張軍 張凡 周禮湘 徐立棟 高軍

嘉興地區(qū)102例非小細胞肺癌組織標本EGFR基因突變與臨床分析

張軍 張凡 周禮湘 徐立棟 高軍

目的觀察嘉興地區(qū)非小細胞肺癌（NSCLC）中生長因子受體（EGFR）基因突變與臨床特點相關(guān)性。方法采用探針擴增阻滯突變系統(tǒng)（ARMS）檢測102例手術(shù)后組織標本的EGFR基因突變情況。結(jié)果102例NSCLC組織中EGFR突變率為50.98%，外顯子19、21突變率為67.31%。男性和女性的突變率分別為33.33%和64.91%，吸煙與不吸煙患者的EGFR基因突變率分別為37.50%、59.68%，中高度分化和低分化患者的EGFR基因突變率分別為59.02%、39.02%，腺癌和鱗癌中的突變率分別為59.04%、6.25%，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05）。＞60歲患者與≤60歲患者的EGFR基因突變率分別為44.93%、63.64%，術(shù)后臨床分期Ⅰ+Ⅱ和Ⅲ期的EGFR基因突變率分別為49.32%、55.17%，淋巴轉(zhuǎn)移和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者的突變率分別為43.90%、55.74%（均P＞0.05）。結(jié)論EGFR基因突變與性別、吸煙、腺癌、分化程度有關(guān)。

非小細胞肺癌表皮生長因子受體基因突變

肺癌目前仍是中國人死亡率最高的惡性腫瘤，而且死因構(gòu)成比例持續(xù)增加[1]。非小細胞肺癌（NSCLC）占全部肺癌的80%～85%，5年生存率不足15%[2]。目前NSCLC主要藥物治療是化療和分子靶向藥物治療。表皮生長因子受體（epidermal growth factor receptor，EGFR）基因狀態(tài)是EGFR酪氨酸激酶抑制劑療效的預(yù)測因子，也能作為化療的預(yù)測因素。有效的EGFR基因突變檢測對優(yōu)化治療方案非常重要，國內(nèi)多地已對本地區(qū)NSCLC的EGFR基因狀態(tài)進行了相關(guān)研究，研究表明不同地區(qū)NSCLC患者中EGFR基因表達有一定的差異[3-4]，為進一步研究嘉興地區(qū)的手術(shù)患者組織標本中EGFR基因表達的情況及患者的臨床特點，以便于更精準地選擇EGFR基因突變檢測對象，筆者對102例手術(shù)治療的NSCLC患者的肺部組織標本EGFR基因表達進行檢測并分析其臨床特點，以此協(xié)助指導(dǎo)本地區(qū)相關(guān)EGFR檢測指標的臨床應(yīng)用。

1 資料和方法

1.1 一般資料收集本院2014年6月至2016年6月102例NSCLC患者手術(shù)標本。納入標準：（1）所有患者均行肺癌根治術(shù)；（2）患者術(shù)前未行化療或免疫治療；（3）無其他部位的惡性腫瘤。排除標準：（1）臨床材料不齊全；（2）術(shù)前接受了化療或免疫治療；（3）多個部位的原發(fā)癌；（4）不愿接受該項檢測。吸煙定義為曾吸煙支數(shù)大于100支。對所選擇的標本均常規(guī)進行固定、包埋、切片和染色，所有標本分別由2位高年資病理醫(yī)師讀片診斷。

1.2 EGFR檢測采用探針擴增阻滯突變系統(tǒng)（ARMS）法。使用人EGFR基因突變檢測試劑盒（北京亞康博生物科技有限公司）檢測石蠟包埋組織標本DNA的EGFR基因18、19、20、21外顯子的突變。參照說明書進行EGFR基因突變的檢測，首先在超凈工作臺完成加樣操作，在PCR單管加入3μlTaq酶至管底，再加入27μl的樣本稀釋液并離心，然后將配置好的混合液分裝入已常溫融化離心的8聯(lián)管，并短暫離心，接著在擴增區(qū)進行上機檢測操作，反應(yīng)條件為：95℃10min，1個循環(huán)；95℃15s，60℃60s，40個循環(huán)，采集熒光，最后結(jié)果判讀；18外顯子點突變G719S、G719C、G719A；19外顯子缺失2235-2249DEL、2236-2250DEL；21外顯子點突變L858R、L861Q；20外顯子突變T790M、S768I點突變和插入突變。檢測結(jié)果判斷依據(jù)說明書所提供的原則，擴增呈典型的S型曲線。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理應(yīng)用SPSS18.0統(tǒng)計軟件，計數(shù)資料以例數(shù)和百分比表示，EGFR基因突變在不同性別、年齡、有無吸煙、臨床分期、病理類型中的差異比較采用χ2檢驗。

2 結(jié)果

2.1 患者臨床資料分析102例NSCLC患者均行開放或胸腔鏡下肺癌根治手術(shù)并取得病理組織標本?；颊吣行?5例（44.11%），女性57例（55.88%）；年齡41～81歲，平均63.19歲，年齡＞60歲69例（67.65%），年齡≤60歲33例（32.35%）；吸煙者40例（39.22%），不吸煙患者62例（60.78%）；病理分型：腺癌83例（81.37%），鱗癌16例（15.69%），其他病理類型3例（2.94%）；有淋巴轉(zhuǎn)移41例（40.20%），無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移61例（59.80%）；分化程度：中高分化61例（59.80%），低分化41例（40.20%）；術(shù)后TNM分期：Ⅰ+Ⅱ期73例（71.57%），Ⅲ期29例（28.43%）。2.2EGFR檢測結(jié)果結(jié)果顯示共52例標本有EGFR基因突變（50.98%）。其中EGFR基因外顯子21突變率最高44.23%（23/52），19外顯子突變率23.08%（12/52），20外顯子突變率15.38%（8/52），18外顯子突變率13.46%（7/52），外顯子20和21同時突變（3.84%，2/52）。

2.3 不同臨床特點者EGFR基因突變率的比較男性患者和女性患者、吸煙與不吸煙患者、中高度分化和低分化的患者、腺癌和鱗癌中的EGFR基因突變率均有統(tǒng)計學(xué)差異（均P＜0.05），其余不同臨床特點的EGFR基因突變率比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05）。見表1。

表1 不同臨床特點者EGFR基因突變率的比較[例（%）]

3 討論

目前NSCLC的治療主要是手術(shù)、化療、放療、分子靶向治療等的綜合療法。分子靶向治療以表皮生長因子受體和腫瘤血管生成作為靶點，達到抑制癌細胞生長、浸潤和轉(zhuǎn)移的目的，如表皮生長因子受體-酪氨酸激酶拮抗劑（EGFR-TKI）。部分NSCLC術(shù)后患者或術(shù)后轉(zhuǎn)移患者對化療的耐受性降低，而分子靶向治療相對于傳統(tǒng)放化療毒副反應(yīng)較低，增加了患者的耐受性，在小鼠中敲除EGFR基因并不出現(xiàn)嚴重的缺陷，這表明EGFRTKI阻斷EGFR后的不良反應(yīng)不會很大[5]。EGFR-TKI使晚期NSCLC的患者生存期顯著延長[6]。研究表明EGFR基因在43%～89%的NSCLC中表達上調(diào)，參與細胞增殖、血管生成、抵抗凋亡和組織侵襲，在腫瘤形成以及介導(dǎo)癌細胞的生物學(xué)行為上發(fā)揮重要作用，是目前NSCLC治療的重要靶點[7]。初始的EGFR-TKI如吉非替尼應(yīng)用于化療無效的患者，有10%～19%的NSCLC患者出現(xiàn)顯著療效[5]，這部分患者基因檢測后發(fā)現(xiàn)EGFR激酶域外顯子18-21存在缺失或錯義突變，目前檢測EGFR基因突變主要在18、19、20、21外顯子，這幾種突變與吉非替尼治療的反應(yīng)性相關(guān)。在本研究中嘉興地區(qū)外科手術(shù)后組織標本的EGFR基因突變的陽性率達到50.98%，與臨床療效相關(guān)的主要是外顯子19和外顯子21的突變占67.31%，與相關(guān)報道相一致[8]。20外顯子突變率15.38%（8/52），18外顯子突變率13.46%（7/52），外顯子20和21同時突變3.84%（2/52），與其他地區(qū)的相關(guān)研究結(jié)果相近[3，9]。

多項研究中顯示，在胃癌、乳腺癌等多種惡性腫瘤疾病中EGFR存在著過度表達，并多數(shù)預(yù)示腫瘤預(yù)后不良[10-11]。EGFR突變狀態(tài)作為重要的肺癌驅(qū)動基因是一個有顯著臨床意義的預(yù)后因子[12]。目前認為EGFR突變在不同的NSCLC中不同，在女性、腺癌及不吸煙患者中突變率高[13]，但是與年齡、淋巴轉(zhuǎn)移、分化程度、臨床分期等相關(guān)性國內(nèi)各項研究結(jié)果顯示存在地區(qū)差異[14-15]。本研究發(fā)現(xiàn)，男性患者和女性患者、吸煙與不吸煙患者、中高度分化和低分化的患者、腺癌和鱗癌中的EGFR基因突變率均有統(tǒng)計學(xué)差異（均P＜0.05），其余不同臨床特點的EGFR基因突變率比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05）。

有研究顯示EGFR基因突變檢測直接測序法和ARMS相比較在手術(shù)標本檢測上陽性率為18.8%和25.0%，靈敏度分別為71.4%和95.2%，無明顯差異[16]。在本研究中EGFR基因突變的檢測方法采用了ARMS法，這種檢測方法根據(jù)不同的基因突變設(shè)計相應(yīng)的探針，適用于病理組織，缺點是不能對具體突變類型進行測序，優(yōu)點是對樣本大小要求不高而且靈敏度高，而且操作方法簡便，脫離了傳統(tǒng)的凝膠電泳技術(shù)，減少檢驗過程的毒性反應(yīng)，更適于臨床的篩查及進一步廣泛應(yīng)用。

隨著對EGFR基因突變研究的深入和廣泛開展，這種突變在NSCLC治療中的價值得到認可，EGFR基因突變與臨床特點的相關(guān)性對選擇檢測病例和治療群體具有指導(dǎo)意義。但在指導(dǎo)制定化療和靶向治療方案以及對療效預(yù)測的相關(guān)性尚需進一步研究。

[1] 屈若袆,周寶森.2004-2010年中國肺癌死亡分布及趨勢分析[J].中國衛(wèi)生統(tǒng)計,2014,31(6):932-935.

[2] Jemal A,Bray F,Center M M,et al.Global Cancer Statistics[J].CA Cancer J Clin,2011,61(2):69-90.

[3] 凌云,邱田,李卓,等.非小細胞肺癌中EGFR和KRAS基因突變的特點及與臨床病理特征的關(guān)系[J].臨床與實驗病理學(xué)雜志,2015,31(5):536-541.

[4] 楊長紹,潘鑫艷,馮強,等.云南宣威地區(qū)非小細胞肺癌表皮生長因子受體及KRAS基因突變檢測分析[J].中華病理學(xué)雜志,2016,45(4):226-230.

[5] Lynch T J,Bell D W,Sordella R,et al.Activating mutations in the epidermal growth factor receptor underlying responsiveness of non-small-cell lung cancer to gefitinib[J].N Engl J Med,2004,350(21):2129-2139.

[6] Maemondo M.Timing the chang of chemotherapy for non-small celllungcancer[J].Gan To Kagaku Ryoho,2012,39(9):1316-1319.

[7] Scagliotti GV,Selvaggi G,Novello S,et al.The biology of epidermal growth factor receptor in lung cancer[J].Clin Cancer Res,2004,10(12 Pt 2):4227s-4232s.

[8] Sharma S V,Bell D W,Settleman J,et al.Epidemal growth factor receptor mutations in lung cancer[J].Nat Rev Cancer,2007,7(3):169-181.

[9] 趙瑾,田俏梅,黃玉梅,等.湖南地區(qū)238例非小細胞肺癌EGFR基因突變狀態(tài)分析[J].腫瘤藥學(xué),2014,4(3):187-192.

[10] Hisamatsu Y,Oki E,Otsu H,et al.Effect of EGFR and p-AKT Overexpression on Chromosomal Instability in Gastric Cancer[J].Ann SurgOncol,2016,23(6):1986-1992.

[11] Alanazi I O,Khan Z.Understanding EGFR signaling in breast cancer and breast cancer stem cells:overexpression and therapeutic implications[J].Asian Pac J Cancer,2016,17(2):445-453.

[12] Foster S A,Whalen D M,Ozen A,et al.Activation Mechanism of Oncogenic Deletions Mutations in BRAF,EGFR,and HER2[J].Cancer Cell,2016,29(4):477-493.

[13] 劉紅雨,李穎,陳鋼,等.187例非小細胞肺癌中EGFR基因突變和擴增的檢測及其臨床意義[J].中國肺癌雜志,2009,12(12):1219-1229.

[14] 王瓊,呂亞莉,鐘梅,等.非小細胞肺癌中EGFR和K-ras基因突變檢測分析與病理特征的關(guān)系[J].診斷病理學(xué)雜志,2012,9(2):144-147.

[15] 趙俊,胡向陽.EGFR和K-ras在肺癌中的表達及其臨床意義[J].安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2012,47(7):824-827.

[16] 趙婧雅,王笑影,曾海英,等.直接測序法與蝎形探針擴增阻滯突變系統(tǒng)檢測肺癌小活檢標本EGFR基因突變的比較[J].中國癌癥雜志,2013,23(2):106-113.

EGFR mutations and clinicopathological features in patients with non-small cell lung cancer

ZHANG Jun,ZHANG Fan,ZHOU Lixiang,et al.

Department of Thoracic Surgery,Jiaxing Second Hospital,Jiaxing 314000,China

Objective To investigate the correlation of epidermal growth factor receptor(EGFR)gene mutations and clinicopathological characteristics in patients with non-small cell lung cancer(NSCLC).MethodsOne hundred and two surgical specimens were collected from patients with NSCLC.The EGFR gene mutations were detected by scorpion amplification refractory mutation system(ARMS).ResultsThe mutation rate of EGFR was 50.98%and that of exon 19/21 was 67.31%.The mutation rates of male and female were 33.33%and 64.91%,smokers and non-smokers were 37.50%and 59.68%,medium to high differentiated NSCLC and poorly differentiated NSCLC were 59.02%and 39.02%,adenocarcinoma and squamous cell carcinoma were 59.04%and 6.25%(allP＜0.05).The mutation rates of patients aged＞60 years and≤60 years were 44.93%and 63.64%,clinical stagesⅠ+Ⅱand clinical stagesⅢwere 49.32%and 55.17%,lymphatic metastasis and no lymphatic metastasis were 43.90%and 55.74%(allP＞0.05).Conclusion The EGFR gene mutations are correlated with sex,smoking status,pathological type and differentiation of NSCLC patients.

Non-small cell lung cancers Epidermal growth factor Receptorgenes mutation

10.12056/j.issn.1006-2785.2017.39.20.2017-1281

嘉興市科技局立項課題（2013AY21060）

314000嘉興市第二醫(yī)院胸外科

張軍，E-mail：18967383559@189.cn

2017-06-05）

（本文編輯：嚴瑋雯）