●龔丹

高脂血、溶血標(biāo)本對PCR測定低水平HBV-DNA檢測結(jié)果的影響分析

●龔丹

目的：研究高脂血、溶血標(biāo)本對PCR測定低水平HBV-DNA檢測結(jié)果的影響。方法：對收治的80例三酰甘油(TG)正常(TG≤11.46mmol/L）且實(shí)時熒光定量PCR測定為(4.0-9.0)×103IU/mL的乙型肝炎患者采集血清標(biāo)本，進(jìn)行即刻檢測，另外采集80份乙肝五項(xiàng)全陰且檢測不出HBVDNA的高TG標(biāo)本和80份乙肝五項(xiàng)全陰且檢測不出HBV-DNA的全血標(biāo)本分別制備成高脂血、溶血血清標(biāo)本，對以上標(biāo)本進(jìn)行比較配對檢驗(yàn)。結(jié)果：高脂血和非高脂血、溶血血清和非溶血血清的HBV-DNA水平間存在較大差異，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05）。結(jié)論：高脂血、溶血標(biāo)本低水平HBV-DNA的PCR測定較正常樣本結(jié)果降低。

高脂血；溶血標(biāo)本；PCR測定；低水平HBV-DNA

HBV是引發(fā)乙型肝炎感染的主要致病菌，由于乙型肝炎具有較強(qiáng)的傳染性，且易感人群較廣，因此，乙型肝炎的早期發(fā)現(xiàn)與診斷在臨床防治過程中十分重要。HBV-DNA能夠反映HBV復(fù)制感染情況，對于病情診斷及臨床治療有較重要的依據(jù)作用。目前，臨床上測定HBV-DNA水平的主要方法為熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)，其靈敏度高、特異性高、操作簡便且不易感染，可以進(jìn)行實(shí)時檢測，但在臨床實(shí)踐中，PCR測定中易受到各種干擾，其中來自血清標(biāo)本本身的因素較為嚴(yán)重[1]。本文就高脂血、溶血標(biāo)本對PCR測定水平HBV-DNA檢測結(jié)果的影響，故采集3種類型的血清標(biāo)本進(jìn)行配對比較，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

對我院肝病門診2015年3月至2016年3月間收治的80例三酰甘油(TG)正常(TG≤11.46mmol/L）且實(shí)時熒光定量PCR測定為(4.5-9.0)×103IU/mL的乙型肝炎患者采集血清標(biāo)本，進(jìn)行即刻檢測，另外采集80份乙肝五項(xiàng)檢測結(jié)果全陰且未檢測出HBV-DNA的高TG標(biāo)本和80份乙肝五項(xiàng)檢測結(jié)果全陰且未檢測出HBV-DNA的全血標(biāo)本分別制備成高脂血、溶血血清標(biāo)本，對以上標(biāo)本進(jìn)行比較配對檢驗(yàn)。

1.2 儀器與試劑

熒光定量PCR檢測儀(杭州博日Line-Gene 9620型熒光定量PCR 擴(kuò)增儀)，血液分析儀(日本Sysmex公司，產(chǎn)品型號：XT-2000i)，全自動生化儀(BECK MAN 的AU2700型)及乙肝病毒核酸擴(kuò)增熒光定量檢測試劑盒(深圳凱杰基因股份有限公司)。

1.3 檢測方法

80例乙肝患者空腹抽取3ml靜脈血，離心后將血清混勻，采用血液分析儀測定血紅蛋白，全自動生化儀測定總膽紅素與TG值。

采集80份乙肝五項(xiàng)檢測結(jié)果全陰且未檢測出HBV-DNA的高TG標(biāo)本，離心10后，取血清混勻并用生理鹽水稀釋成TG濃度分別為35、25、15、5mmol／L的溶液。將80例乙肝患者血清標(biāo)本分為4組，分別與各濃度TG溶液以1∶1比例混勻，制成模擬標(biāo)本。

另有80份乙肝五項(xiàng)檢測結(jié)果全陰且未檢測出HBV-DNA的全血標(biāo)本，離心后丟棄血清，并用生理鹽水清洗3遍，進(jìn)行溶血處理，將溶血后的標(biāo)本混勻并用生理鹽水稀釋成Hb濃度為30、60、120、240g／L的溶液。將80例乙肝患者的血清標(biāo)本分為4組，分別與各濃度Hb溶液以1∶1比例混勻，制成模擬標(biāo)本。

以上所有模擬標(biāo)本檢測均采用乙肝病毒核酸擴(kuò)增熒光定量檢測試劑盒(中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司)，全部操作均按照說明書進(jìn)行。

1.4 觀察指標(biāo)

分析不同TG水平標(biāo)本對低水平HBV-DNA的PCR檢測結(jié)果的影響；分析不同溶血狀態(tài)標(biāo)本對低水平HBV-DNA的PCR檢測結(jié)果的影響。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

(1)乙肝患者高脂血血清與非高脂血血清的HBV-DNA定量檢測結(jié)果，血脂水平與低水平HBV-DNA的PCR水平呈反相關(guān)性，詳情見表1。

表1 乙肝患者高脂血血清與非高脂血血清的HBV-DNA定量檢測結(jié)果

表1 乙肝患者高脂血血清與非高脂血血清的HBV-DNA定量檢測結(jié)果

(2)乙肝患者溶血血清與非溶血血清的HBV-DNA定量檢測結(jié)果，溶血程度與低水平HBV-DNA的PCR水平呈反相關(guān)性，兩組數(shù)據(jù)差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05），詳情見表2。

編號 TG值(mmol/L) 高血脂(×103copy/ml) 非高血脂(×103copy/ml)1 35 3.35±0.78 6.12±1.52 2 25 3.74±0.95 6.84±1.73 3 15 4.16±1.02 7.48±1.88 4 5 4.38±0.98 7.23±1.82

表2 乙肝患者溶血血清與非溶血血清的HBV-DNA定量檢測結(jié)果

表2 乙肝患者溶血血清與非溶血血清的HBV-DNA定量檢測結(jié)果

1 30 3.69±0.89 5.52±1.37 2 60 3.67±0.85 5.29±1.32 3 120 3.58±0.93 5.45±1.36 4 240 3.41±0.85 5.31±1.27

3 討論

HBV-DNA水平檢測可以反映乙肝患者的感染情況，為早期診斷與臨床治療提供依據(jù)，因此，低水平HBV-DNA檢測的重要性不言而喻，目前臨床檢測HBV-DNA水平主要采用熒光定量PCR檢測，其敏感度高，操作簡便，但抗干擾性不高，易受影響[2]，因此，本文主要研究高脂血與溶血標(biāo)本對低水平HBV-DNA測定的影響。

研究數(shù)據(jù)顯示，血脂越高，HBV-DNA檢測值越低，溶血程度越高，HBV-DNA檢測值越低，總之，高血脂與溶血標(biāo)本對低水平HBV-DNA的PCR檢測存在影響，實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)中應(yīng)注意采取相關(guān)措施，提高監(jiān)測準(zhǔn)確性。

（作者單位：中江縣人民醫(yī)院）

[1] 張翠莉,劉萍,魏文波.脂血和溶血對HBV-DNA實(shí)時熒光定量PCR檢測的影響[J].武警醫(yī)學(xué),2012,23(02):150-152.

[2] 林森,易榮.實(shí)時熒光定量PCR對乙肝DNA檢測的影響因素[J].國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2012,33(01):127-128.