陳東科，孫長(zhǎng)貴

(1.北京醫(yī)院檢驗(yàn)科，北京 100730；2.中國(guó)人民解放軍第一一七醫(yī)院檢驗(yàn)科，杭州 310013)

·專家論壇·

微生物圖片拍攝技術(shù)的應(yīng)用探討

陳東科1，孫長(zhǎng)貴2

(1.北京醫(yī)院檢驗(yàn)科，北京 100730；2.中國(guó)人民解放軍第一一七醫(yī)院檢驗(yàn)科，杭州 310013)

微生物形態(tài)學(xué)圖片在微生物鑒定、臨床涂片報(bào)告(圖文報(bào)告)、鑒定儀器的專家系統(tǒng)、室間質(zhì)量評(píng)價(jià)、教學(xué)及學(xué)術(shù)交流、資料保存等方面十分重要，因此，拍攝微生物圖片是臨床微生物檢驗(yàn)人員需要掌握的技能之一。該文介紹了拍攝微生物圖片需要運(yùn)用到的攝影知識(shí)，拍攝前對(duì)制片、染色和培養(yǎng)的要求，手工或輔助拍攝裝置，探討拍攝不染色和染色標(biāo)本鏡下形態(tài)、感染部位、菌落形態(tài)、藥物敏感性試驗(yàn)的圖片時(shí)對(duì)構(gòu)圖、背景、光線、比例尺等的運(yùn)用技巧和注意事項(xiàng)，指出拍攝圖片的清晰度與拍攝器材的像素、拍攝穩(wěn)定性、光線等有直接關(guān)系，鏡下圖片的拍攝效果用輔助拍攝裝置的比手持拍攝效果好，菌落拍攝除設(shè)備外還與拍攝技巧有關(guān)。

微生物；形態(tài)學(xué)；圖片；攝影技術(shù)

形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)對(duì)微生物鑒定具有導(dǎo)航的作用，正確的形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)結(jié)果是準(zhǔn)確鑒定細(xì)菌的堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)[1]。作為基本功的形態(tài)學(xué)知識(shí)，是每一位微生物檢驗(yàn)技術(shù)人員必須掌握的技能。在實(shí)際工作中微生物形態(tài)學(xué)圖片的用途非常廣泛，如臨床涂片報(bào)告(圖文報(bào)告)[2]、鑒定儀器的專家系統(tǒng)、室間質(zhì)量評(píng)價(jià)[3]、教學(xué)、資料保存、發(fā)表論文、編輯圖譜[4]等都需要清晰的圖片。因此，學(xué)會(huì)拍攝微生物圖片也成為臨床微生物檢驗(yàn)人員需要掌握的技能之一。本文介紹微生物鏡下及菌落形態(tài)的拍攝技巧，探討臨床微生物檢驗(yàn)圖片拍攝有關(guān)的技術(shù)、輔助設(shè)備及拍攝技巧，以期指導(dǎo)微生物檢驗(yàn)工作者拍出滿意的圖片，可以滿足各方面的應(yīng)用需求。

1 拍攝前的準(zhǔn)備工作

1.1涂片 要拍出病原體在標(biāo)本中的生存狀態(tài)、形態(tài)特征及染色特性，制片十分重要。無(wú)論是不染色片和染色片，制片的基本原則是盡可能保持標(biāo)本的結(jié)構(gòu)不被破壞，單層細(xì)胞厚度。片子染色后整片著色均勻一致、細(xì)胞核與細(xì)胞漿清晰、菌體是被吞噬或是黏附可辨，這是圖片拍攝對(duì)涂片的基本要求。

1.2染色 按照染色操作要求進(jìn)行，并以質(zhì)控片達(dá)標(biāo)在控為準(zhǔn)。自動(dòng)染片機(jī)的使用應(yīng)根據(jù)制片的厚薄采用不同的程序進(jìn)行染色，同時(shí)用質(zhì)控片進(jìn)行質(zhì)控。革蘭染色質(zhì)控片制備：挑取經(jīng)過(guò)夜培養(yǎng)的金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌(推薦用ATCC標(biāo)準(zhǔn)菌株)，各配制成2麥?zhǔn)蠞岫葐挝粷舛鹊木?，兩菌液混勻后挑取一接種環(huán)涂成直徑1.5 cm的菌斑，過(guò)火焰熱固定后備用。其他質(zhì)控片可選相應(yīng)的陽(yáng)性菌株或標(biāo)本經(jīng)滅活后制備。

1.3菌株 對(duì)細(xì)菌(真菌)形態(tài)學(xué)的正確描述依賴于方法、培養(yǎng)基、培養(yǎng)時(shí)間、染色試劑等，培養(yǎng)基和培養(yǎng)時(shí)間不同會(huì)影響細(xì)菌的形態(tài)。觀察細(xì)菌(真菌)的典型形態(tài)，應(yīng)該將細(xì)菌(真菌)接種在該菌最適生長(zhǎng)的培養(yǎng)基上、放入最適生長(zhǎng)環(huán)境中(包括溫度、濕度和所需氣體條件等)進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)時(shí)間應(yīng)視該菌的生長(zhǎng)速度而定，大部分常見(jiàn)的細(xì)菌以培養(yǎng)24 h為宜，有些細(xì)菌(真菌)需要更長(zhǎng)時(shí)間的培養(yǎng)才能顯現(xiàn)出典型的菌落特征。

1.4顯微鏡 需要安裝圖像采集器或照相機(jī)的用戶，必須準(zhǔn)備三目顯微鏡。

1.5攝影器材 理想圖片的獲得必須有適合的攝影器材。隨著數(shù)碼時(shí)代的到來(lái)，各式各樣的專業(yè)攝影設(shè)備應(yīng)運(yùn)而生，品種繁多。各實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)室條件和經(jīng)濟(jì)實(shí)力購(gòu)買(mǎi)適當(dāng)?shù)臄z影器材，最低配置應(yīng)該至少能拍出達(dá)到打印圖文報(bào)告和出版要求的圖片。細(xì)菌拍攝用顯微鏡電子圖像采集系統(tǒng)應(yīng)配置像素不低于1 000萬(wàn)的電子攝像頭。在實(shí)際工作中，用手機(jī)拍攝圖片經(jīng)濟(jì)、操作簡(jiǎn)單、方便交流，對(duì)基層單位是不錯(cuò)的選擇。但是用手機(jī)拍攝顯微鏡下圖片時(shí)遇到的最大問(wèn)題是手持拍攝不穩(wěn)定、抓屏困難、對(duì)焦不準(zhǔn)，很難拍到符合要求的圖片。手持拍攝需要一定的技巧和訓(xùn)練，巧妙尋找支撐點(diǎn)，掌握要領(lǐng)后也可以拍出不錯(cuò)的圖片(見(jiàn)圖1)。手機(jī)拍攝輔助器從簡(jiǎn)易的紙筒輔助拍攝器(見(jiàn)圖2)發(fā)展到固定式的輔助拍攝器，如DONGKE LENs輔助拍攝系統(tǒng)(見(jiàn)圖3)。

圖1 用手機(jī)手持拍攝技巧

圖2 紙筒輔助拍攝器

1.6攝影基本知識(shí) 曝光、對(duì)焦和構(gòu)圖是攝影的三要素。以下列出了攝影必須掌握的一些基本知識(shí)，更為深入的知識(shí)可參閱相關(guān)專業(yè)書(shū)籍[5]。

1.6.1曝光四要素 光線、光圈、快門(mén)和感光度。光線越強(qiáng)照片越明亮，光圈越大越明亮，快門(mén)越慢越明亮，感光度越高越明亮。

1.6.2光線3個(gè)特性 強(qiáng)度、方向和色溫。強(qiáng)度是指亮不亮，方向是指光從哪里來(lái)，色溫是指光源發(fā)射光的顏色與黑體在某一溫度下輻射光色相同時(shí)，黑體的溫度稱為該光源的色溫。

圖3 固定式輔助拍攝器

1.6.3光線的3個(gè)類型 自然光、場(chǎng)景光和人造光。自然光光譜范圍廣，色彩還原最佳。場(chǎng)景光往往指拍攝現(xiàn)場(chǎng)所有可用的光源發(fā)出的光，光源復(fù)雜、強(qiáng)度較弱。人造光是指由人工設(shè)計(jì)制造的儀器、設(shè)備產(chǎn)生的光，如日光燈的光、激光等，常用的人造光設(shè)備如閃光燈。

1.6.4景深三要素 光圈、焦距和對(duì)焦距離。光圈越大景深越淺，焦距越長(zhǎng)景深越淺，對(duì)焦距離越近景深越淺(背景越模糊)。

1.6.5感光度 感光度是指膠片或感光器對(duì)光的靈敏程度，用ISO表示。感光度越高，對(duì)光線越敏感。高感光度下的圖像細(xì)節(jié)損失造成了照片不清晰。相反，感光度低，圖像噪點(diǎn)減少，畫(huà)質(zhì)細(xì)膩。

1.6.6對(duì)焦 是指通過(guò)改變鏡頭與感光器之間的距離，讓某一個(gè)特定位置的物體通過(guò)鏡頭的成像焦點(diǎn)正好落在感光器之上，得出最清晰的影像。對(duì)焦不準(zhǔn)確，則拍攝的圖片不清晰。

1.6.7構(gòu)圖 構(gòu)圖是指如何把人、景、物安排在畫(huà)面當(dāng)中以獲得最佳布局的方法。構(gòu)圖的目的是對(duì)拍攝的主題加以強(qiáng)調(diào)、突出。

2 臨床微生物圖片拍攝方法

臨床微生物檢驗(yàn)圖片拍攝內(nèi)容主要包括患者的感染部位、標(biāo)本性狀、病原體(寄生蟲(chóng)等)、標(biāo)本涂片鏡檢結(jié)果(染色或不染色)、菌落特征、純菌涂片鏡檢結(jié)果(包括菌體的特殊結(jié)構(gòu)等)、生化反應(yīng)及輔助試驗(yàn)結(jié)果、藥敏試驗(yàn)及耐藥機(jī)制檢測(cè)結(jié)果等。對(duì)于不同的拍攝對(duì)象，要采用不同的拍攝方法進(jìn)行拍攝。拍攝技巧的掌握與應(yīng)用可以大幅度提高圖片的質(zhì)量。高質(zhì)量的圖片不僅是把拍攝對(duì)象拍清楚，還要求能表現(xiàn)出被拍攝對(duì)象細(xì)微、典型的特征，這對(duì)菌株間的鑒別至關(guān)重要。

2.1感染部位拍攝 有些病原體感染人體后會(huì)產(chǎn)生特殊的體征，如麻風(fēng)、皮膚炭疽、猩紅熱、葡萄球菌皮膚燙傷樣綜合征、麻疹、干性或氣性壞疽、真菌性角膜炎、軟下疳、梅毒、鵝口瘡、白喉、破傷風(fēng)、糠秕疹(由馬拉色菌引起)、孢子絲菌病(“玫瑰手”)、黃癬(由許蘭毛癬菌引起)、黑癬(由紫色毛癬菌引起)、疊瓦癬(由同心性毛癬菌引起)、足腫病、囊蟲(chóng)病、血吸蟲(chóng)病和絲蟲(chóng)病等，對(duì)于鑒別診斷具有指導(dǎo)意義。因此對(duì)于感染部位的拍攝顯得十分重要。

拍攝前需要對(duì)感染部位進(jìn)行評(píng)估，選擇最具有代表性的部位進(jìn)行拍攝。要求對(duì)焦準(zhǔn)確，光線充足。最好是自然光，光線不足時(shí)可采用輔助光，如臺(tái)燈等可移動(dòng)燈具，或是使用閃光燈，同時(shí)注意距離和角度，避免曝光過(guò)度。

2.2標(biāo)本涂片鏡檢結(jié)果拍攝 直接涂片鏡檢對(duì)于感染性疾病病原的診斷有重要的意義，是一種快速、簡(jiǎn)便有效的微生物檢驗(yàn)手段，可為臨床醫(yī)生早期診斷、合理的經(jīng)驗(yàn)選用抗菌藥物提供參考依據(jù)。

2.2.1不染色標(biāo)本拍攝 不染色標(biāo)本涂片通常采用直接壓片法制片，一般只在低倍或高倍鏡下觀察，很少使用油鏡觀察。將顯微鏡的聚光器下調(diào)到適當(dāng)位置，以獲得最佳亮度，此時(shí)被拍攝對(duì)象的輪廓及層次清晰分明。(1)動(dòng)態(tài)視頻拍攝：適用于活體標(biāo)本的直接鏡檢拍攝，如細(xì)菌運(yùn)動(dòng)方式、阿米巴滋養(yǎng)體、藍(lán)氏賈第鞭毛蟲(chóng)、滴蟲(chóng)等。要求標(biāo)本新鮮(必要時(shí)保溫)，拍攝要穩(wěn)(建議固定拍攝)，實(shí)時(shí)調(diào)焦(即跟蹤拍攝)。(2)圖片拍攝：由于沒(méi)有進(jìn)行染色，病原體與背景的色差不大，需要調(diào)節(jié)聚光器，以突出病原體(見(jiàn)圖4)。拍攝寄生蟲(chóng)等較大個(gè)體時(shí)需要注意細(xì)節(jié)，寄生蟲(chóng)相對(duì)于真菌和細(xì)菌個(gè)體較大，個(gè)體長(zhǎng)度大于10 mm可直接用微距鏡頭進(jìn)行拍攝，但細(xì)節(jié)表現(xiàn)不會(huì)太好，建議在顯微鏡下拍攝細(xì)節(jié)部分。由于個(gè)體大、厚度高，要想用一個(gè)鏡頭拍攝完整蟲(chóng)體幾乎不可能，只能分層拍攝，或是將蟲(chóng)體壓扁后進(jìn)行拍攝。要拍攝蟲(chóng)體器官，必須進(jìn)行染色。寄生蟲(chóng)拍攝的重點(diǎn)在口器、尾器、交合器和臟器的細(xì)節(jié)，蟲(chóng)卵拍攝也同樣要注重卵內(nèi)細(xì)節(jié)，如鉤蟲(chóng)卵的卵膜和齒、鞭蟲(chóng)卵的核、蛔蟲(chóng)卵的膜等。

圖4 痰液KOH壓片見(jiàn)煙曲霉菌絲(×400)

2.2.2染色標(biāo)本拍攝 拍攝前，先對(duì)整張涂片進(jìn)行觀察，選擇最具代表性的視野進(jìn)行拍攝，每個(gè)視野可調(diào)節(jié)不同焦距面進(jìn)行拍攝，在不同層面上反映出病原體在標(biāo)本中的狀態(tài)。對(duì)大小不同的拍攝對(duì)象應(yīng)選用不同的物鏡頭進(jìn)行拍攝，盡量拍出其完整性(如諾卡菌革蘭染色選用100倍物鏡頭，煙曲霉革蘭染色選用20倍物鏡頭，見(jiàn)圖5)。

注：A，諾卡菌(×1 000)；B，煙曲霉(×200)。

圖5 痰涂片革蘭染色鏡檢效果

2.3菌落拍攝 細(xì)菌和真菌在固體培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)形成菌落。對(duì)菌落進(jìn)行描述應(yīng)包括菌落大小、形狀、高度、邊緣、表面狀態(tài)、密度(透明度)、菌落內(nèi)部結(jié)構(gòu)、顏色、光澤以及與培養(yǎng)基表面的黏附程度，還應(yīng)包括菌落的溶血和色素產(chǎn)生情況等特性。根據(jù)菌落特征可對(duì)細(xì)菌和真菌進(jìn)行初步鑒定。有些特征是某些細(xì)菌和真菌所特有的，具有屬或種的鑒別價(jià)值，如肺炎鏈球菌在綿羊血瓊脂平板上的臍窩樣菌落、伴放線聚集桿菌菌落特殊的內(nèi)部結(jié)構(gòu)、侵蝕艾肯菌的斗笠樣菌落、斯氏假單胞菌皺紋樣菌落、變形桿菌遷徙樣菌落，酵母、酵母樣真菌、絲狀真菌等。見(jiàn)圖6。

觀察細(xì)菌和真菌色素的產(chǎn)生，最好在沒(méi)有顏色的培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，如營(yíng)養(yǎng)瓊脂、MHA、PDA、察氏瓊脂等，以減少背景顏色對(duì)真實(shí)顏色的干擾。拍攝前的構(gòu)思很重要，要根據(jù)不同菌落特性選擇不同的拍攝方法，要求拍出菌落的主要特征和局部細(xì)節(jié)，拍出的菌落不變形，菌落顏色保真，標(biāo)注放大倍數(shù)。對(duì)菌落局部細(xì)節(jié)的拍攝可能要借助放大鏡或顯微鏡來(lái)完成，應(yīng)用輔助光是必須的，最好使用專業(yè)光源，也可使用臺(tái)燈，但要注意顏色的保真，可適時(shí)調(diào)節(jié)白平衡(可設(shè)置成自動(dòng)調(diào)節(jié))。平板放置的平臺(tái)建議選擇合適的背景顏色，基本原則是深色平板(如血平板、巧克力平板)用淺色或白色背景；淺色平板選擇深色背景，如營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板或SDA平板等應(yīng)該選擇黑色或藍(lán)色背景。拍攝大菌落(菌落直徑>1 mm)時(shí)可拍全平板，拍攝小菌落(菌落直徑<1 mm)時(shí)最好拍攝菌落分布較均勻的局部。拍攝菌落特征時(shí)可針對(duì)單個(gè)菌落進(jìn)行拍攝，必要時(shí)可借助放大鏡或在顯微鏡下拍攝。拍攝菌落內(nèi)部結(jié)構(gòu)時(shí)需要采用逆光(透射光)進(jìn)行拍攝。

注：A，肺炎鏈球菌臍窩狀菌落；B,諾卡菌的氣生菌絲；C，矮小芽胞桿菌4 ℃生長(zhǎng)菌落；D，阿薩希毛孢子菌腦回樣菌落。

圖6 菌落形態(tài)

菌落拍攝難度要大于鏡下拍攝，尤其是那些小菌落、凹陷菌落、擴(kuò)散生長(zhǎng)菌落、絨毛樣菌落等，自動(dòng)拍攝很難準(zhǔn)確對(duì)焦，拍攝時(shí)需要運(yùn)用到很多攝影技術(shù)與技巧，加以長(zhǎng)期的訓(xùn)練才能拍攝自如，相應(yīng)的拍攝裝置也應(yīng)運(yùn)而生。開(kāi)放式菌落拍攝只需有足夠的光線就可以拍攝，其缺點(diǎn)是無(wú)法控制污染;半封閉式菌落拍攝裝置，可控制光源，拍攝完成后只需進(jìn)行局部消毒處理，但也無(wú)法完全避免污染；封閉式菌落拍攝裝置完全符合生物安全需要，不僅有封閉艙門(mén)、內(nèi)置可調(diào)節(jié)燈光、防反射光板及拍攝角度調(diào)節(jié)板，兼容手機(jī)、相機(jī)和圖像采集器，而且內(nèi)設(shè)紫外燈管，可隨時(shí)消毒，見(jiàn)圖7。

注：A，開(kāi)放式菌落拍攝裝置；B，半封閉式菌落拍攝裝置；C，封閉式菌落拍攝裝置。

圖7 菌落拍攝裝置

2.4純菌體鏡下形態(tài)拍攝

2.4.1細(xì)菌鏡下拍攝 要注意選擇菌量適中、染色良好、具有典型形態(tài)特征的視野進(jìn)行，對(duì)菌體特殊結(jié)構(gòu)的拍攝要求充分體現(xiàn)出具體特征，如齲齒羅氏菌菌體末端膨大(見(jiàn)圖8)、丹毒絲菌菌體呈長(zhǎng)鏈狀排列、芽胞的形狀及在菌體中的位置及染色特性等(建議在相差顯微鏡下直接拍攝芽胞，其效果好于芽胞染色)、細(xì)菌莢膜的厚度及著色情況、鞭毛的位置和數(shù)量等(細(xì)菌的鞭毛很細(xì)，非?？简?yàn)拍攝水平，要認(rèn)真對(duì)焦，否則很難拍攝成功)。

圖8 齲齒羅氏菌革蘭染色(×1 000)

2.4.2真菌鏡下拍攝 真菌鏡下拍攝也分為不染色和染色2種情況。不染色主要是拍攝真菌自然的生長(zhǎng)狀態(tài)，如對(duì)菌落的直接鏡下拍攝(見(jiàn)圖9)、對(duì)小培養(yǎng)的直接鏡下拍攝及對(duì)假絲酵母菌血清芽管試驗(yàn)的鏡下拍攝等。染色標(biāo)本主要是對(duì)絲狀真菌乳酸酚棉藍(lán)染色后的鏡下形態(tài)和對(duì)非絲狀真菌的革蘭染色鏡下形態(tài)拍攝。拍攝時(shí)最好選擇各種典型特征匯聚在一起或具有特征性的視野進(jìn)行拍攝(見(jiàn)圖10)。

圖9 不染色菌體拍攝(黑曲霉，×100)

圖10 互隔鏈格孢乳酸酚棉藍(lán)染色(×400)

由于真菌個(gè)體較大，拍攝時(shí)要注意景深，選擇合適的物鏡頭很重要，不同焦距面都要拍下來(lái)(見(jiàn)圖11)，能夠清晰地顯示菌絲、足細(xì)胞、孢子梗、囊托、分生孢子等。要拍攝出絲狀真菌的典型生長(zhǎng)狀態(tài)，最好是選擇小培養(yǎng)制片方法。

圖11 不同焦距連續(xù)拍攝(根霉，×100)

2.5生化反應(yīng)及輔助試驗(yàn)結(jié)果的拍攝 生化反應(yīng)及輔助試驗(yàn)結(jié)果拍攝并不比菌落的拍攝容易，根據(jù)不同的試驗(yàn)結(jié)果需要使用不同的拍攝技術(shù)。比如拍CAMP和半固體動(dòng)力試驗(yàn)結(jié)果時(shí)選用逆光的效果最佳，拍攝熒光素檢測(cè)結(jié)果和紫外線吸收試驗(yàn)結(jié)果時(shí)要用紫外光線等。

2.6藥敏試驗(yàn)及耐藥機(jī)制檢測(cè)結(jié)果的拍攝 拍攝需要用肉眼判斷結(jié)果的藥敏試驗(yàn)及耐藥機(jī)制檢測(cè)結(jié)果時(shí)，必須能夠在圖片中如實(shí)反映出結(jié)果的細(xì)節(jié)部分，使讀者能夠根據(jù)圖片也能準(zhǔn)確判定結(jié)果。如應(yīng)注意藥敏試驗(yàn)結(jié)果中的弱生長(zhǎng)現(xiàn)象，耐藥機(jī)制檢測(cè)試驗(yàn)結(jié)果中的抑菌圈邊緣試驗(yàn)(見(jiàn)圖12)、協(xié)同或抑制試驗(yàn)等。

注：A，沙灘樣；B，懸崖樣。

圖12 抑制圈邊緣試驗(yàn)結(jié)果

3 臨床微生物圖片拍攝技巧

3.1色彩還原準(zhǔn)確 色彩還原準(zhǔn)確指拍攝的彩色圖片的色彩，大體上和原景物的色彩相一致。影響色彩還原的因素有相機(jī)的性能、白平衡的設(shè)置、攝影鏡頭的質(zhì)量、光線的色溫等，自然光能最好地還原圖像的真實(shí)色彩。

3.2比例尺 要準(zhǔn)確地反映被拍攝物體的真實(shí)大小，最簡(jiǎn)單有效的辦法就是在圖片上標(biāo)明比例尺。有些專用的相機(jī)及顯微鏡配有比例尺，但一般的設(shè)備不具備，也可通過(guò)目鏡測(cè)微尺加以標(biāo)示(見(jiàn)圖13)。這就要求拍攝者在拍攝時(shí)注意記錄拍攝時(shí)的放大倍數(shù)，當(dāng)然不只是物鏡乘以目鏡放大倍數(shù)這么簡(jiǎn)單，實(shí)際上還需要注意相機(jī)變焦及圖片后處理時(shí)的裁剪等因素，總之要盡可能準(zhǔn)確，并在圖片中注明放大倍數(shù)。

圖13 目鏡測(cè)微尺

3.3光線運(yùn)用 攝影就是光的藝術(shù)，不會(huì)用光是拍不出好的作品。尤其是對(duì)菌落的拍攝，應(yīng)該根據(jù)菌落實(shí)際的特征以及拍攝者要反映出的效果來(lái)選擇用光，側(cè)光(見(jiàn)圖14)和逆光(見(jiàn)圖15)也是常用的手段，運(yùn)用好能拍出極佳的效果。

注：A，青霉菌黏液珠；B，芽胞桿菌。

圖14 側(cè)光拍攝效果

注：A,反射光拍攝；B，透射光(逆光)拍攝。

圖15 伴放線聚集桿菌菌落拍攝效果

4 臨床微生物檢驗(yàn)圖片拍攝注意事項(xiàng)

4.1對(duì)拍攝者的健康要求 拍攝者的體檢結(jié)果應(yīng)符合醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)從業(yè)人員的體檢標(biāo)準(zhǔn)[6]，色盲、色弱者不適合進(jìn)行彩色圖片的拍攝工作。

4.2保證圖片質(zhì)量 一張合格的圖片應(yīng)該是圖像清晰、色彩逼真、主題突出、背景干凈、像素符合要求。圖像清晰主要是要求對(duì)焦和曝光準(zhǔn)確、防顫抖，色彩逼真要求拍攝輔助光接近自然光、適時(shí)調(diào)準(zhǔn)白平衡，主題突出就是要把最具典型特征的部位放在醒目位置，必要時(shí)加箭頭指示。拍攝菌落和其他輔助試驗(yàn)時(shí)是要注意保持背景干凈，避免出現(xiàn)窗戶、門(mén)框、桌椅等，平板背面盡量不要用記號(hào)筆寫(xiě)字，否則影響觀察菌落的顏色、溶血等特征。

4.3生物安全 所有拍攝過(guò)程均要符合實(shí)驗(yàn)室生物安全要求。拍攝菌落最好在生物安全柜中進(jìn)行，攝影器材不要帶出實(shí)驗(yàn)室，圖片可通過(guò)實(shí)驗(yàn)室電腦進(jìn)行傳輸。如果使用手機(jī)進(jìn)行拍攝，最好是實(shí)驗(yàn)室配置的專用手機(jī)，個(gè)人的手機(jī)嚴(yán)禁帶入實(shí)驗(yàn)室。

4.4興趣培養(yǎng)與技能訓(xùn)練 建議拍攝者日常多在自然狀態(tài)下進(jìn)行拍攝訓(xùn)練，尤其是對(duì)微距拍攝的訓(xùn)練，如拍攝花、鳥(niǎo)、魚(yú)、蟲(chóng)等小的景物，既可培養(yǎng)興趣，又可以將實(shí)戰(zhàn)技巧運(yùn)用于實(shí)際工作中來(lái)，拍出用于日常工作、學(xué)習(xí)交流、發(fā)表論文等更好的圖片。

[1]陳東科. 加強(qiáng)形態(tài)學(xué)檢查提高細(xì)菌鑒定的準(zhǔn)確性[J]. 實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué), 2012, 30(5): 419-421.

[2]中國(guó)醫(yī)師協(xié)會(huì)檢驗(yàn)醫(yī)師分會(huì)感染性疾病檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)專家委員會(huì). 臨床微生物檢驗(yàn)診斷報(bào)告模式專家共識(shí)[J]. 中華醫(yī)學(xué)雜志，2016，96(12)：937-939.

[3]魏蓮花，鄒鳳梅，劉剛，等. 臨床微生物形態(tài)學(xué)及特殊耐藥性檢測(cè)室間質(zhì)量評(píng)價(jià)體系的建立及應(yīng)用[J]. 臨床檢驗(yàn)雜志，2017,35(7)：538-541.

[4]陳東科，孫長(zhǎng)貴．實(shí)用臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)與圖譜[M]. 第1版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2011.

[5]美國(guó)紐約攝影學(xué)院. 美國(guó)紐約攝影學(xué)院攝影教材[M]. 北京：中國(guó)攝影出版社，2010.

[6]中國(guó)合格評(píng)定國(guó)家認(rèn)可委員會(huì). CNAS-CL42:醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則在臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域的應(yīng)用說(shuō)明[S/OL]. 2012：3(2015-11-11)[2017-09-05]. https://www.cnas.org.cn/images/rkgf/sysrk/rkyyzz/2015/12/21/64DBFD05D574C2DD479FDB6E82F75FAF.pdf.

2017-05-15)

(本文編輯：劉群)

10.13602/j.cnki.jcls.2017.10.03

陳東科，1961年生，男，副主任技師，擅長(zhǎng)微生物形態(tài)學(xué)檢查與圖片拍攝。

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