謝 榮

（西藏自治區(qū)農(nóng)牧科學院蔬菜研究所，西藏拉薩850032）

市場上的靈芝或者靈芝產(chǎn)品主要是赤芝（Ganoderma lucidum）、紫芝和松杉靈芝。白肉靈芝（Ganoderma leucocontextum）是新發(fā)現(xiàn)的種類[1]。西藏自治區(qū)農(nóng)牧科學院蔬菜研究所與中國科學院微生物研究所合作開展的白肉靈芝活性物質(zhì)分析與功效研究[5]，目前白肉靈芝藥效作用也成為學術研究的熱點[2，3]。為實現(xiàn)西藏白肉靈芝產(chǎn)業(yè)品牌化發(fā)展，規(guī)范化繁育菌種和標準化栽培提供技術支持，筆者總結(jié)了自2012年馴化栽培[4]至今，白肉靈芝（保藏菌株X033）在西藏拉薩地區(qū)菌種制作、溫室栽培關鍵技術。

1 菌種制作

1.1 菌種制作流程種源（組織分離）→母種（試管）→原種（試管轉(zhuǎn)麥粒）→栽培用種（麥粒轉(zhuǎn)麥粒）→栽培袋（麥粒轉(zhuǎn)木屑+棉子殼）。

1.2 麥粒原種批量制作石灰水浸泡2～4 d，3～4 d期間須換水、翻攪，防止麥粒泡爛，容器均為250 mL聚丙烯組培瓶，菌種量少，栽培種轉(zhuǎn)接率1∶4～1∶6，因口徑較大，在接種室內(nèi)，容易交叉感染，因此，接種工具須一瓶一更換。

1.3 栽培種制作主料預處理青岡木屑加工為0.5～1.0 cm方塊，預先浸水（添加石灰，石膏各1%），堆漚3 d軟化處理，防止木片浸水不透，成為污染源。

將培養(yǎng)料按表1比例調(diào)配、拌料，調(diào)pH8，料含水量60%～65%（判別方法：用拇指、食指和中指捏培養(yǎng)料，如有水滲出，含水量在50%～55%；用拳攥培養(yǎng)料，如有水連續(xù)滴下，含水量在65%以上）。沖壓式裝袋機填裝于17 cm×36 cm×0.005 cm聚丙烯折角塑料袋，檢查無破損袋后插入打孔棒。裝料掌握在15～20 cm，袋口用套環(huán)、套蓋及兩個無紡布濾片封口，套環(huán)距袋肩2 cm以上空間。周轉(zhuǎn)料包提袋口套環(huán)，確保密封，避免料包磕碰和過分擠壓。

表1 各級菌種主要參數(shù)

2 滅菌與接種

2.1 滅菌料袋豎放于周轉(zhuǎn)筐，立式碼放滅菌車上，多次排冷，梯度升溫，確保袋料內(nèi)溫度達標。高壓滅菌：0.02～0.05 MPa，排冷9次，105℃；0.065 MPa 30 min，115℃；0.115 MPa 40 min，121℃；0.148 MPa 70 min，燜90 min。

2.2 接種接種臺和接種箱，在接種前、后必須清潔臺面，再用來蘇爾、75%酒精棉球擦拭消毒。接種前，密閉氣霧消毒或開紫外燈及風機過濾系統(tǒng)。專用工作服要保證清潔，正面懸掛于更衣緩沖間，并進行紫外燈消毒30 min。接種工具用紗布包好，封裝于鋁盒內(nèi)與料袋一起滅菌，料袋和接種工具及菌種需在紫外燈下消毒處理30 min。接種工具和料袋必須冷卻至30℃以下方可接種。料袋在滅菌結(jié)束，放盡余氣、氣壓歸零，自然降溫散熱或轉(zhuǎn)運至冷卻室排風散熱，以免內(nèi)外溫差過大冷凝水過多，影響菌絲萌發(fā)。

圖1 建畦覆土埋袋

操作人員接種前雙手必須進行“一清（流水、肥皂）、二洗（來蘇爾或甲酚皂）、三消毒（75%酒精擦拭手指）”，進入緩沖間前，換鞋或戴鞋套，進入緩沖間更換專用工作服，戴口罩、頭套，進入潔凈室接種，更換菌種瓶和接種工具及菌包周轉(zhuǎn)盤時，要用75%的酒精噴灑或擦拭表面，接種操作做到“輕、快、準”，在超凈臺或?qū)恿髡窒虏僮?，須保證風機系統(tǒng)開啟，菌種不得長時間置于超凈臺或?qū)恿髡滞獠僮鳌２僮魅藛T在潔凈室接種未完成之前，不得隨意進出，凡進出一次，必須關好門、更換工作服、清潔消毒，接種時不得接打電話。連續(xù)接種時間不超過2.5 h，否則潔凈室凈化風機循環(huán)系統(tǒng)凈化度會降低。

3 發(fā)菌與埋袋

3.1 發(fā)菌層架式立袋發(fā)菌，不超過4層，環(huán)境溫度20～28℃，暗培養(yǎng)，每天通風2～3次，上風口進氣、下風口排氣，庫內(nèi)頂部設內(nèi)循環(huán)電熱加溫風機。集中批量制袋時間7月下旬-12月下旬，3-4月拉薩風季，氣溫回暖，不宜制菌袋。

3.2 埋袋用來埋袋的日光溫室（7 m×60 m），需設頂通風口或后坡通風窗，前風口距溫室前腳地面50 cm。拱架上設微噴灌，儲水桶或抽水泵出水方向需設濾清器；遮陽網(wǎng)內(nèi)遮陽，遮前風口，勿遮頂通風口。

3.2.1 埋袋前準備 一個月前翻耕土壤，清除雜草、石塊，撒石灰澆透水，晴天日光暴曬數(shù)日。南北向建畦，畦寬1.0～1.2 m，畦深15～20 cm，畦間排水溝寬30～50 cm，深30 cm，畦底和畦溝撒石灰粉消毒。每畦正對后墻碼放3～4層，每畦埋袋100～120個，菌包完熟貯藏1個月以上，須四周刺孔再埋袋。

3.2.2 埋袋時間 6月下旬至7月下旬期間，晝夜溫差小于5℃，埋袋時間不宜晚于7月，4月地溫回暖，開始埋袋。5～8月晝夜溫差逐漸縮小，是定植出芝最佳時段。

圖2 墻式覆土埋袋

3.2.3 埋袋方式 有建畦立袋覆土和墻式碼放覆土兩種。

建畦立袋覆土方式，是將菌包去套環(huán)套蓋，埋入地下一頭的塑料袋剪去三分之一，上部剪去菌袋中間套環(huán)部分，以能露出培養(yǎng)料為度，用經(jīng)消毒的刀片去老菌皮，清潔干凈，菌包豎立，一行5～6個，間距5～10 cm，行間距20 cm（圖1）以上，因向光性行間距縮短，前后芝蓋易粘連，菌包四周均填上沙壤土，厚度1～2 cm，剛能蓋到菌包中間部位即可，用水澆透土表，在上面再搭一層遮陽網(wǎng)保濕。

墻式碼放覆土方式，是將菌包去套環(huán)套蓋、老菌皮和部分菌袋，培養(yǎng)料露至袋肩位置，菌包完熟貯藏1個月以上，須四周刺孔。自日光溫室后墻向溫室前角，兩排菌包口對口排布，間隔一個菌包的距離，每排袋與袋間隔2 cm，挖取兩排袋底邊土壤向兩排菌包中間填土覆蓋，露出至袋底2 cm，底層排布覆土完畢，第二層在底層上交錯碼放，每包向填土方向縮進2 cm，以此類推，5～7層即可（圖2）。和建畦立袋覆土相比，至少300袋一垛，增加1倍的埋袋量，袋底劃口、定向控制、交錯出芝，便于收集孢子粉、二潮芝商品化。

4 出芝管理

菌包覆土后原基形成前，要保持畦面始終濕潤，每天噴水2～3次、通風 1～2次，空氣相對濕度65%～70%，溫度為25～30℃，最高不可超過32℃，棉被卷至前通風口通風，午后高溫時段加強通風和噴水降溫，卷至頂通風口，通風半小時，低于25℃，放下棉被保溫、避光。

原基形成、芝蕾分化及芝柄伸長期，不需卷被通風，芝蕾形成后，如不為觀賞用，原基留一個即可。芝蓋伸展期到子實體成熟期，空氣相對濕度應逐漸降低，光照強度逐步增加，白天非高溫時段可卷起棉被透光增溫，加強通風次數(shù)和時段，夜間放下棉被至前通風口，減少晝夜溫差。

當芝蓋周圍黃色的生長圈逐漸轉(zhuǎn)為棕紅色，但尚未有孢子彈出時，即可套袋收粉，噴水改溝灌，保持土壤濕潤。孢子分兩次采收，檢查袋內(nèi)孢子粉是否霉變，用專用的軟毛刷將紙上的和袋內(nèi)的靈芝孢子粉刷到專用的容器，烘干、分篩雜質(zhì)。

芝蓋邊緣全部轉(zhuǎn)為棕褐色，邊沿開始內(nèi)卷，質(zhì)地木質(zhì)化即可進行采收。采收時，要用手握住芝柄底部，在芝柄基部約1 cm處用剪刀剪下，并清除泥土等雜物。建畦覆土栽培主要采收頭潮芝，第二潮靈芝產(chǎn)量低、品質(zhì)較差。