□ 許 瑤 安徽省食品藥品檢驗(yàn)研究院

茶葉中草酸含量的測(cè)定

□ 許 瑤 安徽省食品藥品檢驗(yàn)研究院

采用反相高效液相色譜法檢測(cè)鐵觀音中草酸的含量。結(jié)果表明：采用C18色譜柱，在流動(dòng)相為甲醇：0.02%（NH4）2HPO4溶液=5:95，檢測(cè)波長(zhǎng)為197 nm，柱溫25 ℃，進(jìn)樣量20 μL，流速0.8 mL/min的色譜條件下，檢測(cè)鐵觀音中草酸含量為0.27%。通過(guò)重復(fù)性試驗(yàn)、穩(wěn)定性試驗(yàn)和加樣回收實(shí)驗(yàn)來(lái)驗(yàn)證結(jié)果的穩(wěn)定性和可靠性。本實(shí)驗(yàn)峰面積和濃度之間有良好的線性關(guān)系，R2=0.999 6?；厥章史秶鸀?，RSD=1.09%～1.87%。

茶葉；草酸；反相高效液相色譜

草酸以草酸鹽的形式普遍存在于大多數(shù)的植物中，其中在蔬菜、水果和飲品中含量很高，而它其實(shí)也是一種致命的危險(xiǎn)的化學(xué)物質(zhì)[1]。人若口服草酸即發(fā)生胃腸道炎、虛脫、抽搐和休克等癥狀以至死亡。吸入草酸蒸汽者會(huì)發(fā)生慢性中毒，而且草酸還會(huì)與人體內(nèi)的Ca2+形成結(jié)石，對(duì)人身體造成傷害。草酸存在于很多食品中，其中茶葉中就含有較多的草酸[2]。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

草酸標(biāo)準(zhǔn)品、超純水、磷酸氫二銨、鐵觀音、甲醇、高效液相色譜儀。

1.2 色譜條件

本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜儀帶紫外檢測(cè)器，色譜柱為C18色譜柱，流動(dòng)相為甲醇：0.02%的（NH4）2HPO4=5:95，檢測(cè)波長(zhǎng)為197 nm，柱溫25 ℃，進(jìn)樣量 20 μL，流速 0.8 mL/min。

1.3 樣品制備

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備

精密稱取草酸標(biāo)準(zhǔn)品25.00 mg，置于25 mL的容量瓶中，加入超純水定容，搖勻使其充分溶解，逐級(jí)稀釋后得0、20、100、200L、300、400、500 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.3.2 供試品溶液的制備

精密稱取待測(cè)茶葉1.000 0 g，分別加入50 mL沸水，浸泡20 min后倒出上層溶液，離心取上清液，過(guò)25 μm的微孔濾膜后，用HPLC分析。

1.4 草酸含量的測(cè)定

按照1.2所提供的色譜條件，來(lái)測(cè)定茶葉樣品中草酸的峰面積。利用回歸方程計(jì)算草酸濃度。草酸含量=（草酸濃度×提取液體積）/茶葉樣品質(zhì)量×100%

表1 回收率試驗(yàn)數(shù)據(jù)記錄及處理

2 結(jié)果與討論

2.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的確定

通過(guò)實(shí)驗(yàn)，用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)對(duì)100 μg/mL的草酸溶液進(jìn)行掃描，表明，在197 nm處有最大吸收峰，所以確定HPLC的檢測(cè)波長(zhǎng)為197 nm。

2.2 樣品浸泡時(shí)間的確定

用沸水浸泡好茶葉后，分別在10、20、30、40、50、60 min的 時(shí) 間點(diǎn)處取出上清液，用高效液相色譜檢測(cè)峰面積，依次為711.13、1000.75、1125.25、1027.38、1025.74、1021.36 mv.sec。從節(jié)約時(shí)間方面考慮，確定30 min為最佳浸泡時(shí)間。

2.3 線性關(guān)系的考察

用高效液相色譜儀測(cè)定草酸標(biāo)準(zhǔn)溶液峰面積。以濃度（μg/mL）為橫坐標(biāo)，峰面積（mv.sec）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明，在0～500 μg/mL的范圍內(nèi)，草酸標(biāo)準(zhǔn)品的濃度與峰面積有良好的線性關(guān)系，即Y=33.405X+749.32，R2=0.999 6。

2.4 精密度試驗(yàn)

準(zhǔn)確吸取300 μg/mL的草酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液20 μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，所得峰面積數(shù)據(jù)表明，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.2%，小于2.0%，說(shuō)明儀器的精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

按照1.3.2所示方法配置供試品溶液，分別在0、1、2、4、8、12 h后注入高效液相色譜儀中，所測(cè)結(jié)果數(shù)據(jù)基本一致，RSD=1.2%。說(shuō)明供試品溶液在12 h內(nèi)基本穩(wěn)定。2.6 樣品含量的測(cè)定

將茶葉樣品按照1.3.2所示方法來(lái)測(cè)定草酸的含量。通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算，草酸含量為0.27%。

2.7 回收率實(shí)驗(yàn)

取同一已知含量的鐵觀音茶葉供試品溶液5份，分別加入一定量的草酸標(biāo)準(zhǔn)品。在同一色譜條件下測(cè)定草酸峰面積，若草酸的平均回收率在95%～105%，則認(rèn)定檢測(cè)方法可靠?；厥章试囼?yàn)數(shù)據(jù)記錄及處理，見(jiàn)表1。

草酸回收率=（加入草酸標(biāo)準(zhǔn)品后的含量-未加草酸標(biāo)品的含量）/加入草酸的含量×100%

3 結(jié)論

采用反相高效液相色譜法對(duì)鐵觀音中的草酸進(jìn)行含量分析，結(jié)果表明，鐵觀音茶葉中草酸含量為0.27%。通過(guò)精密度試驗(yàn)、穩(wěn)定性試驗(yàn)和加樣回收試驗(yàn)來(lái)驗(yàn)證了檢測(cè)方法的準(zhǔn)確性。結(jié)果表明：該方法精確、簡(jiǎn)便，為草酸在茶葉中的含量的測(cè)定提供參考。參考文獻(xiàn)

[1]張貴生.茶葉標(biāo)準(zhǔn)研究進(jìn)展[J].茶葉通訊,2009(4):32-37.

[2]裴亭.高效液相色譜法測(cè)定茶葉中煙酸的含量[J].茶葉科學(xué),2011(2):124-128.