北京市宣武中醫(yī)醫(yī)院（100050）李長萍

北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院（100102）姜丹 陳銘陽 劉春生

近年來，中藥市場中以次充好的現(xiàn)象呈增加趨勢，質(zhì)量不合格的中藥如果流入醫(yī)院藥房，不但會影響病人用藥的有效性，長此以往還會影響醫(yī)生對處方中用藥劑量的判斷。而在醫(yī)院藥房中藥材驗收工作中，驗收品種多、數(shù)量大，效率較低，因此建立一種快速有效、操作簡便的評價中藥質(zhì)量的方法具有一定的現(xiàn)實意義。

在《中國藥典》中，評價多數(shù)中藥飲片的質(zhì)量主要依靠浸出物和指標(biāo)性成分含量兩個標(biāo)準(zhǔn)[1]，其中含量測定標(biāo)準(zhǔn)能夠反映中藥中單個或數(shù)個指標(biāo)性成分含量是否合格，醇溶性浸出物含量標(biāo)準(zhǔn)則能夠反映中藥中所有醇溶性成分總含量是否達(dá)標(biāo)。目前有文獻(xiàn)報道的評價防風(fēng)質(zhì)量的方法多數(shù)是基于各種指標(biāo)性成分或活性成分如升麻素苷、升麻素、5-0-甲基維斯阿米醇苷、色原酮等，李碩等建立了一種基于灰色關(guān)聯(lián)度法評價商品防風(fēng)藥材質(zhì)量的方法，但卻鮮有關(guān)于醇溶性浸出物含量的報道?！吨袊幍洹分幸?guī)定的測定醇溶性浸出物及指標(biāo)性成分含量的步驟繁瑣，耗時較長，為保證藥品質(zhì)量，確保臨床用藥的安全有效，同時節(jié)省人力物力，筆者現(xiàn)結(jié)合工作實踐，將一種快速評價防風(fēng)質(zhì)量的方法報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器TU-1901雙光束紫外可見分光光度計（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）；METTLER AE 240電子分析天平(d=0.1mg 北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)；HH-4數(shù)顯恒溫水浴鍋（金壇市華峰儀器有限公司）；島津LC20A型高效液相色譜儀（LC-20AT高效泵，SPD-20A檢測器，LC solution工作站，日本島津公司）。

1.2 試劑與飲片乙醇（分析純，北京化工廠），甲醇（色譜純，美國Fisher公司），升麻素苷和5-0-甲基維斯阿米醇苷標(biāo)準(zhǔn)品（上海將來生化試劑有限公司）。所用防風(fēng)飲片經(jīng)北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定系主任劉春生教授鑒定，基原均為傘形科植物防風(fēng)。

2 實驗方法

2.1 醇溶性浸出物含量測定 依《中國藥典》2015版所述，防風(fēng)采用醇溶性浸出物測定法下的熱浸法測定。取供試品2g，精密稱定，置100mL錐形瓶中，精密加醇50mL，密塞，稱定重量，靜置1小時后，連接回流冷凝管，加熱至沸騰，并保持微沸1小時。放冷后，取下錐形瓶，密塞，再稱定重量，用醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用干燥濾器濾過，精密量取濾液25mL，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3小時，置干燥器中冷卻30分鐘，迅速精密稱定重量。以干燥品計算供試品中醇溶性浸出物的含量(%)[1]。

2.2 指標(biāo)性成分含量測定

2.2.1 對照品溶液的制備 取升麻素苷對照品及5-0-甲基維斯阿米醇苷對照品適量，精密稱定，分別加甲醇制成每1mL各含60mg的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備取防風(fēng)細(xì)粉約0.25g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇10mL，稱定重量，水浴回流2小時，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 HPLC分析條件 色譜柱：Agilent ZORBAXEclipse XDB C18色譜柱（25cm×4.6mm，5μm）；流動相：甲醇-水(40:60)，流速1 mL/min；檢測波長254nm。

2.2.4 測定方法 分別精密吸取對照品溶液各3μL與供試品溶液2μL，注入液相色譜儀，測定，即得。

2.3 制備醇浸液供試品的方法學(xué)考察 影響供試品溶液的因素有藥材飲片的粉碎度，浸泡時的溫度和浸泡時間，基于此，設(shè)計如附表1所示正交試驗確定獲得供試品溶液的最佳方法。

根據(jù)《中國藥典》中規(guī)定的飲片和醇的比例，取防風(fēng)飲片（粉末）1g，精密稱定，置100mL錐形瓶中，精密加入無水乙醇25mL，置室溫下浸泡（水浴鍋中加熱）指定時間后過濾，測定濾液在特定波長下的吸光度。

2.4 供試品溶液吸光度測定

2.4.1 最大吸收波長的測定 取2.1項下獲得的濾液在190～700nm做紫外可見全波長掃描，確定其最大吸收波長。

2.4.2 吸光度測定 取2.3項下的濾液，稀釋10倍后在2.3.1項得到的最大吸收波長下分別測定吸光度。

3 結(jié)果與分析

3.1 制備供試品溶液方法學(xué)考察結(jié)果 紫外-可見全波長掃描顯示防風(fēng)醇浸液的最大吸收波長在228nm。依據(jù)附表1設(shè)計的正交試驗結(jié)果如附表2所示。根據(jù)附表2得到的結(jié)果繪制不同條件下防風(fēng)醇浸液的吸光度隨浸泡時間的變化曲線，如下面附圖1～4所示。

附表1 防風(fēng)醇溶性浸出物正交試驗因素水平表

附表2 防風(fēng)醇浸液正交試驗結(jié)果表

附表3 22批防風(fēng)的醇浸液吸光度及各組分含量測定結(jié)果

從4個附圖中可以看出防風(fēng)飲片無論是在室溫還是在50℃水浴加熱下浸泡，醇浸液的吸光度均難以在1h內(nèi)達(dá)到一個穩(wěn)定的值；而防風(fēng)粉末在室溫和50℃水浴加熱下浸泡，醇浸液的吸光度均能在20min以內(nèi)時達(dá)到一個穩(wěn)定的值。故此選用室溫浸泡防風(fēng)粉末20min的條件獲取醇浸液。

3.2 防風(fēng)醇浸液吸光度與各組分含量相關(guān)性分析 按上述方法獲得的22批防風(fēng)的醇浸液吸光度及其醇溶性浸出物含量測定結(jié)果如附表3所示。

附圖1 室溫下浸泡防風(fēng)飲片醇浸液吸光度隨浸泡時間變化圖

附圖2 水浴加熱下浸泡防風(fēng)飲片醇液吸光度隨浸泡時間變化圖

附圖3 室溫下浸泡防風(fēng)粉末醇浸液吸光度隨浸泡時間變化圖

附圖4 水浴加熱下浸泡防風(fēng)粉末醇液吸光度隨浸泡時間變化圖

使用SAS8.2軟件分析三組變量兩兩之間的相關(guān)性，各組數(shù)據(jù)服從正態(tài)分布，因此選用pearson相關(guān)系數(shù)。

醇浸液吸光度（x）與醇溶性浸出物（y）的相關(guān)性計算結(jié)果如下：rs=0.449 P=0.036＜0.05證明防風(fēng)醇浸液吸光度與醇溶性浸出物含量之間有顯著正相關(guān)關(guān)系。

醇浸液吸光度（x）升麻素苷和5-0-甲基維斯阿米醇苷總含量（z）的相關(guān)性計算結(jié)果如下：rs=0.288 P=0.194＞0.05證明防風(fēng)醇浸液吸光度與其指標(biāo)性成分總含量之間無顯著相關(guān)關(guān)系。

由此可知，根據(jù)3.1中確定的方法獲得的防風(fēng)醇浸液的吸光度與其醇溶性浸出物含量具有顯著正相關(guān)關(guān)系（P＜0.05），但與《中國藥典》中規(guī)定的指標(biāo)性成分總含量并無顯著相關(guān)關(guān)系。因此，通過該方法獲得的醇浸液的吸光度雖然可反映防風(fēng)醇溶性浸出物含量，但并不能體現(xiàn)藥典中的指標(biāo)性成分總含量。

4 討論

本研究建立了一種快速、簡便且較為準(zhǔn)確地檢測防風(fēng)飲片醇溶性浸出物含量是否合格的方法。利用本法，可快速篩選出醇溶性浸出物含量不合格的防風(fēng)，它們的醇浸液吸光度值顯著低于其他大多數(shù)合格產(chǎn)品。

在方法學(xué)考察中，防風(fēng)飲片在不打粉的情況下，醇浸液的吸光度在1 h 內(nèi)不能達(dá)到一個穩(wěn)定的值，究其原因是因為防風(fēng)飲片與醇的接觸面積遠(yuǎn)小于粉末與醇的接觸面積，如果方法中改用飲片進(jìn)行實驗，無法達(dá)到快速檢測的預(yù)期，并且防風(fēng)飲片大小不一，很難找到吸光度穩(wěn)定的極值點。在是否水浴加熱的選擇中我們發(fā)現(xiàn)，無論是在室溫下還是在5 0 ℃水浴加熱，醇浸液的吸光度均在10min左右到達(dá)極限，為了在檢測過程中節(jié)省成本，簡化步驟，故此選擇在室溫下浸泡防風(fēng)粉末的方法。

《中國藥典》中規(guī)定防風(fēng)飲片醇溶性浸出物含量低于13%或升麻素苷和5-0-甲基維斯阿米醇苷總含量低于0.24%均為不合格[1]，這22批防風(fēng)中醇溶性浸出物含量低于合格限有16批，而升麻素苷和5-0-甲基維斯阿米醇苷總含量全部合格，可見市場上防風(fēng)飲片的指標(biāo)性成分大多數(shù)高于合格限，而另一指標(biāo)醇溶性浸出物含量則大多不合格，因此對市場上防風(fēng)醇溶性浸出物含量的檢測和控制是十分必要的。本研究中報道的方法所獲得的醇浸液吸光度值雖然不能反映防風(fēng)飲片中升麻素苷和5-0-甲基維斯阿米醇苷的總含量，但可以一定程度上反映飲片中的醇溶性浸出物含量，具有一定實際意義。

綜上所述，本方法能為藥房工作人員節(jié)省下大量的檢測時間，且能將此法擴(kuò)展到其它中藥飲片的快速質(zhì)量評價中，具有較高的實際應(yīng)用價值，能為中藥飲片的快速質(zhì)量評價提供有力的技術(shù)支持。