劉 朋，程子龍，陳 萌，劉思當(dāng)

(山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 動(dòng)物科技學(xué)院，山東 泰安 271000)

*通訊作者：劉思當(dāng)，教授，博士，博士生導(dǎo)師。

非典型腸致病性大腸桿菌的分離鑒定及臨床病例的病理學(xué)觀察

劉 朋，程子龍，陳 萌，劉思當(dāng)

(山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 動(dòng)物科技學(xué)院，山東 泰安 271000)

2016年6月，山東泰安市一家牛場(chǎng)發(fā)生犢牛持續(xù)性腹瀉，并引起很快死亡。[目的]:為了弄清致病原因。[方法]:根據(jù)臨床癥狀進(jìn)行了病理剖檢,及時(shí)采取應(yīng)對(duì)措施,組織病理學(xué)觀察過(guò)程發(fā)現(xiàn)。[結(jié)果]:犢牛起病排黃色水樣腹瀉物,隨后血便,并很快死亡,剖檢病變?yōu)楦闻K與腹膜粘連，脾臟腫大，呈暗紫色，小腸漿膜出血，腹腔內(nèi)有積液；鏡檢病變?yōu)殚g質(zhì)性肺炎、出血性變質(zhì)性腎炎、敗血脾、漿液性淋巴結(jié)炎和變質(zhì)性心肌炎。根據(jù)National Center for Biotechnology Information(NCBI)中的BLAST檢索結(jié)果顯示，這株大腸桿菌血清型與O157:H16菌株血清型非常接近。[結(jié)論]:最終確定為非典型性大腸菌感染所致。因此,通過(guò)注射頭孢噻呋鈉，口服新霉素等綜合防治措施，使病情得以迅速恢復(fù)。

非典型腸致病性大腸桿菌；犢牛；出血性腹膜炎；病理學(xué)觀察

1 發(fā)病背景

山東省泰安市某牛場(chǎng)從事奶公牛育肥，現(xiàn)該場(chǎng)有40頭奶公牛。2016年6月，牛群發(fā)生持續(xù)性腹瀉，起初排黃色水樣腹瀉，隨后排血便，死亡2頭。養(yǎng)殖戶(hù)將其中一頭送到本實(shí)驗(yàn)，本實(shí)驗(yàn)室通過(guò)臨床癥狀觀察和病理剖檢，診斷為出血性腹膜炎，隨后采集病料做組織病理學(xué)觀察和病原學(xué)檢測(cè)。

(3) 用白色黏土搓出直徑約0.5cm的長(zhǎng)條若干，連接各個(gè)直立菌絲的基部，并分別在兩個(gè)泡沫板側(cè)面做出根狀結(jié)構(gòu)，作為兩種真菌的營(yíng)養(yǎng)菌絲。

2 臨床癥狀

病牛主要以腹瀉為主，體溫略有升高，機(jī)體消瘦，精神沉郁，食欲下降，眼窩凹陷，長(zhǎng)時(shí)間腹瀉導(dǎo)致機(jī)體脫水。

1993年4月6日，我?guī)е?歲的兒子從北京出發(fā)，乘坐東航MU583班機(jī)經(jīng)上海飛往美國(guó)洛杉磯。那是架麥道MD11型客機(jī)。途中，飛機(jī)飛行一直很平穩(wěn)，到高度為10100米時(shí)，大家覺(jué)得似乎已經(jīng)平安抵達(dá)，人人臉色輕松。不料，飛機(jī)忽然抖動(dòng)了一下，我的頭頂被一巨大的平板狀物體猛拍一記，一瞧，是飛機(jī)天花板！我飄浮在空中，身不由己，處于嚴(yán)重失控失重狀態(tài)。后來(lái)才得知，這可能是飛行員起身時(shí)，無(wú)意中碰到了升降控制按鈕。

利用放電聲音識(shí)別來(lái)檢測(cè)高壓開(kāi)關(guān)柜絕緣破壞情況,其核心思想是通過(guò)對(duì)放電聲音訓(xùn)練樣本進(jìn)行訓(xùn)練,劃分樣本空間,完成分類(lèi)器的設(shè)計(jì),從而提高放電聲音的識(shí)別率,其系統(tǒng)結(jié)構(gòu)圖如圖1所示。首先,采集高壓開(kāi)關(guān)柜絕緣破壞放電聲音訓(xùn)練樣本;然后對(duì)訓(xùn)練樣本預(yù)處理,提取能量特征和顯著性特征作為混合特征參數(shù),劃分樣本空間,完成分類(lèi)器的訓(xùn)練;最后,將待測(cè)放電聲音進(jìn)行同樣的預(yù)處理、特征參數(shù)提取后送入分類(lèi)器完成最終的檢測(cè)識(shí)別。經(jīng)過(guò)訓(xùn)練的分類(lèi)器可以識(shí)別出高壓開(kāi)關(guān)柜絕緣破壞時(shí)的放電聲音,從而進(jìn)行實(shí)時(shí)故障檢測(cè),實(shí)時(shí)顯示高壓開(kāi)關(guān)柜的工作狀態(tài)。

3 病理變化

腹腔有血液滲出，繼發(fā)腹腔感染，引起腹膜炎，使腸管和臟器、腹膜粘連(圖1)，瘤胃大網(wǎng)膜出血。肝臟腫大，表面被一層灰白色薄膜包裹(圖2)。脾臟充血、出血，呈黑紫色，表面也有薄膜包裹(圖3)。心外膜出血，肺尖葉、心葉輕度實(shí)變，腎淤血腫大。腸系膜出血，腸漿膜面出血。

3.1 剖檢病變

圖1出血性腹膜炎圖2肝臟粘連圖3脾臟表面被白色薄膜包裹炎

根據(jù)臨床表現(xiàn)、剖檢病變(出血性腹膜炎、肝包膜炎、脾包膜炎)、病理組織學(xué)觀察(變質(zhì)性心肌炎、間質(zhì)性肺炎、充血性變質(zhì)性腎炎、漿液性淋巴結(jié)炎、敗血脾)及病原學(xué)檢查，診斷為非典型腸致病性大腸桿菌(aEPEC)感染所致。

肝竇狀隙擴(kuò)張充血，肝細(xì)胞變性。心肌纖維顆粒變性，心間質(zhì)輕度出血(圖4)。肺泡壁增寬，肺泡上皮細(xì)胞脫落(圖5)。腎小動(dòng)脈充血，腎小管上皮細(xì)胞顆粒變性(圖6)。因漿液滲出，淋巴小結(jié)內(nèi)淋巴細(xì)胞疏松，淋巴竇擴(kuò)張(圖7)。整個(gè)脾組織被紅細(xì)胞取代，脾實(shí)質(zhì)壞死消失，只見(jiàn)少量零散的淋巴細(xì)胞，呈敗血脾病變(圖8)。

4 病原學(xué)檢測(cè)

除了EHEC血清型O157:H7 外，O157血清組還包括其它菌株，血清型O157:H45菌株屬于EPEC，而血清型O157:H16菌株屬于aEPEC。典型腸致病性大腸桿菌(tEPEC)既含有腸細(xì)胞脫落位點(diǎn)(LEE)毒力島外，還含有被稱(chēng)為EPEC黏附因子(EAF)的質(zhì)粒，而非典型腸致病性大腸桿菌(aEPEC)僅含LEE毒力島，不含EAF質(zhì)粒[2]。aEPEC與EHEC相比，缺少合成類(lèi)志賀毒素的能力。因此，aEPEC似乎是一類(lèi)新病原體。

根據(jù)National Center for Biotechnology Information(NCBI)中的BLAST檢索結(jié)果顯示，這株大腸桿菌血清型與aEPEC O157:H16菌株血清型相似性為97.6%(圖10)。

圖9 “M”為DL2000 DNA marker；“+”為陽(yáng)性對(duì)照；“1”為樣品

大腸桿菌有菌體(O)抗原、表面(K)抗原和鞭毛(H)抗原3種，已知大腸桿菌173種，K抗原103種，H抗原64種，因而構(gòu)成多種血清型。根據(jù)血清型不同，分為腸致病性大腸桿菌(EPEC)、腸產(chǎn)毒素性大腸桿菌(ETEC)、腸侵襲性大腸桿菌(EIEC)、腸出血性大腸桿菌(EHEC)[1]。EHEC是近幾年來(lái)新發(fā)現(xiàn)的菌株，其主型為O157:H7，主要引起人腹瀉。

4.2 細(xì)菌測(cè)序分析

調(diào)查對(duì)象為我院2013級(jí)三年制護(hù)理專(zhuān)業(yè)學(xué)生262人，18～21歲，男11人，女251人。均于2013—2014年第一學(xué)期由同一位教師用相同教學(xué)方法教授護(hù)理禮儀與人際溝通課程，共32學(xué)時(shí)。教師在教學(xué)中根據(jù)章節(jié)特點(diǎn)，綜合運(yùn)用多種教學(xué)方法，主要包括講授法、案例分析討論、角色扮演、護(hù)士舉止禮儀室內(nèi)外實(shí)踐練習(xí)、小組舉止禮儀展示、情景模擬等。因我院剛搬至新校區(qū)，多媒體教室、形體房尚未裝修完工，本學(xué)期教學(xué)中未進(jìn)行多媒體授課和形體房練習(xí)。

5 結(jié)論

3.2 鏡檢病變

圖10 系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)

6 分析

4.1 病毒檢測(cè)結(jié)果

剖檢送檢病死牛，采集組織器官病料(腦、肝、腎、脾、淋巴結(jié)及扁桃體)研磨，提取DNA，檢測(cè)牛病毒性腹瀉—黏膜病病毒(BVDV)，檢測(cè)結(jié)果顯示，送檢的病料樣品中未檢出BVDV(圖9)。同時(shí)無(wú)菌采取腸道、肺及肝組織，劃線(xiàn)接種于LB培養(yǎng)基后于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h后發(fā)現(xiàn)，優(yōu)勢(shì)菌落明顯，在平板上可見(jiàn)大小一致的菌落，培養(yǎng)48 h后挑取菌落涂片后經(jīng)革蘭氏染色為陰性[4]，隨后用16S細(xì)菌通用引物鑒定，并做測(cè)序分析。

收入的樣本數(shù)據(jù)目標(biāo)是32例行髖關(guān)節(jié)置換的老年糖尿病患者，該次實(shí)驗(yàn)分組研究依據(jù)是不同護(hù)理干預(yù)模式，一組入組患者16例，參照組，男性患者和女性患者之間比例是8:8，年齡范圍在61～82歲間，中位年齡數(shù)值（70.52±5.55）歲，最長(zhǎng)病程20年，最短病程2年，中位病程（10.54±1.98）年；實(shí)驗(yàn)組，男性患者和女性患者之間比例是9:7，年齡范圍在62～83歲間，中位年齡數(shù)值（71.55±6.01）歲，最長(zhǎng)病程 19年，最短病程 1年，中位病程（10.01±3.22）年。驗(yàn)證對(duì)比實(shí)驗(yàn)組與參照組行髖關(guān)節(jié)置換的老年糖尿病患者一般資料，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

LEE毒力島包含緊密素(intimin)、III型分泌系統(tǒng)、分泌蛋白(Esp)和緊密素的受體Tir等基因。緊密素，一個(gè)由eae基因編碼的94KD的外膜蛋白，負(fù)責(zé)在細(xì)菌和腸膜間的緊密黏附。aEPEC血清型O157:H16菌株是個(gè)例外，不是所有O157:H16菌株都含有eae基因，因此，有些菌株不能合成緊密素，這表明這些菌株不具有完整的毒力島結(jié)構(gòu)。從嚴(yán)格意義上講，O157:H16菌株不屬于EPEC，它與EHEC的親緣關(guān)系更近。

目前，aEPEC菌株的致病機(jī)理還不十分清楚，本文只對(duì)致病牛的病理學(xué)病變進(jìn)行了觀察，并對(duì)其核酸序列進(jìn)行了分析。國(guó)外有學(xué)者也只是調(diào)查其流行病學(xué)，研究表明，禽源和豬源是牛感染aEPEC的主要傳染源，而且也是人類(lèi)感染aEPEC的主要傳染源，因此，加強(qiáng)動(dòng)物源性aEPEC的預(yù)防與控制是防控牛和人類(lèi)腹瀉的重要途徑[3]。

一般情況下，機(jī)體因環(huán)境、應(yīng)激和病毒感染等誘發(fā)因素影響，容易繼發(fā)大腸桿菌[4]。我們通過(guò)做病原學(xué)檢測(cè)，排除病毒感染的影響，經(jīng)回訪(fǎng)得知，該場(chǎng)發(fā)病的犢牛剛從外地運(yùn)輸回來(lái)，在加上飼養(yǎng)環(huán)境條件差，導(dǎo)致?tīng)倥４竽c桿菌病爆發(fā)。

預(yù)防措施通過(guò)平時(shí)消毒和用藥預(yù)防，犢牛出生后1～3 d，頭孢噻呋鈉每天1次肌肉注射，防治大腸桿菌早期感染；出生后7～12 d，口服硫酸新霉素，預(yù)防犢牛白痢。治療措施：病牛肌肉頭孢噻呋鈉10～20 mg/kg體重或氟苯尼考20 mg/kg體重，每日1次肌肉注射，連用3～4 d。

[1] 陳溥言.獸醫(yī)傳染病[M].北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社,2006:111-118.

[2] 陳愛(ài)平,陳建輝,楊勁松,福建省非典型腸致病性大腸桿菌(aEPEC)的發(fā)現(xiàn)及某些分子特征的研究[J].中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào),2011,27(4):275-278.

[3] 陳雙艷,一株大腸桿菌0104的表型及基因型鑒定[D].大理學(xué)院,2013.

[4] 崔一晨,非典型腸致病性大腸桿菌流行病學(xué)調(diào)查與特性研究[D].揚(yáng)州:揚(yáng)州大學(xué),2009.

IsolationandIdentificationofAtypicalEnteropathogenicEscherichiaColiandPathologicalObservationofClinicalCases

LIU Peng, CHENG Zi-long, CHEN Meng, LIU Si-dang

(CollegeofAnimalScienceandTechnology,ShandongAgricultureUniversity,Tai’an,Shandong, 271000,China)

In June 2016, in Shangdong province, some calf of Taian’s herd, had persistent diarrhea. [Objective] The aim of this study was to detect the cause of this disease.[Method] Based on the clinical symptoms, the pathological autopsy was used to detect these samples, and some effective measures were taken.[Result] According to the histopathological observation, it was found that bovines defecated yellow watery diarrhea at first, followed by bloody diarrhea, and soon died. By pathologic autopsy, pathological observation and pathogen detection, main necropsy lesions were the liver adhesions with peritoneum, the enlargement of dark purple spleen, bleeding intestinal serosa and intra-peritoneal fluid; microscopic lesions were interstitial pneumonia, hemorrhagic deterioration nephritis, septic spleen, serous inflammation and deterioration myocarditis. In addition, based on the BLAST search results by using the National Center for Biotechnology Information (NCBI), it was showed that the serotypes of this strain E.coli are very close with the O157:H16 strain. [Conclusion] Finally, it diagnosed as the infection of atypical enteropathogenic Escherichia Coli (aEPEC). Importantly, by taking comprehensive control measures, injecting ceftiofur sodium and oral neomycin and others, the state of an illness can be quickly restored.

atypical enteropathogenic Escherichia Coli; calf; hemorrhagic peritonitis; pathological observation

2017-03-20接收日期2017-05-25

山東省牛產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系資助(SDAIT-09-04)

劉朋(1991-)，男，山東章丘市人，在讀碩士，主要從事動(dòng)物臨床病理學(xué)研究。

S823

A

1001-9111(2017)04-0042-03