李雪晴，王璇，劉健

（銀川能源學(xué)院，寧夏銀川 750000）

紅棗中克百威檢測方法研究

李雪晴，王璇，劉健＊

（銀川能源學(xué)院，寧夏銀川 750000）

目的：以紅棗為研究對象，建立HPLC法測定3種不同品種紅棗中氨基甲酸酯類農(nóng)藥克百威殘留量的檢測方法。方法：通過單因素實(shí)驗(yàn)篩選提取純化實(shí)驗(yàn)條件，確定紅棗樣品使用二氯甲烷提取、氨基固相萃取柱提純，最后使用HPLC法進(jìn)行農(nóng)藥殘留檢測方法。檢測使用色譜條件中以甲醇、水（45∶55）的溶液作為流動(dòng)相，使用ODS-2,4.6的柱子為色譜柱進(jìn)行分析。結(jié)果：3種紅棗樣品的加標(biāo)回收率均符合國家對于農(nóng)藥殘留的檢測標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)論：所實(shí)驗(yàn)方法能準(zhǔn)確測定寧夏紅棗中克百威殘留量，有助于紅棗產(chǎn)品質(zhì)量控制。

HPLC；紅棗；克百威；氨基甲酸酯類農(nóng)藥

21世紀(jì)以來，居民人均生活水平穩(wěn)步上升，所以逐漸對衣食住行等各個(gè)方面的要求也變得更高。比起過去吃藥進(jìn)補(bǔ)，現(xiàn)在人們更喜歡食療從果蔬中獲取所需的營養(yǎng)，如人體不可缺少的維生素類物質(zhì)。

研究發(fā)現(xiàn)，紅棗中維生素含量很高，因此在市場的供求關(guān)系與我國政策的扶持下紅棗的種植面積與產(chǎn)量都在逐年升高。寧夏紅棗產(chǎn)區(qū)大都分布在黃河兩岸，以靈武、中寧、中衛(wèi)等縣委集中。中寧縣棗園堡一帶，棗樹茂密成林，綿延百里不絕。每年8，9月份，果實(shí)成熟的時(shí)候，棗園里，圓棗和長棗累累，棗香飄溢，格外招人喜愛。靈武、中寧等地產(chǎn)的圓棗，果實(shí)渾圓或橢圓形，顆粒碩大，顏色深紅，一粒果的重量平均達(dá)10克左右。果實(shí)肉質(zhì)細(xì)密，甜中帶酸，含有豐富的維生素；干燥率高，可達(dá)45%。靈武長棗是寧夏培育的地方良種。

表1 實(shí)驗(yàn)儀器與材料

表2 實(shí)驗(yàn)試劑

但在高產(chǎn)量的背景下，存在著質(zhì)量不合格農(nóng)藥噴灑導(dǎo)致殘留的問題，過量的農(nóng)藥殘留對人體的危害極大，所以現(xiàn)在國家對于農(nóng)藥殘留的標(biāo)準(zhǔn)線也越降越低。因此本文主要目的是研究出一種可以快速、高效、簡便、準(zhǔn)確檢測出紅棗中農(nóng)藥殘留的辦法，通過收集資料得到現(xiàn)如今國內(nèi)外對檢測氨基甲酸酯類農(nóng)藥的方法主要有HPLC、GC、LC-MS、GC-MS、CE這五種方式[1-4]。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 實(shí)驗(yàn)樣品

實(shí)驗(yàn)檢測樣品為3種不同品種寧夏紅棗。

將三種紅棗樣品去核在鼓風(fēng)箱內(nèi)用60℃烘干24h以上，取出后用粉碎機(jī)研磨成粉末，過80目篩后，置于干燥器中保存。

1.2 檢測儀器

實(shí)驗(yàn)所用檢測儀器如表1所示。

1.3 主要試劑

實(shí)驗(yàn)田所用主要試劑如表2所示。

1.4 提取方法

準(zhǔn)確稱取1g處理好的紅棗粉末于具塞錐形瓶內(nèi)，精確至0.01g。根據(jù)顏色深淺，加入1.0～1.6g活性炭進(jìn)行脫色。向管加入15mL二氯甲烷以及5g無水硫酸鈉，置于超聲儀上超聲1h，完成后使用5 000r/min的離心機(jī)離心處理5min，然后將離心管中溶液轉(zhuǎn)移到10mL比色管中，用氮吹儀濃縮近干，最后用正己烷∶丙酮（1∶1）1mL溶液溶解殘?jiān)?，超?0s，溶液待凈化。

1.5 試驗(yàn)方法

確定高效液相色譜條件，吸取樣液10uL進(jìn)行克百威殘留量的測定，以保留的時(shí)間定性，峰面積定量。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出所對應(yīng)的克百威農(nóng)藥的濃度。

按下式計(jì)算樣品中克百威的濃度。

式中：

X-樣品中克百威的殘留量，mg/mL；

C-樣品峰在標(biāo)準(zhǔn)曲線中或由線性回歸方程求得的相應(yīng)濃度，ug/mL；

m-處理樣品的質(zhì)量，g；

V-樣品最終定容溶劑，mL。

2 結(jié)果與討論

2.1 最大吸收波長確定

在200～800nm范圍內(nèi)進(jìn)行全波長掃描，掃描結(jié)果得到最大吸收波長為270nm，最大吸光度為1.729，如圖1所示。

圖1 克百威光譜掃描圖

2.2 色譜條件確定

表3 色譜條件

據(jù)實(shí)驗(yàn)確定在上述條件下，克百威與其他物質(zhì)可以得到較好的分離效果。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液配制

準(zhǔn)確吸取克百威標(biāo)準(zhǔn)品（100μg/mL）1mL于10mL容量瓶中用甲醇定容搖勻，由于對照品使用丙酮溶解所以色譜圖中的第一峰為丙酮峰。對照品溶液色譜分析圖如圖2所示。

圖2 對照品溶液色譜圖

結(jié)果顯示，克百威的出峰時(shí)間在10.728min。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

分別吸取1、1.5、2、2.5mL克百威標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于10mL容量瓶內(nèi)定容后進(jìn)行色譜檢測，結(jié)果如圖3所示。

線性方程為：Y=13 228.4X-1208，克百威標(biāo)準(zhǔn)品在1.0～10.0μg/mL呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

2.5 提取溶劑對檢測的影響

在樣品中加入1μg/mL克百威，分別選乙腈、二氯甲烷、丙酮、甲醇為提取溶劑加入15mL，及5g無水硫酸鈉，放置在超聲儀上超聲1h，完成后使用5 000r/min的離心機(jī)離心處理5min，然后將離心管中溶液轉(zhuǎn)移到10mL比色管中，用氮吹儀濃縮近干，最后用正己烷∶丙酮（1∶1）1mL溶液溶解殘?jiān)?，超?0s，溶液待凈化。

一般情況下使用液相色譜儀檢測農(nóng)藥時(shí)使用的提取劑有乙腈、二氯甲烷、甲醇、丙酮，通過回收率比較發(fā)現(xiàn)二氯甲烷相較于其他提取劑來說對農(nóng)藥的提取效果較好，見表4。因此，本課題選擇以二氯甲烷作為提取劑。

表4 提取溶劑選擇表

在實(shí)驗(yàn)溫度、儀器等都相同的情況下分別向加標(biāo)樣品中加入不同量的提取劑3、5、7、9mL和15mL的二氯甲烷進(jìn)行比較，見表5。結(jié)果顯示，當(dāng)向樣品中加入7mL二氯甲烷溶液后可以達(dá)到較為理想的提取效果。

表5 提取劑用量比較表

2.6 鹽析劑對檢測的影響

選取不同類型的鹽作為鹽析試劑，如氯化鈉、無水硫酸鎂、無水硫酸鈉、硫酸銨，比較四種鹽的鹽析效果，結(jié)果見表6。通過比較發(fā)現(xiàn)，無水硫酸鈉的鹽析效果略高于其他三種。因此選用無水硫酸鈉作為鹽析試劑。

表6 鹽析試劑比較表

提取劑用量確定且實(shí)驗(yàn)室溫度、儀器等剩余條件一致的情況下加入無水硫酸鈉為1、2、3、4g和5g進(jìn)行比較，見表7。發(fā)現(xiàn)使用1g無水硫酸鈉的效果比較理想且不浪費(fèi)藥品。

表7 鹽析試劑用量比較表

2.7 提取時(shí)間對檢測的影響

提取劑用量確定加入1g無水硫酸鈉且實(shí)驗(yàn)室溫度、儀器等剩余條件一致的情況下對不同提取時(shí)間進(jìn)行比較，提取時(shí)間分為10、20、30、40、50min和60min結(jié)果見表8。經(jīng)過對比回收率，得出最佳提取時(shí)間為30min。如果超聲時(shí)間過長，會(huì)導(dǎo)致二氯甲烷揮發(fā)過快，也會(huì)導(dǎo)致回收率降低。

表8 不同提取時(shí)間結(jié)果比較表

2.8 提取凈化方法對檢測的影響

準(zhǔn)確稱取1g處理好的紅棗粉末于離心管內(nèi)，向管內(nèi)各加入7mL二氯甲烷以及1g無水硫酸鈉，放置在超聲儀上超聲30min，完成后使用5 000r/min的離心機(jī)離心處理5min，然后將離心管中溶液轉(zhuǎn)移到10mL比色管中，用氮吹儀濃縮近干，最后用正己烷∶丙酮（1∶1）1mL溶液溶解殘?jiān)?，超?0s，溶液待凈化。

用丙酮∶正己烷（5∶95）的混合液5 mL預(yù)淋洗氨基柱，當(dāng)混合液到達(dá)柱吸附層表面時(shí)（柱子不能干），立即加入上述樣品待測溶液，當(dāng)樣品溶液層達(dá)到吸附層表面時(shí)，用3mL丙酮∶正己烷（5∶95）的混合液進(jìn)行洗脫，用10mL比色管收集洗脫液，用3mL丙酮∶正己烷（5∶95）的混合液洗滌燒杯后過柱，并重復(fù)1次。將收集到的洗脫液置于氮吹儀上，水浴溫度50℃，氮吹蒸發(fā)至近干。最后用丙酮準(zhǔn)確定容至1mL。利用混合器將溶液充分搖勻最后去上層清液用0.45um的濾膜過濾，濾液待測。

2.9 精密度實(shí)驗(yàn)

準(zhǔn)確吸取克百威標(biāo)準(zhǔn)品溶液（10.0μg/mL）20μL進(jìn)行5次色譜分析實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見表9。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示5次測定克百威標(biāo)準(zhǔn)品溶液的RSD值為1.17%。說明此方法精密度良好。

表9 精密度試驗(yàn)

2.10 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

配制6份克百威濃度為1.0μg/mL供試品溶液，在同一條件下進(jìn)行6次色譜實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見表10。由表10可知，該測定方法重現(xiàn)性良好，RSD為1.40%。

表10 重復(fù)性試驗(yàn)

2.11 溶液穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

吸取10μg/mL克百威標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液20μL進(jìn)行色譜分析實(shí)驗(yàn)測定峰面積，然后將10ug/mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液避光放置于冰箱冷藏室中（4℃），分別于1天、2天、3天、5天、7天分別進(jìn)行色譜分析實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見表11?？税偻悠啡芤涸谇皟商靸?nèi)穩(wěn)定性良好，但溶液性質(zhì)仍會(huì)隨著時(shí)間的延長而有所變化，因此檢測時(shí)最好溶液現(xiàn)配現(xiàn)用。

表11 溶液穩(wěn)定性

由以上方法學(xué)考察結(jié)果看出，采用振蕩法提取，HPLC測定紅棗中克百威取得了較好的實(shí)驗(yàn)效果,證明此方法可行，因此，本實(shí)驗(yàn)最終選擇采用振蕩法提取、HPLC法測定紅棗中是否存在克百威殘留量，為這種農(nóng)藥的質(zhì)量控制提供一定的參考價(jià)值。

3 結(jié)論

本文選取寧夏靈武、中寧以及新疆的紅棗作為檢測對象，建立以二氯甲烷為提取劑，通過高速離心震蕩提取及氮吹儀高度濃縮，氨基固相萃取柱凈化，采用高效液相色譜法檢測三中紅棗樣品中是否含有殘留克百威。篩選提取凈化條件，對三種紅棗樣品采取超聲波提取，選擇丙酮∶正己烷為1∶1的混合溶液進(jìn)行洗脫，并單獨(dú)使用空白樣品加標(biāo)以提高實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確度降低其他干擾。最終實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示此次建立的克百威農(nóng)藥殘留檢測法實(shí)用性高穩(wěn)定性好，并且能夠快速、靈敏的檢測出紅棗中的農(nóng)藥殘留。

[1]王海新，張學(xué)軍，靳偉，等.國內(nèi)紅棗干燥技術(shù)的研究現(xiàn)狀及發(fā)展趨勢[J].農(nóng)機(jī)化研究，2015，8：249-253.

[2]GB 2763-2014.食品安全國家標(biāo)準(zhǔn).食品中農(nóng)藥最大殘留限量[S].

[3]李東昊，張曉明，孫英，等.氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留分析方法的比較[J].農(nóng)藥與環(huán)境安全國際會(huì)議論文集.270-276.

[4]李萍.氨基甲酸酯農(nóng)藥殘留分析方法.國外醫(yī)學(xué)衛(wèi)生學(xué)分冊.1999，26(6)： 366-371.

[5]郭立，張清敏.氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留分析方法的研究進(jìn)展[J].天津農(nóng)學(xué)院報(bào)，2001，8(4)：15-21.

Study on Detection Method of Carbofuran in Red Dates

Li Xue-qing,Wang Xuan,Liu Jian*
(Yinchuan Energy Institute,Ningxia Yinchuan 750000)

Objective:To establish a HPLC method for the determination of carbamate pesticide residues of Carbofuran in 3 different varieties of red dates.Methods:By single factor experiment to optimize the extraction purification process conditions,determine the red dates sample using dichloromethane extraction,amino solid phase extraction column.Finally HPLC for detection of pesticide residues and the method was studied using the method.The liquid phase of methanol and water (45∶55) was used as the mobile phase in the chromatographic conditions.The column of ODS-2,4.6 was used as a chromatographic column for analysis.Results:the recoveries of 3 kinds of red dates samples were in line with the national standards for pesticide residues.Conclusion:the experimental method used in this study can provide a reference for the quality control of Ningxia red dates.

HPLC;Red dates;Carbofuran;Carbamate pesticides

O657.63

A

2096-0387（2017）05-0037-04

銀川能源學(xué)院科研項(xiàng)目（2015-KY-Y-03）。

李雪晴（1986—），女，寧夏中衛(wèi)人，本科，助教，研究方向：分析化學(xué)。

劉?。?962—），女，黑龍江望奎人，本科，高級工程師，研究方向：分析化學(xué)