項冰倩， 何金波， 高 慧， 羅梓垠， 戴雍月△， 王萬鐵△

(1. 溫州醫(yī)科大學缺血/再灌注損傷研究所, 浙江溫州 325035； 2. 十堰市太和醫(yī)院， 湖北十堰 442000)

右美托咪啶對肺缺血/再灌注損傷大鼠促炎介質IL-1β、TNF-α水平的影響及其機制*

項冰倩1， 何金波2， 高 慧1， 羅梓垠1， 戴雍月1△， 王萬鐵1△

(1. 溫州醫(yī)科大學缺血/再灌注損傷研究所, 浙江溫州 325035； 2. 十堰市太和醫(yī)院， 湖北十堰 442000)

目的評價右美托咪啶對大鼠肺缺血/再灌注損傷時促炎介質腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)的影響及機制。方法雄性健康SPF級SD大鼠50只，體重250～310 g，8～12周齡，采用隨機數(shù)字表法分為5組(n=10)：假手術組(sham組)、缺血/再灌注損傷組(I/R組)、右美托咪啶組(Dex組)、阿替美唑組(Atip組)、右美托咪啶+阿替美唑組(Dex+Atip組)。采用大鼠在體左側肺門夾閉30 min再灌注2 h制備缺血/再灌注(I/R)模型，Dex組、Atip組、Dex+Atip組分別在肺門阻斷前30 min腹腔注射右美托咪啶(20 μg/kg)、阿替美唑(250 μg/kg)、右美托咪啶(20 μg/kg)和阿替美唑(250 μg/kg)，其余處理同I/R組。實驗結束后留取左肺檢測肺濕干重比 (W/D)和肺水含量 (TLW) ；光、電鏡觀察肺組織形態(tài)結構變化；ELISA檢測血漿中IL-1β及TNF-α的水平。結果與sham組相比，其余各組W/D、TLW、IL-1β和TNF-α的水平明顯升高(P<0.05，P<0.01)，光、電鏡均顯示肺組織結構出現(xiàn)明顯損傷性變化；與 I/R組、Atip組、Dex+Atip組相比，Dex組W/D、TLW、IL-1β及TNF-α的含量下降(P<0.05，P<0.01)，光、電鏡下肺組織損傷減輕；I/R組、Atip組、Dex+Atip組兩兩比較，以上各指標均無統(tǒng)計學差異。結論右美托咪啶通過降低促炎介質IL-1β、TNF-α濃度減輕大鼠肺缺血/再灌注損傷，其機制可能與激動α2-腎上腺素受體有關。

右美托咪啶；缺血/再灌注損傷；促炎介質；IL-1β；TNF-α；大鼠

缺血/再灌注損傷(ischemia/reperfusion injury，I/RI)是指當缺血組織重新獲得血流后，不但不能減輕或恢復組織缺血性損害，反而加重缺血性損傷。隨著肺移植等治療方式在臨床上的大量應用，越來越多的研究發(fā)現(xiàn)，盡管移植手術很成功，但臨床上最終治療效果及預后卻不容樂觀，最重要的原因是肺移植術后發(fā)生的肺缺血/再灌注損傷(pulmonary ischemia/reperfusion injury，PI/RI)。有研究表明，肺移植手術過程中發(fā)生缺血/再灌注損傷的幾率高達25%[1]，最嚴重的可繼發(fā)急性肺損傷(acute lung injury，ALI)或急性呼吸窘迫綜合征(acute respiratory distress syndrome，ARDS)。PI/RI的病理過程很復雜，具體發(fā)病機制至今不明，研究發(fā)現(xiàn)其與氧自由基的釋放、鈣穩(wěn)態(tài)的失衡以及脂質過氧化、炎性因子的釋放增多有密切相關[2,3]。

腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)和白介素1β(interleukin 1 beta ，IL-1β)是最常見的促炎細胞因子，也是重要的前炎癥細胞因子。TNF-α是一種主要由巨噬細胞和單核細胞產(chǎn)生的促炎細胞因子，對正常細胞無明顯損傷作用，但能在體內外直接殺死腫瘤細胞或抑制細胞增殖。IL-1β主要由活化的單核巨噬細胞產(chǎn)生，被認為是最經(jīng)典的炎癥調節(jié)劑，是調節(jié)炎癥的始動因素。右美托咪啶是新型α2受體激動藥，具有鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、抑制交感活性等作用。已有研究表明[4-6]，右美托咪啶對腦、心、肺缺血/再灌注損傷具有保護作用，但具體作用機制尚未進一步闡明。本研究擬評價右美托咪啶對大鼠PI/RI時促炎介質IL-1β和TNF-α的影響及其機制，為明確其減輕PI/RI的機制提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

雄性健康SPF級SD大鼠50只，體重250 g～310 g，8～12周齡，由溫州醫(yī)科大學實驗動物中心提供【SYXK(浙)2010-0150】。

1.2 藥品與試劑

20%烏拉坦(生工生物工程股份有限公司，中國)；右美托咪啶、阿替美唑(江蘇恒瑞制藥有限公司，中國)；BCA試劑盒(碧云天生物技術研究所，中國)；IL-1β、TNF-α ELISA試劑盒(上海西唐生物科技有限公司，中國)。

1.3 實驗分組

實驗動物按隨機數(shù)字表法分為5組(n=10)：假手術組(sham組)、缺血/再灌注損傷組( I/R組)、右美托咪啶組(Dex組)、阿替美唑(atipamezole，Atip)組(Atip組)、右美托咪啶+阿替美唑組(Dex+Atip組)。Dex組、Atip組、Dex+Atip組分別在手術前30 min腹腔注射右美托咪啶(20 μg/kg)、阿替美唑(250 μg/kg)、右美托咪啶(20 μg/kg)和阿替美唑(250 μg/kg)。實驗結束后留取左肺組織。

1.4 模型制作

依據(jù)文獻采用SD大鼠在體左側肺門夾閉制備I/R模型[7]。20%烏拉坦(7 ml/kg)腹腔注射麻醉，消毒胸頸部皮膚后切開并分離皮下組織和肌肉，暴露氣管T型切開，氣管插管后接呼吸機行機械通氣,呼吸機參數(shù)為：吸呼比為3∶4，呼吸頻率為70次/分，100%氧濃度，潮氣量30 ml/kg。于左胸部3-5肋間處開胸并游離左側肺門，肝素50 U/kg靜脈注射5 min后動脈夾阻斷左肺門30 min，30 min后恢復血流再灌注2 h。實驗結束后采集血樣，留取左肺組織。sham組僅開胸不夾閉肺門，機械通氣150 min；其余4組行左肺門阻斷30 min，再灌注2 h；Dex組、Atip組、Dex+Atip組分別在肺門阻斷前30 min腹腔注射右美托咪啶(20 μg/kg)、特異性α2-腎上腺素受體阻滯劑阿替美唑(250 μg/kg)、右美托咪啶(20 μg/kg)和阿替美唑(250 μg/kg)。

1.5 肺 W/D 和TLW檢測

左肺上葉組織經(jīng)生理鹽水漂洗干凈后用濾紙吸干殘留水分，稱取的重量為濕重( wet weight，W)；在干燥箱烘干24 h后稱重，為干重( dry weight，D)，肺干濕比(wet weight to dry/weight of lung tissue,W/D)為兩者之比。肺水含量(total lung water content,TLW)的公式為TLW=(W-D)/D 。

1.6光鏡下肺組織形態(tài)學觀察及肺泡損傷定量評估

取左肺下葉約0.5cm3組織若干塊，經(jīng)4%多聚甲醛固定數(shù)天后石蠟包埋切片，HE染色后光鏡下觀察組織學改變。高倍鏡(×400)下每組切片隨機觀察10個視野，計數(shù)每個視野下?lián)p傷肺泡數(shù)及總肺泡數(shù)。肺泡內有滲出液或超過2個肺泡內含紅細胞或白細胞均判為損傷肺泡，肺泡損傷評估指數(shù)(index of quantitative assessment，IQA)為損傷肺泡數(shù)占總肺泡數(shù)百分比。

1.7 掃描電鏡觀察肺組織的變化

再灌注結束后迅速在左肺門處取出肺組織，放置于蠟板上，滴上2.5%戊二醛固定液，用雙刀切割法切取約1 mm3大小若干塊，再浸入裝有2.5%戊二醛固定液的標本瓶內，并放置于4℃冰箱內固定2 h以上，依次經(jīng)1% 鋨酸后固定，1%醋酸鈾塊染，丙酮梯度脫水，環(huán)氧樹脂包埋劑包埋聚合，半薄切片定位肺泡上皮細胞后并超薄切片，醋酸鈾-檸檬酸鉛雙重染色后H-7500透射電鏡下觀察并拍照。

1.8 ELISA檢測TNF-α和IL-1β濃度變化

各組SD大鼠分別于再灌注結束時右心房取血3 ml，待血液凝固后離心3 000 r/min (4℃)，15 min，取上清液用BCA試劑盒進行蛋白定量，分別用大鼠TNF-α和IL-1β ELISA試劑盒進行TNF-α和IL-1β濃度檢測。酶標儀檢測OD值并計算總蛋白濃度、TNF-α和IL-1β濃度。IL-1β與總蛋白濃度比為IL-1β的相對濃度，以TNF-α濃度與總蛋白濃度比值表示TNF-α的相對濃度。

1.9 統(tǒng)計學分析

2 結果

2.1 各組肺T LW和W/D的比較

與sham組相比，其余各組肺組織水腫明顯加重，TLW和W/D值升高明顯(P< 0.05，P<0.01)；與I/R、Atip、Dex+Atip組相比， Dex組肺組織水腫改善明顯，TLW、W/D亦有下降, 差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；Atip組、Dex+Atip組、I/R組兩兩比較，差異無統(tǒng)計學意義(表1)。

GroupW/DTLWIQA(%)Sham1.98±1.950.98±1.951.98±1.95I/R5.09±0.38**4.09±0.38**5.09±0.38**Dex2.88±0.39*##1.88±0.39*##2.88±0.39**##Atip5.36±0.39**ΔΔ4.36±0.39**ΔΔ5.36±0.39**ΔΔDex+Atip5.38±0.39**ΔΔ4.38±0.39**ΔΔ5.38±0.39**ΔΔ

W/D: Wet/Dry weight; TLW: Total lung water content; IQA: Index of quantitative assessment; I/R: Ischemia/reperfusion injury; Dex: Dexmedetomidine; Atip: Atipamezole; Dex+Atip: Dexmedetomidine + Atipamezole

*P<0.05,**P<0.01vssham group;##P<0.01vsI/R group;ΔΔP<0.01vsDex group

2.2光鏡下各組肺組織形態(tài)學和肺泡損傷評估指數(shù)的比較

Sham組肺間質與肺泡完整，無明顯損傷，炎癥細胞無浸潤，IQA較低；I/R組、Atip組、Dex+Atip組肺泡結構紊亂，間質和肺泡壁均出現(xiàn)水腫增厚，肺泡內可見紅細胞漏出或滲出液。三組IQA兩兩比較，差異無統(tǒng)計學意義；與I/R組相比，Dex組肺組織損傷明顯減輕，肺泡結構較完整，肺泡內炎癥細胞減少，水腫減輕，IQA值下降明顯，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01，表1，圖1)。

Fig.1Histological changes of left lung tissues in each group (HE ×400)

A: Sham group; B: Ischemia/reperfusion injury group; C: Dexmedetomidine group; D: Atipamezole group; E: Dexmedetomidine + Atipamezole group

2.3 電鏡下各組肺組織超微結構的比較

Sham組肺泡II型上皮細胞結構基本完整，線粒體嵴清晰可見，板層小體未見異常，微絨毛排列整齊；I/R組肺泡II型上皮細胞結構紊亂，線粒體高度水腫，線粒體嵴消失，板層小體出現(xiàn)嚴重空泡化，微絨毛結構消失，出現(xiàn)核固縮、溶解； Dex組較I/R組肺泡II型上皮細胞損傷減輕，板層小體數(shù)目較多，未見空泡化，線粒體結構相對完整，線粒體嵴清晰，微絨毛結構可見；Atip組和Dex+Atip組肺泡II型上皮細胞結構也出現(xiàn)嚴重損害，線粒體水腫，嵴消失，板層小體減少并空泡化，核碎裂，損傷程度與I/R組相當(圖2)。

Fig.2Ultrastructure changes of left lung tissue in each group(×10 000)

A: Sham group; B: Ischemia/reperfusion injury group; C: Dexmedetomidine group; D: Atipamezole group; E: Dexmedetomidine + Atipamezole group

2.4各組大鼠血漿中TNF-α和IL-1β濃度的比較

與sham組相比，其余4組大鼠血漿中TNF-α和IL-1β的濃度有明顯上升(P< 0.01)；Dex組大鼠血漿中TNF-α、IL-1β的濃度與I/R組相比明顯降低(P<0.01)，I/R、Atip、Dex+Atip組兩兩比較，差異均無統(tǒng)計學意義；與Dex組相比，Atip、Dex+Atip組血漿TNF-α和IL-1β濃度上升明顯，差異有統(tǒng)計學意義(P< 0.01，表2)。

GroupTNF-αIL-1βSham21.25±5.403.94±3.10I/R63.25±6.13**15.59±1.75**Dex34.25±5.85**##7.28±3.06**##Atip61.50±4.04**△△18.26±6.84**△△Dex+Atip66.75±11.87**△△18.85±3.52**△△

TNF-α: Tumor necrosis factor-α; IL-1β: Interleukin-1β; Sham: Sham group; I/R: Ischemia/ reperfusion injury group; Dex: Dexmedetomidine group; Atip: Atipamezole group; Dex+Atip: Dexmedetomidine + Atipamezole group

**P<0.01vssham group;##P<0.01vsI/R group;△△P<0.01vsDex group

3 討論

右美托咪啶是高選擇性α2受體激動藥，能夠作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的α2腎上腺素能受體，對中樞α2腎上腺素受體激動的選擇性比美托咪啶更強，與可樂定相比，對α2腎上腺素受體的親和力是其8倍。右美托咪啶主要是作用于藍斑核、脊髓后角突觸前和中間神經(jīng)元突觸后膜的α2腎上腺素能受體，使細胞產(chǎn)生超極化，進而抑制神經(jīng)元的放電，阻斷了疼痛信號向大腦傳導，產(chǎn)生鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、抗焦慮和抑制交感活動的效應，其它作用還包括抗寒戰(zhàn)、止涎和利尿等[8]。同時，右美托咪啶還能激活膽堿能抗炎通路，具有抗炎、器官保護作用[9]。實驗研究結果表明，右美托咪啶做為術中用藥有很好的圍術期器官保護作用，能有效改善術中缺血對器官的損傷[10]。

本實驗結果提示右美托咪啶可減輕大鼠肺缺血/再灌注損傷。在炎癥反應相關檢測中，本實驗選擇了TNF-α和IL-1β作為檢測指標。它們在炎癥反應中被認為是最重要的因子之一[11-13]。除TNF-α外，IL-1家族在免疫炎癥的機制中也起著重要的調節(jié)作用。本實驗結果發(fā)現(xiàn)Dex組血漿中IL-1β與TNF -α的濃度較I/R組有明顯降低，提示右美托咪啶預處理能使炎癥反應減輕，證明右美托咪啶對缺血/再灌注損傷肺的保護作用與其降低促炎介質IL-1β、TNF-α有關，其機制可能是通過抑制TLR4 / NF-κB通路的活化[14-19]。

同時提示右美托咪啶保護再灌注損傷肺作用可能與激動α2-腎上腺素能受體有關。右美托咪啶通過激動突觸前膜α2受體，抑制了去甲腎上腺素的釋放，使突觸后膜的興奮性降低并阻斷了疼痛信號的傳導；通過作用于突觸后膜α2受體，能使交感神經(jīng)的活性顯著抑制，增強迷走神經(jīng)興奮性，減少去甲腎上腺素的釋放，降低血漿中兒茶酚胺的水平，從而引起血壓和心律的降低，降低心肌氧耗，減少手術期間多種刺激；用于聯(lián)合麻醉時能顯著降低其余麻醉藥的用量，同時還能改善血流動力學穩(wěn)定，降低心肌缺血的發(fā)生率，具有心血管保護作用[20]。

綜上所述，炎癥反應在肺缺血/再灌注損傷發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮著關鍵的作用，右美托咪啶可通過降低促炎介質IL-1β、TNF-α水平減輕大鼠肺缺血/再灌注損傷，其機制可能與激動α2-腎上腺素能受體有關。右美托咪啶作為新型麻醉藥在臨床上廣泛使用，其對圍手術期的器官保護作用是臨床醫(yī)師的關注熱點。本研究通過右美托咪啶對模型的干預和特異性α2-腎上腺素受體阻滯劑阿替美唑的拮抗，進一步闡述右美托咪啶對再灌注損傷肺發(fā)揮保護作用的機制，為圍術期間麻醉藥的選擇以及新藥的臨床運用開發(fā)提供科學依據(jù)。

[1] 劉 備， 唐冬梅， 杜 寧， 等. 七氟烷預處理聯(lián)合后處理對肺缺血再灌注損傷大鼠的保護作用及機制[J]. 山東醫(yī)藥， 2015, 55(17)： 17-19.

[2] 倪程耀， 陳 新， 吳勝軍. 免疫因素在大鼠肺缺血再灌注損傷中的作用[J]. 中國老年學雜志， 2014, 34(18): 5192-5193.

[3] 王 赫， 李曉倩， 馬 虹, 等. 鞘內注射右美托咪啶預處理在兔脊髓缺血再灌注損傷的保護作用[J]． 中國醫(yī)師雜志， 2013, 15(8)： 1032-1036．

[4] Bagcik E, Ozkardesler S, Boztas N,etal. Effects of dexmedetomidine in conjunction with remote ischemic preconditioning on renal ischemia-reperfusion injury in rats[J].RevBrasAnestesiol, 2014, 64(6): 382-390.

[5] Sahin T,Begec Z,Toprak HI,etal. The effects of dexmedetomidine on liver ischemia-reperfusion injury in rats[J].JSurgRes, 2013, 183(1): 385-390.

[6] 羅梓垠, 郭長滿, 項冰倩, 等. 右美托咪定對肺缺血/再灌注損傷小鼠內質網(wǎng)應激相關分子Caspase-12表達的影響[J]. 中國應用生理學雜志, 2016, 32(2): 164-168.

[7] Mantz J, Josserand J, Hamada S. Dexmedetomidine：new insights[J].EurJAnaesthesiol, 2011, 28(1): 3-6.

[8] 崔云鳳， 宋智敏， 周 姝, 等. 右美托咪定輔舒芬太尼用于全麻病人的術后鎮(zhèn)痛[J].中國實驗診斷學， 2013， 17(2)： 321-323.

[9] Luan HF, Zhao ZB, Feng JY,etal. Prevention of etomidate-induced myoclonus during anesthetic induction by pretreatment with dexmedetomidine[J].BrazJMedBiolRes, 2015, 48(2): 186-190.

[10]何金波, 宋 冬, 羅梓垠, 等. 右美托咪定對大鼠I/R損傷肺組織TLR4表達及保護作用的影響[J]. 中國應用生理學雜志, 2016, 32(4): 356-360.

[11]常春榮， 韓 東， 孫尚敏, 等. 牙周基礎治療對慢性牙周炎患者齦溝液白細胞介素6、腫瘤壞死因子α及血清高敏C反應蛋白的影響[J]． 中國醫(yī)科大學學報， 2013， 42(2)： 135-137.

[12]付 銳， 項和平， 楊硎琦, 等. 降鈣素原、C反應蛋白、腫瘤壞死因子、游離DNA對多發(fā)傷患者發(fā)生多器官功能障礙綜合征的預測價值[J]. 中華急診醫(yī)學雜志， 2013， 22(8)： 850-854.

[13]袁艷平， 李長貴. 痛風性關節(jié)炎患者血清白細胞介素-1β、腫瘤壞死因子-α環(huán)氧化酶-2水平的動態(tài)變化研究[J]. 中華風濕病學雜志， 2013, 17(12)： 818-822.

[14]Man?ek-Keber M, Jerala R. Postulates for validating TLR4 agonists[J].EurJImmunol, 2015, 45(2): 356-370.

[15]黃翠源， 潘靈輝， 林 飛， 等. 肺泡巨噬細胞TLR4/MyD88信號通路參與并介導了機械通氣所致的肺損傷[J]. 細胞與分子免疫學雜志, 2015, 31(2): 182-185.

[16]劉亞坤， 何金波， 陳海娥， 等. 血必凈注射液對缺氧/復氧大鼠心肌TLR4—NF-κB—TNF-α通路的影響[J]. 中國中西醫(yī)結合雜志, 2014, 34(12): 1463-1468.

[17]Xing B, Chen H, Wang L,etal. Ozone oxidative preconditioning protects the rat kidney from reperfusion injury via modulation of the TLR4-NF-κB pathway[J].ActaCirBras, 2015, 30(1): 60-66.

[18]何金波， 包財盈， 葉玉柱， 等. 缺氧-復氧大鼠心肌中IL-1β濃度的動態(tài)變化及意義[J]. 中國應用生理學雜志, 2015, 31(1): 27-30.

[19]Hua F, Tang H, Wang J,etal. TAK-242, an antagonist for Toll-like receptor 4, protects against acute cerebral ischemia/reperfusion injury in mice[J].JCerebBloodFlowMetab, 2015, 35(4): 536-42.

[20]尹 紅， 吳 健， 陳衛(wèi)民. 小劑量右美托咪定持續(xù)輸注對全麻高血壓患者血流動力學的影響[J]. 臨床麻醉學雜志， 2013， 29(12): 1181-1183.

EffectsofDexmedetomidineonthelevelsofproinflammatorymediatorsIL-1βandTNF-αinpulmonaryischemia/reperfusioninjuryratsandthemechanisms

XIANG Bing-qian1, HE Jin-bo2, GAO Hui1, LUO Zi-yin1, DAI Yong-yue1△, WANG Wan-tie1△

(1. Institute of Ischemia/Reperfusion Injury, Wenzhou Medical University, Wenzhou 325035; 2. Shiyan Taihe Hospital， Shiyan 442000， China)

Objective: To evaluate the effects and mechanism of the Dexmedetomidine on the levels of proinflammatory mediators interleukin 1 beta (IL-1β) and tumor necrosis factor-α(TNF-α) in ischemia/reperfusion(I/R)rats.MethodsFifty healthy SPF male SD rats， 250～310 g，8～12 weeks，were randomly divided into five groups(n=10)：sham operation group(sham group)，I/R group, dexmedetomidine group(Dex group), atipamezole group(Atip group), dexmedetomidine plus atipamezole(Dex+Atip group). The I/R model was established by clipping hilus of left lung for 30 min and then reperfusion for 2 h. Dex group, Atip group and Dex + Atip group were performed by intraperitoneal injection dexmedetomidine(20 μg/kg)，atipamezole(250 μg/kg)，Dexmedetomidine(20 μg/kg)+atipamezole(250 μg/kg)respectively 30 min in advance before hilus of left lung was clipped, the rest of the process was the same with I/R group. After the experiment the rats were killed and the left lung tissues to determine the lung wet/dry weight(W/D) and total lung water content(TLW); Ultra structure of lung tissues were observed under light microscope and electron microscope; IL-1β and TNF-α levels were determined by using ELISA.ResultsCompared with the sham group, the W/D、TLW、IL-1β and TNF-α in other groups were increased significantly (P<0.05). The structure damages of lung tissues observed under light microscope and electron microscope in other groups were more serious than that of sham group. Compared with I/R、Atip、Dex+Atip group, the levels of W/D、TLW，IL-1β and TNF-α in Dex group were lower (P<0.05), the structure damages of lung tissues observed under light microscopy and electron microscope in Dex group were slighter . There was no significant difference of the above parameters among I/R、Atip、Dex+Atip group.ConclusionDexmedetomidine can alleviate ischemia/reperfusion injury in rat lung through lowering the level of proinflammatory mediators IL-1β and TNF-α，the possible mechanism may be through stimulation of α2adrenaline receptors.

dexmedetomidine; ischemia/reperfusion injury; proinflammatory mediators; IL-1β； TNF-α; rats

R363

A

1000-6834(2017)05-415-05

10.12047/j.cjap.5526.2017.100

浙江省公益技術應用研究項目(2013C33168)；浙江省新苗人才計劃項目(2014R413043)；溫州市公益性科技計劃項目(20140652)

2016-11-24

2017-06-23

△

Tel: 0577-86689817； E-mail: wwt@wmu.edu.cn