張馨月 鐘婷婷 鐘建橋 許飏

646000四川瀘州，西南醫(yī)科大學附屬醫(yī)院皮膚科（第一作者現(xiàn)在重慶醫(yī)科大學附屬大學城醫(yī)院皮膚科，401331）

·論著·

帶狀皰疹患者皰液及外周血病毒載量與血漿S100β和神經(jīng)元特異性烯醇化酶水平的研究

張馨月 鐘婷婷 鐘建橋 許飏

646000四川瀘州，西南醫(yī)科大學附屬醫(yī)院皮膚科（第一作者現(xiàn)在重慶醫(yī)科大學附屬大學城醫(yī)院皮膚科，401331）

目的 檢測帶狀皰疹患者皰液、血液水痘-帶狀皰疹病毒（VZV）DNA載量及血漿S100β蛋白、神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）濃度變化，并探討其相關性。方法 在西南醫(yī)科大學附屬醫(yī)院皮膚科收集50例急性期帶狀皰疹住院患者皰液、治療前后外周血標本和20例健康對照外周血標本。采用實時熒光定量PCR檢測皰液及外周血病毒載量，ELISA檢測血漿S100β蛋白、NSE濃度。結果 50例帶狀皰疹患者皰液中均檢測到VZV；治療前18例、治療后5例血液中測出VZV。對照組血液中均未測出VZV。急性期帶狀皰疹患者皰液病毒載量與血漿S100β、NSE含量均呈正相關（r=0.535、0.430，均P＜0.05）。治療前血VZV陽性患者較血VZV陰性患者血漿S100β、NSE水平升高（均P＜0.05），血VZV DNA載量與血漿S100β、NSE均呈正相關（r=0.711、0.645，均P＜0.05）。結論 帶狀皰疹患者可檢測出VZV DNA，且急性期帶狀皰疹患者皰液、治療前血VZV DNA載量越高，血漿S100β、NSE水平越高。

帶狀皰疹；病毒載量；S100蛋白質類；磷酸丙酮酸水合酶；神經(jīng)損傷；S100β

帶狀皰疹是由水痘-帶狀皰疹病毒（VZV）感染引起的以神經(jīng)炎癥、皮膚皰疹為特征的皮膚病，可伴有不同程度的神經(jīng)損傷。S100、神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）是早期評估神經(jīng)損傷及預后的重要因子［1?2］，但目前未見帶狀皰疹與S100β和NSE的研究。研究表明，VZV病毒載量與帶狀皰疹臨床表現(xiàn)的嚴重程度有關，但是否與神經(jīng)損傷也存在相關性，目前尚不清楚。我們通過檢測急性期帶狀皰疹患者皰液、血液病毒載量及血漿S100β和NSE的變化，探討病毒載量與血漿S100β、NSE的關系，為臨床早期評估及預防帶狀皰疹神經(jīng)損傷提供依據(jù)。

對象與方法

一、對象

2014年5月至2014年10月，西南醫(yī)科大學附屬醫(yī)院皮膚科病房住院的帶狀皰疹患者50例，設為帶狀皰疹組，其中男26例，女24例，年齡33～83（59.61±13.88）歲。20例本院體檢中心體檢健康者設為對照組，其中男10例，女10例，年齡42～61（52.55±5.69）歲。其中帶狀皰疹組入組標準為：①具有典型的臨床癥狀及體征，符合帶狀皰疹診斷標準［3］；②具有皰壁完整、皰液總量≥200 μl的水皰；③患者病程＜7 d，發(fā)病后未經(jīng)任何治療。排除標準：①合并其他引起中樞或周圍神經(jīng)損傷的疾病的患者；②妊娠及哺乳期婦女；③合并嚴重的心、肺等系統(tǒng)性疾病的患者；④其他原因導致免疫力低下的患者，如惡性腫瘤、HIV感染、紅斑狼瘡等自身免疫性疾病患者，以及長期應用免疫抑制劑者；⑤精神病患者，或既往有精神病史和精神病家族史的患者；⑥住院時間不夠、住院期間發(fā)生其他重大事件（如過敏性休克、心跳驟停、嚴重感染等）、未抽取治療后血液標本或未完成隨訪等；⑦近期有消化道潰瘍、出血、精神癥狀及嚴重高血壓、高血糖或拒絕使用的個別患者；⑧兩次及以上的復發(fā)性帶狀皰疹、播散性帶狀皰疹、泛發(fā)性帶狀皰疹等特殊帶狀皰疹患者。兩組年齡、性別差異均無統(tǒng)計學意義。

本研究通過西南醫(yī)科大學附屬醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會批準，所有對象均簽署知情同意書。

帶狀皰疹組患者入院后口服伐昔洛韋0.3 g，每日2次，共9 d；維生素B1，每日100 mg肌內(nèi)注射，共14 d；維生素B12每日0.5 mg肌內(nèi)注射，共14 d；加巴噴丁每晚300 mg（據(jù)疼痛程度及反應調(diào)整劑量），共14 d。配合皮損處局部處理及紅光治療，潑尼松每日30 mg口服共7 d，并輔以免疫調(diào)節(jié)劑及活血止痛中藥聯(lián)合治療，14 d為1個療程。

二、主要試劑

人S100β蛋白酶聯(lián)免疫檢測試劑盒購自北京誠林生物科技有限公司，人NSE酶聯(lián)免疫檢測試劑盒購自北京誠林生物科技有限公司，VZV核酸測定試劑盒（PCR?熒光探針法）購自上海之江生物科技有限公司。

三、方法

1.皰液采集：經(jīng)無菌消毒后，采集患者入院第1天的皰液（不少于200 μl）于微量離心管，置于-80℃保存待檢。

2.血液采集及處理：分別用含乙二胺四乙酸（EDTA）的一次性采血管于治療前、治療14 d后無菌采集帶狀皰疹患者及對照組肘靜脈血8 ml，提取血漿和外周血淋巴細胞置于EP管內(nèi)，放入-80℃冰箱凍存待檢。

3.皰液及外周血淋巴細胞VZV DNA載量檢測：采用實時熒光定量PCR法檢測皰液及外周血淋巴細胞VZV DNA載量，操作步驟參照試劑盒說明書進行。

4.血漿S100β蛋白和NSE檢測：應用ELISA試劑盒檢測血漿S100β蛋白和NSE，操作步驟參照試劑盒說明書進行。

四、統(tǒng)計分析

用統(tǒng)計學軟件SPSS19.0進行統(tǒng)計描述與分析。計量資料采用±s表示，資料組間比較采用t檢驗。Pearson相關系數(shù)用于描述指標間的相關性。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

結果

一、VZV DNA載量表達比較

50例帶狀皰疹患者皰液均檢測出VZV DNA，載量為（374 879.34±117 681.59）拷貝∕ml。治療前18例（36%）外周血VZV DNA陽性，載量為（18 974.45± 28 301.88）拷貝∕ml；治療后5例（10%）陽性，載量為（239.91±872.25）拷貝∕ml。治療前皰液VZV DNA載量高于治療前、后外周血VZV DNA載量（Z值分別為-8.762，-9.039，均P＜0.05）。外周血治療前VZV DNA載量較治療后高（Z值為-3.724，P＜0.05）。18例治療前外周血VZV DNA陽性的帶狀皰疹患者中，血與皰液VZV DNA載量呈正相關（r=0.631，P＜0.05）。見圖1。對照組血液中均未測出VZV。

圖1 18例帶狀皰疹患者治療前外周血與皰液水痘-帶狀皰疹病毒（VZV）DNA載量關系散點圖

二、血漿S100β、NSE水平比較

血VZV陽性帶狀皰疹組治療前血漿S100β、NSE水平均較血VZV陰性帶狀皰疹患者高（P＜0.05），見表1。

表1 治療前血水痘-帶狀皰疹病毒（VZV）陽性與陰性的帶狀皰疹患者血漿S100β和神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）水平比較（ng∕L，±s）

表1 治療前血水痘-帶狀皰疹病毒（VZV）陽性與陰性的帶狀皰疹患者血漿S100β和神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）水平比較（ng∕L，±s）

分組血VZV陽性患者血VZV陰性患者t值P值例數(shù)18 32 S100β 173.25±19.12 155.07±20.14 3.119＜0.05 NSE 171.127±14.885 155.162±20.869 3.136＜0.05

三、VZV DNA載量與治療前S100β、NSE的相關性分析

1.皰液VZV DNA載量與治療前S100β、NSE的相關性：50例帶狀皰疹患者皰液VZV DNA載量與治療前S100β、NSE呈正相關（圖2，3），相關系數(shù)r值分別為0.535、0.430，均P＜0.05。

圖2 50例帶狀皰疹患者皰液水痘-帶狀皰疹病毒DNA載量與治療前血漿S100β關系散點圖

圖3 50例帶狀皰疹患者皰液水痘-帶狀皰疹病毒DNA載量與治療前血漿神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）關系散點圖

2.治療前外周血VZV DNA載量與S100β、NSE的相關性：治療前外周血VZV DNA陽性的18例帶狀皰疹患者血VZV DNA載量與血漿S100β、NSE呈正相關，相關系數(shù)r值分別為0.711、0.645，均P＜0.05。見圖4，5。

討論

本研究50例患者中，治療前后血中VZV DNA陽性率分別為36%和10%，表明VZV并不僅是沿神經(jīng)纖維移至皮膚，同時也可局部擴散入血，導致部分患者治療前出現(xiàn)VZV DNA血癥，甚至治療后遺留VZV DNA血癥。帶狀皰疹患者皰液與血VZV DNA載量具有一定的相關性，皰液中病毒載量越高，血VZV DNA越高。但并非所有皰液VZV DNA載量高者血中均可測出VZV DNA。故引起帶狀皰疹患者出現(xiàn)VZV DNA血癥的原因除了與皰液VZV DNA載量高有關外，還可能有其他因素，如年齡、部位、免疫力、皮損面積、糖尿病以及合并腫瘤等［4］，需擴大樣本量進一步研究。

研究表明，血漿S100β蛋白的水平可初步反映神經(jīng)損傷的嚴重程度，S100β含量越高，神經(jīng)損傷越重，預后越差［2，5］。NSE作為神經(jīng)元的標志酶，在絕大多數(shù)神經(jīng)損傷的疾病中神經(jīng)元和神經(jīng)膠質細胞均會有不同程度的損傷［6］，兩者同時檢測，可增加敏感性和特異性。

本研究顯示，治療前血VZV陽性患者血漿S100β、NSE均較陰性患者高，提示當患者出現(xiàn)VZVDNA血癥時，神經(jīng)損傷程度可能更重。臨床上應特別加強這類患者的抗病毒治療和神經(jīng)損傷的監(jiān)測和隨訪，如腦電圖、CT、MRI以及腦脊液等檢查。

圖4 18例帶狀皰疹患者治療前外周血水痘-帶狀皰疹病毒DNA載量與血漿S100β關系散點圖

圖5 18例帶狀皰疹患者治療前外周血水痘-帶狀皰疹病毒DNA載量與血漿神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）關系散點圖

編后記 本文帶狀皰疹患者均應用了核苷類抗病毒藥和1周糖皮質激素。關于糖皮質激素在帶狀皰疹治療中的應用，目前皮膚科學界有不同觀點。一般較公認的觀點是：高齡帶狀皰疹患者、有基礎疾病或免疫受損（如應用免疫抑制劑）或重癥帶狀皰疹（疼痛劇烈、皮損面積大或有出血壞死等表現(xiàn)）可以在充分抗病毒基礎上，根據(jù)病情短期使用系統(tǒng)性糖皮質激素。

［1］Thelin EP,Johannesson L,Nelson D,et al.S100B is an important outcome predictor in traumatic brain injury［J］.J Neurotrauma, 2013,30（7）:519?528.DOI:10.1089∕neu.2012.2553.

［2］Beer C,Blacker D,Bynevelt M,et al.Systemic markers of inflammation are independently associated with S100B concentration:results of an observational study in subjects with acute ischaemic stroke［J］.J Neuroinflammation,2010,7:71. DOI:10.1186∕1742?2094?7?71.

［3］趙辨.中國臨床皮膚病學［M］.江蘇：江蘇科學技術出版社, 2010:394?398.

［4］Quinlivan ML,Ayres KL,Kelly PJ,et al.Persistence of varicella?zoster virus viraemia in patients with herpes zoster［J］.J Clin Virol,2011,50（2）:130?135.DOI:10.1016∕j.jcv.2010.10.014.

［5］Thelin EP,Johannesson L,Nelson D,et al.S100B is an important outcome predictor in traumatic brain injury［J］.J Neurotrauma, 2013,30（7）:519?528.DOI:10.1089∕neu.2012.2553.

［6］Undén J,Ingebrigtsen T,Romner B.Management of minor head injuries with the help of a blood test.S100B analysis can reduce the number of CT examinations and patient admissions［J］. Lakartidningen,2008,105（24?25）:1846?1848.

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Correlation of plasma levels of S100β protein and neuron?specific enolase with viral load in vesicle fluid and peripheral blood of patients with herpes zoster

Zhang Xinyue,Zhong Tingting,Zhong Jianqiao,Xu Yang
Department of Dermatology,The Affiliated Hospital of Southwest Medical University,Luzhou 646000, Sichuan,China（the current affiliation of the first author was Department of Dermatology,University?Town Hospital of Chongqing Medical University,Chongqing 401331,China）

Xu Yang,Email:xxff2007@163.com

Objective To detect the varicella?zoster virus（VZV）DNA load in vesicle fluid and peripheral blood,as well as plasma levels of S100β protein and neuron?specific enolase（NSE）in patients with herpes zoster before and after treatment,and to explore their correlations.Methods Vesicle fluid samples were collected before treatment,and peripheral blood samples before and after treatment from 50 inpatients with acute herpes zoster in the Department of Dermatology of the Affiliated Hospital of Southwest Medical University,and peripheral blood samples were also obtained from 20 healthy controls.Real?time fluorescence?based quantitative PCR（qRT?PCR）was performed to determine the viral load in the vesicle fluid and peripheral blood samples,and enzyme?linked immunosorbent assay（ELISA）to detect the plasma levels of S100β protein and NSE.Results VZV DNA was present in all the vesicle fluid samples,as well as in peripheral blood samples from 18 patients before treatment and 5 patients after treatment,but not found in any of the healthy controls.Positive correlation was found between the viral load in vesicle fluid and plasma levels of S100β protein and NSE（r=0.535,0.430,respectively,both P＜0.05）in the patients with acute herpes zoster.Before treatment,patients with VZV DNA in peripheral blood showed significantly increased plasma levels of S100β protein and NSE compared with those without（both P＜0.05）,and the viral load in peripheral blood was positively correlated with plasma levels of S100β protein and NSE（r= 0.711,0.645,respectively,both P＜0.05）.Conclusion VZV DNA is present in some patients with herpes zoster,and increased VZV DNA loads in the vesicle fluid and peripheral blood are related to elevated plasma levels of S100β protein and NSE before treatment.

Herpes zoster;Viral load;S100 proteins;Phosphopyruvate hydratase;Nerve injury; S100β

許飏，Email：xxff2007@163.com

10.3760∕cma.j.issn.0412?4030.2017.02.009

四川省衛(wèi)生計生委科研課題（16PJ556）；西南醫(yī)科大學附屬醫(yī)院課題（12306）

Fund programs:Scientific Research Project of Health and Family Planning Commission of Sichuan Province（16PJ556）;Project of the Affiliated Hospital of Southwest Medical University（12306）

2016?03?18）

（本文編輯：尚淑賢）