王訓(xùn)霞

【摘要】 目的 評(píng)估熒光二極管（LED）直接涂片法、酸性羅氏培養(yǎng)法、Bactec MGIT 960培養(yǎng)法檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌臨床應(yīng)用價(jià)值。方法 317例臨床確診結(jié)核病患者痰樣本， 每例痰樣本均分為3份， 分別采用LED直接涂片法、酸性羅氏培養(yǎng)法和Bactec MGIT 960培養(yǎng)法進(jìn)行檢測(cè)， 比較三種方法培養(yǎng)陽(yáng)性率， 以及陽(yáng)性率較高的兩種檢測(cè)方法培養(yǎng)所需時(shí)間、污染率。結(jié)果 317例痰液標(biāo)本中， Bactec MGIT 960培養(yǎng)法、酸性羅氏培養(yǎng)法陽(yáng)性率均高于LED直接涂片法陽(yáng)性率， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=97.71、44.69， P<0.01）；Bactec MGIT 960培養(yǎng)法陽(yáng)性率顯著高于酸性羅氏培養(yǎng)法， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=11.80， P<0.01）。酸性羅氏培養(yǎng)法和Bactec MGIT 960培養(yǎng)法的檢出時(shí)間分別為33.0 d（25.0～40.0 d）、14.0 d（9.0～18.0 d）， 比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=-19.601， P<0.01）。317例痰液標(biāo)本中， 酸性羅氏培養(yǎng)法污染率為4.7%（15/317）， Bactec MGIT 960培養(yǎng)法污染率為5.0%（16/317）， 比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.03， P>0.05）。結(jié)論 Bactec MGIT 960培養(yǎng)法可以顯著提高培養(yǎng)陽(yáng)性率、縮短培養(yǎng)時(shí)間。

【關(guān)鍵詞】 結(jié)核分枝桿菌快速培養(yǎng)；Bactec MGIT 960系統(tǒng)； 酸性羅氏培養(yǎng)

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.29.111

據(jù)世界衛(wèi)生組織報(bào)告2014年全球共有150萬(wàn)人因結(jié)核病死亡。我國(guó)傳染病監(jiān)測(cè)信息系統(tǒng)肺結(jié)核報(bào)告發(fā)病數(shù)近幾年均位居甲、乙類傳染病的第二位。結(jié)核病細(xì)菌學(xué)檢查是結(jié)核病診斷和治療方案的主要依據(jù)。然而現(xiàn)有的結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室診斷方法遠(yuǎn)不能滿足臨床診治的需要， 建立快速、敏感、特異的診斷方法， 對(duì)于結(jié)核病防治工作具有重要意義[1]。Bactec MGIT 960系統(tǒng)培養(yǎng)是結(jié)核桿菌快速培養(yǎng)的新技術(shù)， 采用熒光二極管直接涂片（簡(jiǎn)稱LED直接涂片法）及酸性羅氏培養(yǎng)法和Bactec MGIT 960快速培養(yǎng)三種檢測(cè)方法對(duì)確診的結(jié)核患者的痰液標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)， 比較評(píng)價(jià)三種檢測(cè)方法的應(yīng)用價(jià)值?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1. 1 材料 收集河南省安陽(yáng)市結(jié)核病防治所2016年1～6月317例結(jié)核病確診患者合格痰液標(biāo)本， 每例樣本均分為3份， 同時(shí)做LED直接涂片法、酸性羅氏培養(yǎng)、Bactec MGIT 960快速培養(yǎng)。

1. 2 儀器與試劑 美國(guó)BD公司Bactec MGIT 960全自動(dòng)分枝桿菌培養(yǎng)藥敏儀；山東海爾CLASSⅡTYPEA2型生物安全柜， 上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司DRP-9802恒溫培養(yǎng)箱， 安徽中佳科學(xué)儀器有限公司MC-3518高速離心機(jī)， 渦旋振蕩器， 2 ml無(wú)菌吸管。Bactec MGIT 960全自動(dòng)分枝桿菌培養(yǎng)基、分枝桿菌生長(zhǎng)指示管及添加劑、雜菌抑制劑均是美國(guó)BD公司提供；酸性羅氏培養(yǎng)基和LED直接涂片法染色試劑為珠海貝索生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品， 所有試劑和培養(yǎng)基均在有效期內(nèi)使用。

1. 3 LED直接涂片法 嚴(yán)格按照《結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)培訓(xùn)教程》要求進(jìn)行[2]。

1. 4 酸性羅氏培養(yǎng)方法 在生物安全柜內(nèi)將1～2 ml痰液標(biāo)本加入1～2倍的4% NaOH到前處理管中， 渦旋震蕩30 s至痰標(biāo)本充分液化， 室溫靜置15 min后， 用無(wú)菌吸管吸取0.1 ml

痰標(biāo)本， 接種到酸性羅氏培養(yǎng)基斜面的中部和上部。將培養(yǎng)基放置在斜面放置架上置于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)（36±1）℃孵育。接種后第3日和第7日觀察培養(yǎng)情況， 以后每周觀察1次， 直到第8周末。判定結(jié)果：培養(yǎng)基上生長(zhǎng)出不透明， 黃色， 粗糙菜花樣菌落為陽(yáng)性。

1. 5 Bactec MGIT 960分枝桿菌液體培養(yǎng)方法 在生物安全柜內(nèi)將2～5 ml痰液標(biāo)本加入1～2倍的NaCl-NaOH混合溶液到離心管中渦旋震蕩30 s至痰標(biāo)本充分液化， 室溫靜置

15 min后， 向離心管中加入磷酸鹽緩沖液至45 ml， 擰緊管蓋后放到低溫冷凍離心機(jī)3000 g離心15 min， 棄去上清液， 加入1 ml磷酸鹽緩沖液混勻后用無(wú)菌吸管吸取0.5 ml處理后的痰標(biāo)本加到MGIT管中蓋緊管蓋混勻， 放入Bactec MGIT 960全自動(dòng)分枝桿菌培養(yǎng)藥敏儀內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)。儀器報(bào)告陽(yáng)性結(jié)果后及時(shí)涂片并使用萋尼氏染色鏡檢確認(rèn)。

1. 6 觀察指標(biāo) 比較三種方法培養(yǎng)陽(yáng)性率， 以及陽(yáng)性率較高的兩種檢測(cè)方法培養(yǎng)所需時(shí)間、污染率。

1. 7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)研究數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗(yàn)；均值采用Mann-Whitney檢驗(yàn)。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 三種分枝桿菌檢測(cè)方法陽(yáng)性率比較 317例痰液標(biāo)本中， Bactec MGIT 960培養(yǎng)法、酸性羅氏培養(yǎng)法陽(yáng)性率均高于LED直接涂片法陽(yáng)性率， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=97.71、44.69， P<0.01）；Bactec MGIT 960培養(yǎng)法陽(yáng)性率顯著高于酸性羅氏培養(yǎng)法， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=11.80， P<0.01）。見(jiàn)表1。

2. 2 兩種培養(yǎng)方法檢測(cè)時(shí)間比較 酸性羅氏培養(yǎng)法和Bactec MGIT 960培養(yǎng)法的檢出時(shí)間分別為33.0 d（25.0～40.0 d）、14.0 d（9.0～18.0 d）， 比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=-19.601， P<0.01）。

2. 3 兩種培養(yǎng)方法污染率比較 317例痰液標(biāo)本中， 酸性羅氏培養(yǎng)法污染率為4.7%（15/317）， Bactec MGIT 960培養(yǎng)法污染率為5.0%（16/317）， 比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.03， P>0.05）。endprint

3 討論

肺結(jié)核是我國(guó)預(yù)防控制的重大傳染病之一給公共衛(wèi)生和社會(huì)帶來(lái)了很大的負(fù)擔(dān)。細(xì)菌學(xué)早期診斷是結(jié)核病防治的關(guān)鍵， LED直接涂片法的優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)單、快速， 但是陽(yáng)性率太低。結(jié)核分枝桿菌繁殖緩慢[3， 4]。酸性羅氏培養(yǎng)法被認(rèn)為是結(jié)核病診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”， 但是其培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)， 需要1～2個(gè)月，

對(duì)于臨床治療指導(dǎo)合理化用藥方案有極大的局限性， 導(dǎo)致很多肺結(jié)核患者沒(méi)有得到及時(shí)的發(fā)現(xiàn)和合理治療[5-7]。在結(jié)核病例的診斷技術(shù)上， 迫切需要一種簡(jiǎn)捷、快速的技術(shù)方法， 能在最短時(shí)間內(nèi)對(duì)病例所攜菌株耐藥性做出判斷， 以期縮短為患者制定合理化療方案重新開(kāi)始治療所需時(shí)間[3， 8]。Bactec MGIT 960 系統(tǒng)是以液體培養(yǎng)基為基礎(chǔ)的新一代熒光檢測(cè)系統(tǒng)， 可大大縮短培養(yǎng)時(shí)間[9]， 它是專業(yè)的分枝桿菌培養(yǎng)鑒定及藥敏自動(dòng)化實(shí)驗(yàn)儀器系統(tǒng)， 是通過(guò)檢測(cè)液體培養(yǎng)基中消耗氧氣的量來(lái)確定是否有細(xì)菌生長(zhǎng)[5]。本結(jié)果顯示， LED直接涂片法陽(yáng)性率為14.5%， 酸性羅氏培養(yǎng)法陽(yáng)性率為37.9%， Bactec MGIT 960培養(yǎng)法的陽(yáng)性率為51.4%。Bactec MGIT 960培養(yǎng)法的陽(yáng)性率要顯著高于LED直接涂片法和酸性羅氏培養(yǎng)法（P<0.05）。酸性羅氏培養(yǎng)法的檢出時(shí)間分別為33.0 d（25.0～40.0 d）， Bactec MGIT 960培養(yǎng)法的檢出時(shí)間為14.0d（9.0～18.0 d）。Bactec MGIT 960培養(yǎng)法檢測(cè)需要的時(shí)間遠(yuǎn)低于酸性羅氏培養(yǎng)法（P<0.05）。在進(jìn)行培養(yǎng)操作時(shí)應(yīng)嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)操作規(guī)程進(jìn)行操作， 降低培養(yǎng)基的污染率， 以免造成假陽(yáng)性影響結(jié)果。

綜上所述， Bactec MGIT 960系統(tǒng)分枝桿菌液體培養(yǎng)方法檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌陽(yáng)性率高， 檢測(cè)時(shí)間短， 在結(jié)核病早期診斷中具有重要的應(yīng)用價(jià)值。

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[收稿日期：2016-08-19]endprint