赫玉芳 王 雪 趙昱瑋 司學玲 于 淼 南敏倫▲

1.吉林省中醫(yī)藥科學院，吉林長春 130012；2.吉林農(nóng)業(yè)大學，吉林長春 130118；3.修正藥業(yè)集團長春高新制藥有限公司，吉林長春 130012；4.長春三德天晟科技有限公司，吉林長春 130012

不同前處理方法測定林蛙牛骨膠囊中鈣含量實驗對比研究

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1.吉林省中醫(yī)藥科學院，吉林長春 130012；2.吉林農(nóng)業(yè)大學，吉林長春 130118；3.修正藥業(yè)集團長春高新制藥有限公司，吉林長春 130012；4.長春三德天晟科技有限公司，吉林長春 130012

目的建立保健食品林蛙牛骨膠囊中鈣的含量測定方法。方法樣品采用濕法消解﹑微波消解法﹑壓力罐消解及干法灰化處理樣品，以火焰原子吸收光譜法對林蛙牛骨膠囊中鈣的含量進行對比研究，比較不同消解方法的精密度﹑重復性及回收率等。結(jié)果濕法消解﹑微波消解法﹑壓力罐消解測定林蛙牛骨膠囊中鈣平均回收率分別為99.16%﹑98.90%﹑97.83%。結(jié)論采用微波消解法進行前處理更簡便﹑更快捷，測得樣品中鈣的含量也相對較高，更適用于林蛙牛骨膠囊中鈣含量的測定。

火焰原子吸收光譜法；林蛙牛骨膠囊；鈣

林蛙牛骨膠囊中的鈣是其主要的功效成分也是人體所必需的營養(yǎng)物質(zhì)，并且在維持人體循環(huán)﹑神經(jīng)﹑內(nèi)分泌﹑消化﹑骨骼﹑免疫等多項生理功能具有調(diào)節(jié)作用。測定樣品中鈣的含量主要按照GB 5009.92-2016《食品安全國家標準 食品中鈣的測定》進行測定，其中樣品的前處理方法對實驗結(jié)果有影響，本文主要針對樣品前處理濕法消解法﹑微波消解法﹑壓力罐消解法及干法灰化對鈣含量測定的影響進行比較分析研究[1]。從而對林蛙牛骨膠囊中鈣的含量進行測定分析，確定最佳的前處理方法，為制定林蛙牛骨膠囊中鈣的含量測定方法提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

林蛙牛骨膠囊自制；氧化鑭﹑高氯酸﹑鹽酸﹑硝酸（均為優(yōu)級純）北京化工廠；水為超純水；碳酸鈣（純度為99.99%）中國計量科學研究院。

1.2 儀器與設備

AA-6300C型原子吸收光譜儀（配火焰原子化器，鈣空心陰極燈）（日本島津）；分析天平（Sartorius）；MSP-6600微波消解儀（杭州德茂科技有限公司）；可調(diào)式電熱爐（永康市格力王實業(yè)有限公司）；可調(diào)式電熱板（武漢格萊莫檢測設備有限公司）；壓力消解罐（濱海正紅塑料廠）；馬弗爐（上海均珂儀器科技有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 測定依據(jù)

按GB 5009.92-2016《食品安全國家標準 食品中鈣的測定》中第一法火焰原子吸收光譜法測定林蛙牛骨膠囊中鈣的含量。

2.2 樣品處理

2.2.1 濕法消解 取林蛙牛骨膠囊，研細，取0.5g，精密稱定，置消化管中，加入10mL硝酸及0.5mL高氯酸，在可調(diào)式電熱板上消解（參考條件：120℃/h﹑升至180℃/3h﹑升至200～220℃)。消解至消化液為無色透明或稍微帶黃色，若消化液顏色較深,再加硝酸,繼續(xù)消化。消化結(jié)束后，取出消化管,用水轉(zhuǎn)移至500mL量瓶中，加入50mL鑭溶液（20g/L），并定容至刻度，備用[1-2]。

2.2.2 微波消解 取林蛙牛骨膠囊，研細，取0.5g，精密稱定，置微波消解罐中，加入5mL硝酸，120℃升溫 5min，恒溫 5min，160℃升溫 5min，恒溫10min，180℃升溫 5min，恒溫 10min，冷卻后取出，在140℃電熱板上驅(qū)趕酸至1mL左右。放冷后，用水轉(zhuǎn)移至500mL量瓶中，加入50mL鑭溶液(20g/L)，并定容至刻度，備用[1-2]。

2.2.3 壓力罐消解 取林蛙牛骨膠囊，研細，取0.5g，精密稱定，置消解罐中，加入5mL硝酸。蓋好內(nèi)蓋，旋緊不銹鋼外套，放入干燥箱，于150℃保持5h。冷卻后取出消解內(nèi)罐，在140℃電熱板上驅(qū)趕酸至1 mL左右。放冷后，用水轉(zhuǎn)移至500mL量瓶中，加入50mL鑭溶液（20g/L），并定容至刻度，備用[1-2]。2.2.4 干法灰化 取林蛙牛骨膠囊，研細，取0.5g，精密稱定，置坩堝中，小火加熱至無煙，取出，放入馬弗爐中，在550℃灰化4h，取出。加入數(shù)滴硝酸，小火加熱蒸干，再放入550℃馬爐中，灰化2h，取出，用適量硝酸溶液（1+1）溶解轉(zhuǎn)移至至500mL量瓶中，加入50mL鑭溶液（20g/L），并用水定容至刻度，備用[1-2]。

2.3 儀器條件

波長（nm）：422.7；燈電流（mA）：10；狹縫寬（nm）：1.3；燃燒頭高度（mm）：3；空氣流量（L/min）：9；乙炔流量（L/min）：2[1]。

2.4 標準曲線的繪制

準確稱取2.4963g碳酸鈣，置1000mL容量瓶中，加（1+1）鹽酸溶液溶解，加水定容至刻度，搖勻，作為鈣標準儲備液；準確吸取鈣標準儲備液5mL于50mL量瓶中，加（5+95）硝酸溶液至刻度，混勻，作為鈣標準中間液；分別吸取鈣標準中間液0﹑0.5﹑1.0﹑2.00﹑4.00﹑6.00mL 于 100mL 量瓶中，另在各容量瓶中加入5mL鑭溶液（20g/L），最后加（5+95）硝酸溶液定容至刻度，混勻。此配制的鈣標準系列溶液中鈣的質(zhì)量濃度分別為 0﹑0.500﹑1.00﹑2.00﹑4.00和6.00mg/L。用原子吸收光譜法測定，以濃度為橫坐標，吸收值為縱坐標，計算回歸方程，實驗結(jié)果表明，鈣在0～6.00mg/L之間線性良好，線性方程為A=0.0048C+0.0035，r=0.9998。

2.5 精密度試驗

取林蛙牛骨膠囊，取0.5g，研細，精密稱定，分別按“2.1”項下方法分別制備供試品溶液，每個樣連續(xù)測定6次，計算樣品中鈣的含量及RSD，結(jié)果表明，濕法消解﹑微波消解﹑壓力罐消解﹑干法灰化測定鈣的含量分別為：3.75×103﹑3.98×103﹑3.84×103﹑3.62×103mg/kg，RSD 分 別 為 1.25%﹑1.33%﹑1.84%﹑1.77%；表明儀器精密度良好。

2.6 重復性試驗

取林蛙牛骨膠囊，取0.5g，研細，精密稱定，分別按“2.1”項下方法進行平行試驗6份，計算樣品中鈣的含量及RSD，結(jié)果表明，濕法消解﹑微波消解﹑壓力罐消解﹑干法灰化測定鈣的含量分別為：3.77×103﹑3.96×103﹑3.82×103﹑3.53×103mg/kg，RSD分別為 1.36%﹑1.28%﹑1.90%﹑2.55%；表明除干法灰化外，其余三種樣品處理方法均具有良好的重復性。

2.7 加樣回收率試驗

除干法灰化外，其余三種樣品處理方法進行回收率測定，取林蛙牛骨膠囊（鈣含量分別為3.77×103﹑3.96×103﹑3.82×103mg/kg），研 細，取0.25g，精密稱定，共6份，分別精密加入一定濃度的鈣標準品溶液，測定，計算回收率。結(jié)果見表1。

3 討論

目前市場中銷售的保健食品大多為高鈣保健食品，多以骨及骨髓為原料，這種原料中含有的金屬離子較多，如：Mn2+﹑Mg2+﹑Fe3+﹑Cu2+﹑Zn2+等，采用常用的EDTA法進行定量時，金屬離子會對反應進行干擾，反應終點顏色不容易觀察[3-5]。一般滴定法中均加入檸檬酸銨來消除鎂的干擾，但是，檸檬酸銨不僅可以掩蔽鎂離子，也能掩蔽鈣離子，對鈣的含量測定有影響，若是將測定液的pH值調(diào)至12～13，測定液中的鎂可形成沉淀，但是，鈣和指示劑形成絡合物，所以，一般滴定反應測定的結(jié)果均不準確。本文采用原子吸收光譜法測定保健食品林蛙牛骨膠囊中鈣含量，較EDTA法具有結(jié)果更加準確﹑選擇性好﹑干擾小﹑簡單﹑快速的特點[6-10]。

通過采用不同前處理方法測定林蛙牛骨膠囊中鈣含量進行對比分析研究，實驗結(jié)果表明，采用濕法消解﹑微波消解法及壓力消解法均能滿足樣品中鈣分析的要求。但干法灰化法處理的樣品重現(xiàn)性較差，不適合本樣品鈣含量測定的樣品前處理。濕法消解法及壓力消解法測定樣品中鈣的含量相對較低，并且濕法消解時間較長，環(huán)境影響較大。但是利用微波消解法可以避免上述問題，具有時間較短，測定偏差小，消化液使用量少，對環(huán)境的污染小等特點，樣品處理更簡便快捷，測定結(jié)果更準確[10-15]。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果

目前為止，微波消解是比較先進的樣品前處理技術，樣品中物質(zhì)分子在電磁場作用下發(fā)生瞬時極化，樣品與消解液混合物吸收微波能量之后，由于離子傳導與偶極子轉(zhuǎn)動，產(chǎn)生內(nèi)部熱效應，迅速提高反應體系的溫度，消解液分解試樣，使被測組分釋放出來便于測定。本文通過采用濕法消解法﹑微波消解法﹑壓力罐消解法及干法灰化等不同的前處理方法測定林蛙牛骨膠囊中鈣的含量進行比對研究，表明微波消解法前處理方法更適用于林蛙牛骨膠囊中鈣的含量測定。

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Comparative study on the determination of calcium content in Linwa Niugu Capsule by different pretreatment methods

HE Yufang1WANG Xue2ZHAO Yuwei1SI Xueling3YU Miao4NAN Minlun1
1.Jilin Provincial Academy of Traditional Chinese Medicine,Changchun 130012,China;2.Jilin Agricultural University,Changchun 130118,China;3.Xiuzheng Pharmaceutical Group Changchun High Tech Pharmaceutical Co.Ltd.,Changchun 130012,China;4.Changchun Sande Tiansheng Technology Co. Ltd.,Changchun 130012,China

ObjectiveTo establish a method for determination of calcium content in Linwa Niugu Capsule.MethodsThe samples were treated by wet digestion,microwave digestion,pressure digestion and dry ashing.Calcium content in Linwa Niugu Capsule were contrastive studyed by flame atomic absorption spectrometry.The precision,repeatability and recovery rate of different digestion methods were compared.Results The average recoveries of calcium in the Linwa Niugu Capsule were respectively 99.16%,98.90%,and 97.83%,which were determined by wet digestion,microwave digestion,pressure tank digestion and dry ashing method.ConclusionIt is easier and faster to pretreat with microwave digestion method,and the content of calcium in the sample is relatively higher,which is more suitable for the determination of calcium in Linwa Niugu Capsule.

Flame atomic absorption spectrometry;Linwa Niugu Capsule;Calcium

R284. 1

A

2095-0616（2017）19-35-03

吉林省科技發(fā)展計劃項目（20150307013YY）。

2017-06-28）