韓雪，陳穎，陳長祥

（營口市中心醫(yī)院耳鼻喉科，遼寧 營口 115000）

Bcl-2、Fas和嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子Eotaxin-2在鼻息肉中的表達(dá)

韓雪，陳穎，陳長祥

（營口市中心醫(yī)院耳鼻喉科，遼寧 營口 115000）

目的 檢測鼻息肉中Bcl-2、Fas和嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子Eotaxin-2的表達(dá)情況，研究這三種因子在鼻息肉發(fā)病中所起到的作用。方法 設(shè)定50例鼻息肉組織為實驗組，30例下鼻甲黏膜組織為對照組,應(yīng)用實時定量-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR），測定兩組中Bcl-2、Fas和嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子Eotaxin-2的mRNA的表達(dá)水平，應(yīng)用統(tǒng)計學(xué)的方法，對其相關(guān)性進(jìn)行分析。結(jié)果 Bcl-2的mRNA在實驗組的相對表達(dá)量RQ（4.28±0.79）與對照組的相對表達(dá)量RQ（1.27±0.31）比較有明顯的差異；Fas的mRNA在實驗組的相對表達(dá)量RQ（1.42±0.31）與對照組的相對表達(dá)量RQ（10.90±1.92）比較有明顯的差異；Eotaxin-2的mRNA在實驗組的相對表達(dá)量RQ（2.47±0.77）與對照組的相對表達(dá)量RQ（1.69±0.67）比較有明顯的差異；Bcl-2與Eotaxin-2二者呈正相關(guān)；Eotaxin-2與Fas二者無相關(guān)性；Bcl-2與Fas二者無相關(guān)性。結(jié)論Bcl-2、Fas和嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子Eotaxin-2在鼻息肉發(fā)生發(fā)展中起到了重要作用。

鼻息肉；Bcl-2；Fas；嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子Eotaxin-2

鼻息肉（NP）是耳鼻喉科的一種常見病及多發(fā)病，這種公認(rèn)的慢性炎癥是在多種致病因素作用下產(chǎn)生的[1]。主要表現(xiàn)為基質(zhì)黏膜水腫、黏膜下血管及間質(zhì)增生、大量嗜酸性粒細(xì)胞（EOS）浸潤、伴有漿細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞等炎性細(xì)胞浸潤，腺體呈囊性擴(kuò)張。基于這種改變，重力使水腫的黏膜下垂形成NP[2]。迄今為止NP的發(fā)病機(jī)制仍不清晰，但其復(fù)雜程度是公認(rèn)的[3]。但有研究表明在EOS浸潤、活化刺激鼻息肉形成的過程中，眾多的細(xì)胞因子也起到了重要作用[4]。根據(jù)EOS高濃度聚集導(dǎo)致的NP形成，這一常見的發(fā)病因素暨感染因素以及細(xì)胞凋亡及細(xì)胞因子的重要作用[5]，我們選擇了Bcl-2、Fas及與嗜酸性粒細(xì)胞趨化密切相關(guān)的趨化因子Eotaxin-2，這三種因子作為研究對象，通過研究Bcl-2、Fas及Eotaxin-2這三種因子在鼻息肉中的表達(dá)，探討三種因子在鼻息肉發(fā)病中的作用及其之間的相互作用對鼻息肉發(fā)生發(fā)展的影響。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 鼻息肉組織標(biāo)本來源于營口市中心醫(yī)院耳鼻喉科2015年12月～2017年5月耳鼻喉科行鼻內(nèi)鏡下鼻息肉手術(shù)切除的患者50例為實驗組,男28例,女22例,年齡21～68歲。選擇的對象要求排除變態(tài)反應(yīng)性鼻炎、支氣管哮喘病史及對阿司匹林的耐受不良。術(shù)前無皮質(zhì)類固醇激素、抗組胺及抗生素等相關(guān)治療。下鼻甲黏膜組織標(biāo)本來源于營口市中心醫(yī)院耳鼻喉科2015年12月～2017年5月耳鼻喉科慢性肥厚性鼻炎在鼻內(nèi)鏡下行下鼻甲縮容術(shù)即下鼻甲骨黏膜下切除術(shù)的患者30例為對照組,男16例,女14例，年齡27～56歲，實驗組鼻息肉組織及對照組正常下鼻甲黏膜組織均液氮凍存。

1.2 方法

1.2.1 引物的設(shè)計[6]在BLAST搜索針對Bcl-2、Fas、Eotaxin-2的基因序列，設(shè)計特異性引物后經(jīng)UCSC驗證，以βactin為內(nèi)參。引物合成由大連寶生物科技有限公司提供。

1.2.2 提取RNA[7-8]①1mLRNAiso Plus加入凍存碎裂的組織中，不斷吹打混勻。②當(dāng)不可見固體成分以后，室溫靜置5min后組織細(xì)胞充分裂解。③加入氯仿0.2mL，劇烈震蕩15 s，乳化后，靜置5min。④12 000 g，4 ℃離心15min,液體分三層,無色上層水相可分離RNA、中層和紅色底層有機(jī)相可分離DNA和蛋白，緩慢吸取無色上清。⑤加等量體積異丙醇顛倒混勻，沉淀RNA，冰上靜置10min。⑥12 000 g，4℃離心10min,棄上清，加1mL 75%乙醇，緩慢顛倒洗滌DNA。⑦12 000 g，4℃離心5min,棄上清，吸取乙醇，室溫空氣中干燥5min。⑧向干燥過的沉淀物加入100μLDEPC水溶解RNA沉淀。⑨RNA濃度檢測：酶標(biāo)儀檢測RNA濃度，每次上樣1 uL，重復(fù)3次，取平均值。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 選取SPSS 17.0統(tǒng)計學(xué)軟件，計量資料采用“x±s”表示,組間比較采用t檢驗,計數(shù)資料以率（%）表示,采用χ2檢驗；P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 實驗組和對照組中Bcl-2、Fas和嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子Eotaxin-2的mRNA的表達(dá) ①Bcl-2的mRNA在實驗組的表達(dá)RQ為（4.28±0.79），在對照組的表達(dá)RQ為（1.27±0.31），即Bcl-2在實驗組的表達(dá)要強(qiáng)于對照組，兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。②Fas的mRNA在實驗組的表達(dá)水平RQ為（1.42±0.31），在對照組的表達(dá)RQ為（10.90±1.92），即Fas在實驗組的表達(dá)要弱于對照組，兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。③Eotaxin-2的mRNA在實驗組的表達(dá)RQ為（2.47±0.77），在對照組的表達(dá)RQ為（1.69±0.67），即Eotaxin-2在實驗組的表達(dá)水平要高于對照組的表達(dá)水平，兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 實驗組和對照組中Bcl-2、Fas、Eotaxin-2的相對表達(dá)量

表1 實驗組和對照組中Bcl-2、Fas、Eotaxin-2的相對表達(dá)量

P值＜0.05＜0.05＜0.05項目Bcl-2 Fas Eotaxin-2實驗組（n=50）4.28±0.79 1.42±0.31 2.47±0.77對照組（n=30）1.27±0.31 10.90±1.92 1.69±0.67 t值8.92 5.32 5.61

2.2 實驗組Bcl-2、Fas和嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子Eotaxin-2的mRNA相對表達(dá)量之間的相關(guān)性分析 實驗組中三個因子的mRNA相對表達(dá)量統(tǒng)計學(xué)相關(guān)性分析結(jié)果如下：Bcl-2與Eotaxin-2（r=0.581，P＜0.05）；Eotaxin-2 與 Fas（r=-0.047，P＞0.05）；Bcl-2 與 Fas（r=-0.174，P＞0.05）；提示Bcl-2與Eotaxin-2表達(dá)呈正相關(guān)，而Fas和Bcl-2及Eotaxin-2的表達(dá)無相關(guān)性。

3 討論

3.1 Bcl-2與鼻息肉的關(guān)系 Bcl-2及其相關(guān)蛋白在細(xì)胞凋亡這一過程的調(diào)控中扮演著重要的角色[9]。本文通過RTPCR的檢測方法研究50例鼻息肉組織（實驗組）及30例下鼻甲黏膜組織（對照組)中Bcl-2mRNA的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)其在是實驗組的相對表達(dá)量高于對照組，實驗組RQ（4.28±0.79），對照組RQ（1.27±0.31），差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。本實驗結(jié)果同以往實驗結(jié)果一致[10]，即在鼻息肉組織中表達(dá)增多，Bcl-2有抑制凋亡的作用，在鼻息肉形成的過程中起到了促進(jìn)其發(fā)生發(fā)展的作用。

3.2 Fas與鼻息肉的關(guān)系 本文通過RT-PCR的方法得出其作用的結(jié)論：Fas在實驗組中的表達(dá)要低于對照組，其在NP中的表達(dá)RQ（1.42±0.31）與下鼻甲黏膜組織中表達(dá)RQ（10.90±1.92）比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。即在鼻息肉組織中Fas呈現(xiàn)低表達(dá)，同時在下鼻甲黏膜組織中高表達(dá)。鼻息肉上皮細(xì)胞因此而過度增殖，導(dǎo)致鼻息肉體積的不斷增大，間質(zhì)中出現(xiàn)新腺體的形成。因此Fas是NP形成中的一個重要的細(xì)胞因子。

本實驗結(jié)果提示：Eotaxin-2在鼻息肉組織中的表達(dá)量RQ（2.47±0.77），在下鼻甲黏膜組織中的表達(dá)量RQ（1.69±0.67）比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），即Eotaxin-2在鼻息肉中含量要高于其在下鼻甲黏膜組織中的含量，兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)果同眾多的研究結(jié)論一致[11]，即鼻息肉組織中Eotaxin-2高表達(dá)，同時在下鼻甲組織中的低表達(dá)相符。進(jìn)一步說明了Eotaxin-2與在NP形成中的不可替代的作用。

三種因子Bcl-2、Fas及Eotaxin-2，在鼻息肉的發(fā)生發(fā)展中，抑制凋亡基因Bcl-2含量上調(diào)，誘導(dǎo)凋亡基因Fas含量下調(diào)，而可活化及促使嗜酸性粒細(xì)胞募集及原位激活的趨化因子Eotaxin-2含量上調(diào)，且Bcl-2和Eotaxin-2存在相關(guān)性，在兩者共同的作用下從不同的方面促進(jìn)了NP的生長。

綜上所述，對于鼻息肉的發(fā)生發(fā)展機(jī)制的解釋仍趨于為多因素及多途徑的作用結(jié)果。在NP形成的微環(huán)境中，EOS及其相關(guān)的眾多的細(xì)胞因子扮演者著重要的角色。Bcl-2、Fas及嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子Eotaxin-2這三個因子在鼻息肉中的發(fā)生發(fā)展中起到了重要的作用。

[1] 鄭霞,鄧丹立,楊輝紅.嗜酸性粒細(xì)胞增多與臨床[J].實用醫(yī)技雜志,2008,15(5):654-656.

[2] 莊夏衍.鼻息肉組織中各種浸潤細(xì)胞的意義及相互間的作用[J].山東大學(xué)耳鼻喉眼學(xué)報,2010,24(2):47-54.

[3] 吳群,俞善昌,李云珠,等.多聚肌苷酸在支氣管哮喘防治中的價值[J].臨床兒科雜志,2013,31(1):55-59.

[4] 竇毅,楊旭東,黃秋生.H3受體激動劑對變應(yīng)性鼻炎豚鼠鼻黏膜嗜酸性粒細(xì)胞浸潤及嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子含量的影響[J].江蘇大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版),2014,24(6):474-477.

[5] Komiya A,Nagase H,Yamada H,et al.Concer ted expression of eotaxin-1,eotaxin-2,and eotaxin-3 in human bronchial epithelial cel ls[J].Cel lular Immunology,2003,225(2):91-100.

[6] 王顯紅,龔樹生.嗜酸粒細(xì)胞及其趨化因子在鼻息肉發(fā)病機(jī)制中的作用研究進(jìn)展[J].咸寧學(xué)院學(xué)報(醫(yī)學(xué)版),2008(2):56.

[7] 張念武,牟皿磊,袁海.Fas及Bcl-2在鼻息肉組織中的表達(dá)及意義[J].山東大學(xué)耳鼻喉眼學(xué)報,2006,20(3):230-232.

[8] HAN F,Long W,Jing C,et al.莪術(shù)醇對人卵巢癌SKOV3細(xì)胞株JAK2/STAT3信號通路蛋白表達(dá)的影響[J].國際中西醫(yī)結(jié)合雜志,2013,1(1):11.

[9] 李聰.鼻腔局部應(yīng)用布地奈德對鼻息肉中Fos蛋白(c-fos)和Myc蛋白(c-myc)表達(dá)影響的臨床評估[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué),2014,20(29):51.

[10]董震,關(guān)桂梅,常萬龍.鼻息肉組織中細(xì)胞增殖與凋亡相關(guān)基因蛋白的表達(dá)及意義[J].中華耳鼻咽喉科雜志,2000,35(6):429-431.

[11]賴金平,李遠(yuǎn)斌.抑凋亡基因Bcl—X在鼻息肉中表達(dá)的初步研究[J].中國耳鼻咽喉顱底外科雜志,1998,4(4):230-232.

10.3969/j.issn.1009-4393.2017.32.042