陳杰 虞偉星 馬文勇 范曉松 何非平 夏未杰 李波軍

CCL5在膀胱癌中的表達及臨床意義

陳杰 虞偉星 馬文勇 范曉松 何非平 夏未杰 李波軍

目的檢測趨化因子配體5（CCL5）在膀胱癌中的表達情況，探討CCL5在膀胱癌中的臨床意義。方法選擇136例膀胱移行細胞癌患者標本和20例正常膀胱組織標本，采用免疫組化SP法檢測膀胱癌和正常組織中CCL5的表達，并結合臨床資料進行分析。結果正常膀胱組織中CCL5的表達陽性率明顯低于膀胱癌組織，膀胱癌組織中隨著病理分級和分期的增加，CCL5的表達陽性率逐漸增高。CCL5在低級別與高級別膀胱癌中高表達陽性率分別為27.3%和55.6%，差異有統(tǒng)計學意義（P=0.001）。腫瘤分期Ta～T1和T2～T4CCL5高表達陽性率分別為38.3%和57.1%，差異有統(tǒng)計學意義（P=0.041）。本組患者隨訪7～117個月，Kaplan-Merier分析CCL5高表達陽性率患者的術后生存時間明顯降低（P＜0.01）；多因素研究分析，CCL5的表達是影響患者術后總生存期的獨立預后因素（P=0.038）。結論CCL5的表達陽性率在膀胱癌組織中明顯高于正常組織，檢測CCL5的表達有助于膀胱癌的診斷及預后評估。

膀胱癌趨化因子配體5免疫組化診斷預后

腫瘤的生長、侵襲和轉(zhuǎn)移依賴于宿主細胞和腫瘤復雜的相互作用，而趨化因子在腫瘤與宿主細胞的相互作用中扮演了重要的角色，趨化因子家族包含大量具有趨化作用的低分子量蛋白，以趨化粒細胞遷移到炎癥部位。趨化因子家族按結構分為四大類：C、CC、CXC、CX3C，至今已鑒別出50多種不同的趨化因子，大部分是CC和CXC家族成員。趨化因子配體5（CCL5）屬于CC類趨化因子家族，其受體有CCR1、CCR3和CCR5[1]。CCL5在腫瘤和炎性疾病中發(fā)揮重要作用，最近的研究發(fā)現(xiàn)乳腺癌患者中CCL5的表達與疾病進展直接相關；另外，在宮頸癌、卵巢癌、前列腺癌、胰腺癌、肺癌和黑色素瘤患者的組織和血清中CCL5的表達與疾病進展具有相關性[2-3]。目前對CCL5的表達與膀胱癌的關系研究極少。筆者對比了CCL5在膀胱癌組織與正常膀胱組織中的表達，并對膀胱癌患者CCL5的表達與膀胱癌的病理因素及生物學行為之間的關系進行分析，旨在為臨床判斷膀胱癌分期及疾病進展提供重要的分子生物學指標。

1 對象和方法

1.1 對象選取我院泌尿外科2005年1至12月有完整隨訪資料的136例膀胱移行細胞癌手術切除的病變膀胱組織和20例同期因其他疾病而手術患者的正常膀胱組織，均經(jīng)病理檢查證實。136例膀胱癌患者中男100例，女36例，年齡41～80歲，中位年齡70歲；20例同期手術患者中男15例，女5例，年齡48～76歲，中位年齡65歲。收集患者的資料包括腫瘤大小、數(shù)目、病理分級、分期（依據(jù)AJCC2002）標準等。

1.2 方法采用SP法進行免疫組化測定。組織經(jīng)甲醛溶液固定，石蠟包埋，作4μm切片，并經(jīng)常規(guī)脫蠟至水，檸檬酸（pH 6.0）高溫修復抗原，PBS沖洗3次，每次5min，切片于二甲苯中脫蠟，每次15min，以0.3%過氧化氫孵育10min，清除內(nèi)源性的過氧化物酶活性，PBS沖洗3次，每次5min，滴加正常山羊血清封閉，室溫孵育30min，傾去，滴加1∶50抗兔單克隆抗體（美國RD公司，278-RN），4℃冰箱孵育過夜，PBS沖洗3次，每次5min，再加生物素標記二抗（美國RD公司，HAF109），室溫孵育30min，PBS沖洗3次，每次5min，DAB顯色，蘇木精復染，脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片，PBS代替一抗作陰性對照。

1.3 結果判斷CCL5表達于細胞質(zhì)中，陽性細胞呈成棕黃色，用雙盲法在高倍鏡下計數(shù)1 000個細胞，根據(jù)陽性細胞占全部細胞的比例判斷結果，CCL5陽性細胞＜25%為陰性，25%≤CCL5陽性細胞＜50%為中等陽性，CCL5陽性細胞≥50%為強陽性，以中等陽性、強陽性為高表達。

1.4 統(tǒng)計學處理應用SPSS17.0統(tǒng)計軟件。不同分組間計數(shù)資料比較采用χ2檢驗。采用Kaplan-Meier作生存分析，并進行Log-Rank檢驗分析組間差異，Multivariate Cox分析多因素對患者術后生存的影響。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 CCL5在膀胱癌組織和正常膀胱組織中的表達CCL5表達主要在細胞質(zhì)內(nèi)（圖1）。20例正常膀胱組織中CCL5高表達5例，占25%；136例膀胱癌組織中高表達60例，占44.1%，明顯高于正常膀胱組織（P＜0.05）。

圖1 CCL5在膀胱癌中的表達（a：CCL5陰性；b：CCL5高表達；×200）

2.2 膀胱癌患者CCL5表達與臨床病理因素的關系CCL5表達陽性率在膀胱癌患者年齡、性別、腫瘤大小、腫瘤數(shù)目等方面均無統(tǒng)計學差異（均P＞0.05）；低級別和高級別膀胱癌CCL5高表達陽性率分別為27.3%（15/55）、55.6%（45/81），差異有統(tǒng)計學意義（P=0.001）。腫瘤分期Ta～T1和T2～T4CCL5高表達陽性率分別為38.3%（36/94）和57.1%（24/42），差異有統(tǒng)計學意義（P=0.041）（表1）。本組隨訪7～118個月，38例患者死亡，Logrank檢驗比較性別、年齡、腫瘤大小、數(shù)目、分級及CCL5的表達等因素研究發(fā)現(xiàn)，CCL5高表達的患者術后總生存時間明顯減少（圖2）。多因素Cox分析，CCL5高表達是影響患者術后總生存的獨立預后因素（表2）。

表1 膀胱癌患者CCL5表達與臨床病理因素的關系（例）

3 討論

圖2 CCL5的表達對膀胱癌患者術后總生存的影響

表2 膀胱癌患者術后總生存影響因素分析

膀胱癌是泌尿系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤，在美國男性惡性腫瘤發(fā)病率中占第4位，女性中占第7位。在美國2014年新發(fā)膀胱癌74 000例，其中16 000例死亡[4]。根據(jù)腫瘤浸潤程度的不同，膀胱癌分為非肌層浸潤性膀胱癌（non-muscle-invasive bladder cancer，NMIBC）和肌層浸潤性膀胱癌（muscle-invasive bladder cancer，MIBC）。在所有初次診斷的患者中，大約75%的患者是NMIBC Ta～T1，25%的患者是MIBC T2～。NMIBC 5年生存率＞90%，但復發(fā)率高達60%～85%，其中20%可進展為MIBC[6]。對于MIBC，即使及時給予全膀胱切除術治療和各種輔助治療，5年的腫瘤特異性生存率僅為50%～70%[7-8]。目前NMIBC的復發(fā)給臨床上治療帶了很大的挑戰(zhàn)。MIBC仍是患者死亡的主要原因，根治性的膀胱切除術仍是治療金標準，但患者的預后較差，現(xiàn)在的治療方案主要依靠病理分級和分期，而傳統(tǒng)的組織病理學評價如分級和分期在預測膀胱癌的生物學行為方面受到限制，因此明確導致腫瘤形成和進展的分子生物學改變，能為臨床患者的治療選擇提供合理證據(jù)。

本研究發(fā)現(xiàn)，CCL5在膀胱癌組織中呈高表達，與正常膀胱組織相比差異有統(tǒng)計學意義，CCL5高表達與患者年齡、性別、腫瘤大小及數(shù)目無關，腫瘤分級越高、浸潤越深的患者組織中CCL5高表達陽性率越高，說明CCL5與膀胱癌的生長及侵襲密切相關。

CCL5主要表達于T淋巴細胞、巨噬細胞、血小板、滑膜成纖維細胞、腎小管上皮細胞和一定類型的腫瘤細胞[9]。CCL5可以招募大量的粒細胞到達炎癥部位，包括T細胞、巨噬細胞、嗜堿性粒細胞，同時對由T細胞分泌的細胞因子如IL-2也有趨化作用。CCL5主要通過其受體發(fā)揮作用，目前發(fā)現(xiàn)的受體有CCR1、CCR3和CCR5，而CCR5是最主要的[9]。在胃癌中，CCL5/CCR5的相互作用導致胃癌腫瘤進展主要有以下幾種方式：作為生長因子促進血管發(fā)生；調(diào)節(jié)細胞外基質(zhì)，包括招募其他的基質(zhì)細胞和炎細胞；節(jié)細胞外基質(zhì)，包括招募其他的基質(zhì)細胞和炎細胞；參與免疫逃逸機制[10]。因此以CCL5/CCR5軸為靶點的治療已經(jīng)在乳腺癌患者中得到應用，在其他腫瘤治療中的應用尚待進一步研究[11]。

本研究結果表明CCL5表達與膀胱癌的病理分級、分期有關，而且CCL5的表達也是預測患者術后生存的一個有效指標。因此筆者認為進一步探討CCL5導致膀胱癌形成的分子機制，有望為判斷膀胱癌預后提供一種新的分子生物學指標，同時還可為膀胱癌的靶向治療提供特異性的靶點。

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Expression of CCL5 in patients with bladder cancer and its clinico pathological significance

CHEN Jie,YU Weixing,MA Wenyong,et al.

Department of Urology,Shaoxing Shangyu People's Hospital,Shaoxing 312300,China

ObjectiveTo investigate the expression of CCL5 in tumor tissue of patients with bladder cancer and its clinicopathological significance.MethodsThe expression of CCL5 protein in 136 specimens of bladder cancer and 20 specimens of normal bladder tissues was detected by SP immunohistochemtry,its correlations with clinicopathologic features of patients was analyzed.ResultsThe expression of CCL5 was higher in tumor tissues than that in normal bladder tissues.The positive rate of CCL5 in low grade bladder cancer was lower than that in high grade bladder cancer(27.3%vs.55.6%,P=0.01);the expression rate in non-muscle-invasive bladder cancer was lower than that in muscle-invasive bladder cancer(38.3%vs 57.1%,P=0.041).The patients were followed up for 7-117 months.Kaplan-Meier survival analysis demonstrated that CCL5 expression was significantly associated with shorter overall survival(P＜0.01).Multivariate analysis further demonstrated that CCL5 was an independent prognostic factor for patients with bladder cancer.ConclusionThe expression of CCL5 protein is highly in bladder cancer,the detection of the expression of CCL5 protein can be used for diagnosis and prognosis of bladder cancer.

Bladder cancer CCL5 Immunohistochemtry Diagnosis Prognosis

10.12056/j.issn.1006-2785.2017.39.20.2017-43

312300紹興市上虞人民醫(yī)院泌尿外科

虞偉星，E-mail：shangh_wei@hotmail.com

2017-01-18）

（本文編輯：嚴瑋雯）