞1.19±0.22 1.16±0.21 1.14±0.18 1.13±0.11

3 討論

引發(fā)漿膜腔積液的相關(guān)疾病包括結(jié)核、胸膜炎、腹膜炎、肺炎、脾破裂、肝硬化、肝癌以及某些腫瘤等疾病，可能出現(xiàn)的臨床癥狀包括營養(yǎng)不良、浮腫、腮腺腫脹、膽汁性肝硬化等[3]。積液按性質(zhì)一般分為漏出液和滲出液，二者產(chǎn)生的機(jī)制和原因不同[4]，前者為非炎癥性，后者為炎癥性。漿膜腔積液檢查有常規(guī)的理學(xué)檢查，包括積液量、顏色、透明度、凝塊形成、比重及酸堿度等，還有細(xì)胞學(xué)和化學(xué)檢查，包括檢查細(xì)胞的數(shù)量和種類，檢測蛋白質(zhì)、葡萄糖、脂類和腫瘤標(biāo)志物等，此外還發(fā)展了特異性化學(xué)、免疫學(xué)等指標(biāo)，提高了漿膜腔積液性質(zhì)診斷的符合率。通過這些檢驗(yàn)可以鑒別漏出液和滲出液，還可以鑒別良性和惡性積液為臨床找出積液原因提供重要依據(jù)[5-7]。近些年又有學(xué)者[8]提出用血細(xì)胞分析儀對(duì)漿膜腔積液進(jìn)行形態(tài)學(xué)檢查，但并未顯示良好價(jià)值。但也有資料[9-10]顯示儀器法漿膜腔積液細(xì)胞計(jì)數(shù)與手工法具有良好相關(guān)性,且具有簡便、經(jīng)濟(jì)、準(zhǔn)確性高等優(yōu)點(diǎn)。但不論是儀器或手工鏡檢法，若積液采集后未能及時(shí)送檢并處理，那么放置較長時(shí)間的樣本理化性質(zhì)將發(fā)生改變，如糖和蛋白質(zhì)分解、酶活性降低等，細(xì)胞的數(shù)量和形態(tài)也會(huì)發(fā)生變化，如細(xì)胞數(shù)量增多、減少、溶解和腫脹變性等[11]。這些都將加大理學(xué)、形態(tài)學(xué)、生化學(xué)的檢驗(yàn)誤差，甚至有可能會(huì)出現(xiàn)臨床無法接受的結(jié)果。

本研究的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，計(jì)數(shù)池充池后隨靜置時(shí)間推移積液內(nèi)白細(xì)胞和紅細(xì)胞數(shù)量逐漸變化，0～1min同1～2min差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，原因在于此段時(shí)間部分細(xì)胞還處于懸浮狀態(tài)尚未沉于計(jì)數(shù)池底，細(xì)胞重疊未停留在同一平面，所以在初期，視野內(nèi)細(xì)胞數(shù)量較少[12]。隨靜置時(shí)間的推移，細(xì)胞增長快速，2～3min與3～4min差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，因此段時(shí)間細(xì)胞已全部下沉至計(jì)數(shù)池底,細(xì)胞停留在同一平面計(jì)數(shù)結(jié)果基本穩(wěn)定，但0～1min、1～2min與2～3min、3～4min分別比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），因此充池后應(yīng)靜置2～3min后再計(jì)數(shù)；在本研究中，不均勻組與均勻組的白細(xì)胞、紅細(xì)胞差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），原因在于漿膜腔積液由醫(yī)生采集后，若實(shí)驗(yàn)室較遠(yuǎn)或護(hù)理人員工作忙碌，樣本不能夠立即被運(yùn)送檢驗(yàn)，積液中的細(xì)胞會(huì)發(fā)生沉淀導(dǎo)致樣本上層細(xì)胞減少。因此，檢驗(yàn)前應(yīng)充分混勻樣本，否則細(xì)胞數(shù)會(huì)有所減少；本實(shí)驗(yàn)還顯示，隨樣本采集后放置時(shí)間延長，積液內(nèi)白細(xì)胞、紅細(xì)胞數(shù)量均減少，白細(xì)胞1 h和3 h、5 h、10 h分別比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而紅細(xì)胞數(shù)1 h與3 h比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,但與5 h、10 h比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），原因在于，漿膜腔積液離體后，隨放置時(shí)間的延長，樣本中的糖分被持續(xù)增加的細(xì)菌等微生物分解，積液滲透壓被降低，細(xì)胞生存能力下降，導(dǎo)致細(xì)胞腫脹、破壞溶解致使細(xì)胞數(shù)量減少[13]。本實(shí)驗(yàn)中雖然白細(xì)胞計(jì)數(shù)隨時(shí)間延長減低不明顯，個(gè)時(shí)間段差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但放置3 h的紅細(xì)胞與5 h、10 h計(jì)數(shù)比較已有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。因此根據(jù)本實(shí)驗(yàn)結(jié)果，建議積液采集后應(yīng)在短時(shí)間內(nèi)檢驗(yàn)完畢，最好不要超過3 h。

綜上所述，在漿膜腔積液檢查的諸多質(zhì)控環(huán)節(jié)中本文所論述的充池后靜置時(shí)間、混勻程度采集后放置時(shí)間對(duì)檢驗(yàn)的準(zhǔn)確度會(huì)產(chǎn)生一定的影響，在臨床工作中醫(yī)、護(hù)、技人員加強(qiáng)注意按標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)范操作是得到及時(shí)準(zhǔn)確的檢驗(yàn)結(jié)果的前提。

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10.3969/j.issn.1009-4393.2017.32.070