韓雪，陳穎，陳長祥

（營口市中心醫(yī)院耳鼻喉科，遼寧 營口 115000）

Bcl-2、Fas和嗜酸性粒細胞趨化因子Eotaxin-2在鼻息肉中的表達

韓雪，陳穎，陳長祥

（營口市中心醫(yī)院耳鼻喉科，遼寧 營口 115000）

目的 檢測鼻息肉中Bcl-2、Fas和嗜酸性粒細胞趨化因子Eotaxin-2的表達情況，研究這三種因子在鼻息肉發(fā)病中所起到的作用。方法 設(shè)定50例鼻息肉組織為實驗組，30例下鼻甲黏膜組織為對照組,應(yīng)用實時定量-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR），測定兩組中Bcl-2、Fas和嗜酸性粒細胞趨化因子Eotaxin-2的mRNA的表達水平，應(yīng)用統(tǒng)計學(xué)的方法，對其相關(guān)性進行分析。結(jié)果 Bcl-2的mRNA在實驗組的相對表達量RQ（4.28±0.79）與對照組的相對表達量RQ（1.27±0.31）比較有明顯的差異；Fas的mRNA在實驗組的相對表達量RQ（1.42±0.31）與對照組的相對表達量RQ（10.90±1.92）比較有明顯的差異；Eotaxin-2的mRNA在實驗組的相對表達量RQ（2.47±0.77）與對照組的相對表達量RQ（1.69±0.67）比較有明顯的差異；Bcl-2與Eotaxin-2二者呈正相關(guān)；Eotaxin-2與Fas二者無相關(guān)性；Bcl-2與Fas二者無相關(guān)性。結(jié)論Bcl-2、Fas和嗜酸性粒細胞趨化因子Eotaxin-2在鼻息肉發(fā)生發(fā)展中起到了重要作用。

鼻息肉；Bcl-2；Fas；嗜酸性粒細胞趨化因子Eotaxin-2

鼻息肉（NP）是耳鼻喉科的一種常見病及多發(fā)病，這種公認(rèn)的慢性炎癥是在多種致病因素作用下產(chǎn)生的[1]。主要表現(xiàn)為基質(zhì)黏膜水腫、黏膜下血管及間質(zhì)增生、大量嗜酸性粒細胞（EOS）浸潤、伴有漿細胞、淋巴細胞和巨噬細胞等炎性細胞浸潤，腺體呈囊性擴張?；谶@種改變，重力使水腫的黏膜下垂形成NP[2]。迄今為止NP的發(fā)病機制仍不清晰，但其復(fù)雜程度是公認(rèn)的[3]。但有研究表明在EOS浸潤、活化刺激鼻息肉形成的過程中，眾多的細胞因子也起到了重要作用[4]。根據(jù)EOS高濃度聚集導(dǎo)致的NP形成，這一常見的發(fā)病因素暨感染因素以及細胞凋亡及細胞因子的重要作用[5]，我們選擇了Bcl-2、Fas及與嗜酸性粒細胞趨化密切相關(guān)的趨化因子Eotaxin-2，這三種因子作為研究對象，通過研究Bcl-2、Fas及Eotaxin-2這三種因子在鼻息肉中的表達，探討三種因子在鼻息肉發(fā)病中的作用及其之間的相互作用對鼻息肉發(fā)生發(fā)展的影響。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 鼻息肉組織標(biāo)本來源于營口市中心醫(yī)院耳鼻喉科2015年12月～2017年5月耳鼻喉科行鼻內(nèi)鏡下鼻息肉手術(shù)切除的患者50例為實驗組,男28例,女22例,年齡21～68歲。選擇的對象要求排除變態(tài)反應(yīng)性鼻炎、支氣管哮喘病史及對阿司匹林的耐受不良。術(shù)前無皮質(zhì)類固醇激素、抗組胺及抗生素等相關(guān)治療。下鼻甲黏膜組織標(biāo)本來源于營口市中心醫(yī)院耳鼻喉科2015年12月～2017年5月耳鼻喉科慢性肥厚性鼻炎在鼻內(nèi)鏡下行下鼻甲縮容術(shù)即下鼻甲骨黏膜下切除術(shù)的患者30例為對照組,男16例,女14例，年齡27～56歲，實驗組鼻息肉組織及對照組正常下鼻甲黏膜組織均液氮凍存。

1.2 方法

1.2.1 引物的設(shè)計[6]在BLAST搜索針對Bcl-2、Fas、Eotaxin-2的基因序列，設(shè)計特異性引物后經(jīng)UCSC驗證，以βactin為內(nèi)參。引物合成由大連寶生物科技有限公司提供。

1.2.2 提取RNA[7-8]①1mLRNAiso Plus加入凍存碎裂的組織中，不斷吹打混勻。②當(dāng)不可見固體成分以后，室溫靜置5min后組織細胞充分裂解。③加入氯仿0.2mL，劇烈震蕩15 s，乳化后，靜置5min。④12 000 g，4 ℃離心15min,液體分三層,無色上層水相可分離RNA、中層和紅色底層有機相可分離DNA和蛋白，緩慢吸取無色上清。⑤加等量體積異丙醇顛倒混勻，沉淀RNA，冰上靜置10min。⑥12 000 g，4℃離心10min,棄上清，加1mL 75%乙醇，緩慢顛倒洗滌DNA。⑦12 000 g，4℃離心5min,棄上清，吸取乙醇，室溫空氣中干燥5min。⑧向干燥過的沉淀物加入100μLDEPC水溶解RNA沉淀。⑨RNA濃度檢測：酶標(biāo)儀檢測RNA濃度，每次上樣1 uL，重復(fù)3次，取平均值。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 選取SPSS 17.0統(tǒng)計學(xué)軟件，計量資料采用“x±s”表示,組間比較采用t檢驗,計數(shù)資料以率（%）表示,采用χ2檢驗；P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 實驗組和對照組中Bcl-2、Fas和嗜酸性粒細胞趨化因子Eotaxin-2的mRNA的表達 ①Bcl-2的mRNA在實驗組的表達RQ為（4.28±0.79），在對照組的表達RQ為（1.27±0.31），即Bcl-2在實驗組的表達要強于對照組，兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。②Fas的mRNA在實驗組的表達水平RQ為（1.42±0.31），在對照組的表達RQ為（10.90±1.92），即Fas在實驗組的表達要弱于對照組，兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。③Eotaxin-2的mRNA在實驗組的表達RQ為（2.47±0.77），在對照組的表達RQ為（1.69±0.67），即Eotaxin-2在實驗組的表達水平要高于對照組的表達水平，兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 實驗組和對照組中Bcl-2、Fas、Eotaxin-2的相對表達量

表1 實驗組和對照組中Bcl-2、Fas、Eotaxin-2的相對表達量

P值＜0.05＜0.05＜0.05項目Bcl-2 Fas Eotaxin-2實驗組（n=50）4.28±0.79 1.42±0.31 2.47±0.77對照組（n=30）1.27±0.31 10.90±1.92 1.69±0.67 t值8.92 5.32 5.61

2.2 實驗組Bcl-2、Fas和嗜酸性粒細胞趨化因子Eotaxin-2的mRNA相對表達量之間的相關(guān)性分析 實驗組中三個因子的mRNA相對表達量統(tǒng)計學(xué)相關(guān)性分析結(jié)果如下：Bcl-2與Eotaxin-2（r=0.581，P＜0.05）；Eotaxin-2 與 Fas（r=-0.047，P＞0.05）；Bcl-2 與 Fas（r=-0.174，P＞0.05）；提示Bcl-2與Eotaxin-2表達呈正相關(guān)，而Fas和Bcl-2及Eotaxin-2的表達無相關(guān)性。

3 討論

3.1 Bcl-2與鼻息肉的關(guān)系 Bcl-2及其相關(guān)蛋白在細胞凋亡這一過程的調(diào)控中扮演著重要的角色[9]。本文通過RTPCR的檢測方法研究50例鼻息肉組織（實驗組）及30例下鼻甲黏膜組織（對照組)中Bcl-2mRNA的表達情況，發(fā)現(xiàn)其在是實驗組的相對表達量高于對照組，實驗組RQ（4.28±0.79），對照組RQ（1.27±0.31），差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。本實驗結(jié)果同以往實驗結(jié)果一致[10]，即在鼻息肉組織中表達增多，Bcl-2有抑制凋亡的作用，在鼻息肉形成的過程中起到了促進其發(fā)生發(fā)展的作用。

3.2 Fas與鼻息肉的關(guān)系 本文通過RT-PCR的方法得出其作用的結(jié)論：Fas在實驗組中的表達要低于對照組，其在NP中的表達RQ（1.42±0.31）與下鼻甲黏膜組織中表達RQ（10.90±1.92）比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。即在鼻息肉組織中Fas呈現(xiàn)低表達，同時在下鼻甲黏膜組織中高表達。鼻息肉上皮細胞因此而過度增殖，導(dǎo)致鼻息肉體積的不斷增大，間質(zhì)中出現(xiàn)新腺體的形成。因此Fas是NP形成中的一個重要的細胞因子。

本實驗結(jié)果提示：Eotaxin-2在鼻息肉組織中的表達量RQ（2.47±0.77），在下鼻甲黏膜組織中的表達量RQ（1.69±0.67）比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），即Eotaxin-2在鼻息肉中含量要高于其在下鼻甲黏膜組織中的含量，兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)果同眾多的研究結(jié)論一致[11]，即鼻息肉組織中Eotaxin-2高表達，同時在下鼻甲組織中的低表達相符。進一步說明了Eotaxin-2與在NP形成中的不可替代的作用。

三種因子Bcl-2、Fas及Eotaxin-2，在鼻息肉的發(fā)生發(fā)展中，抑制凋亡基因Bcl-2含量上調(diào)，誘導(dǎo)凋亡基因Fas含量下調(diào)，而可活化及促使嗜酸性粒細胞募集及原位激活的趨化因子Eotaxin-2含量上調(diào)，且Bcl-2和Eotaxin-2存在相關(guān)性，在兩者共同的作用下從不同的方面促進了NP的生長。

綜上所述，對于鼻息肉的發(fā)生發(fā)展機制的解釋仍趨于為多因素及多途徑的作用結(jié)果。在NP形成的微環(huán)境中，EOS及其相關(guān)的眾多的細胞因子扮演者著重要的角色。Bcl-2、Fas及嗜酸性粒細胞趨化因子Eotaxin-2這三個因子在鼻息肉中的發(fā)生發(fā)展中起到了重要的作用。

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10.3969/j.issn.1009-4393.2017.32.042