李 云，寧懷軍，何筱胤

hCMV肝炎嬰兒尿hCMVgH基因型分析

李 云，寧懷軍，何筱胤

目的探討人巨細(xì)胞病毒（hCMV）肝炎嬰兒尿hCMV包膜糖蛋白H（gH）基因型分型情況。方法2014年5月～2016年5月我科收治的80例hCMV肝炎患兒，采用熒光定量法檢測(cè)尿hCMVDNA，采用直接測(cè)序法鑒定hCMVgH基因分型。結(jié)果在80例患者中，鑒定出gH1型40例（50.0%），gH2型32例(40.0%)，gH1/gH2型8例(10.0%)；gH1型hCMV肝炎組尿hCMV DNA水平為（2.55±0.32）×105copies/ml，顯著高于gH1/gH2型hCMV肝炎組的（3.05±0.50）×103copies/ml，或gH2型hCMV肝炎組的（3.62±0.48）×103copies/ml（P＜0.05）；gH1型患兒血清ALT水平顯著高于其他兩型患兒（P＜0.05）。結(jié)論hCMV感染患兒以gH1型和gH2型為主，其基因型檢測(cè)的意義還有待于進(jìn)一步研究。

人巨細(xì)胞病毒肝炎；包膜糖蛋白H；嬰兒

人巨細(xì)胞病毒（human cytomegalovirus，hCMV）是皰疹病毒中最大的一種DNA病毒，在世界范圍內(nèi)感染非常普遍。據(jù)有關(guān)資料顯示，我國(guó)是hCMV感染的高發(fā)地區(qū)，兒童血清抗hCMV陽(yáng)性率為83.2%～87.3%，成人高達(dá)95%[1]。雖然hCMV是一種弱致病病毒，但是在一定條件下能侵襲免疫功能低下的人群，進(jìn)而導(dǎo)致嚴(yán)重疾病。近年來(lái)，隨著人們生活水平的提高以及艾滋患者等免疫功能低下人群的增多，人們?cè)絹?lái)越重視hCMV感染。嬰兒是hCMV的易感人群，并且肝臟成為其機(jī)體內(nèi)重要的靶器官[2]。hCMV包膜糖蛋白H（gH）基因在病毒識(shí)別宿主細(xì)胞膜受體、侵犯細(xì)胞、誘導(dǎo)宿主免疫反應(yīng)等方面發(fā)揮著重要作用。本文分析了hCMV肝炎嬰兒hCMVgH基因型的變化，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2014年5月～2016年5月我科收治的hCMV肝炎患兒80例，男52例，女28例；年齡3d～9個(gè)月，平均（3.6±2.0）個(gè)月。符合hCMV感染診斷標(biāo)準(zhǔn)，并經(jīng)檢查明確診斷為hCMV肝炎?；颊哐錋LT輕中度升高，輕中度肝脾腫大。排除藥物性肝損傷和代謝性肝病。本研究通過(guò)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，征得患兒家屬同意，并簽署知情同意書。

1.2 尿hCMVDNA檢測(cè)和hCMVgH基因分型采集患兒晨尿，離心2次后保留沉淀，在沉淀中加入DNA提取液，沸水浴10min，離心取上清液。使用hCMV AD培養(yǎng)液（北京樂(lè)博生物科技有限公司）進(jìn)行DNA抽提[3]。采用熒光定量法檢測(cè)hCMVDNA（日本Takara公司）。采取傳統(tǒng)多重PCR聯(lián)合酶切法行hCMVgH基因分型，使用RsaⅠ、HinfⅠ限制性內(nèi)切酶進(jìn)行酶切，然后將酶切產(chǎn)物加入樣孔，使用電泳儀電泳30 min，在紫外燈下觀察條帶大小，并使用全自動(dòng)測(cè)序儀測(cè)序[4]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理，計(jì)量資料以（±s）表示，采用t檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同hCMV感染患者尿hCMVDNA水平比較 在80例患者中，鑒定出gH1型40例（50.0%），gH2型 32例（40.0%），gH1/gH2型8例（10.0%）；gH1型hCMV肝炎組尿hCMV DNA水平為（2.55±0.32）×105copies/ml，顯著高于gH1/gH2型 hCMV 肝炎組的（3.05±0.50）×103copies/ml，或gH2型hCMV肝炎組的（3.62±0.48）×103copies/ml（P＜0.05）。

2.2 不同hCMV感染患者血生化指標(biāo)的比較見(jiàn)表1。

表1 不同gH 型hCMV感染患者血生化指標(biāo)（±s）比較

表1 不同gH 型hCMV感染患者血生化指標(biāo)（±s）比較

與其他兩組比，①P＜0.05

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3 討論

胎兒及嬰兒的免疫力低下，是hCMV肝炎的高危人群。hCMV在多數(shù)免疫正常個(gè)體中呈非顯性的亞臨床感染，但在胎兒、嬰兒及免疫功能低下個(gè)體卻常表現(xiàn)出明顯的臨床病癥。人體在感染hCMV后，宿主的很多組織細(xì)胞中都會(huì)有病毒潛伏，通常無(wú)法將其徹底清除，這種情況下在宿主免疫系統(tǒng)受損后往往會(huì)激活潛伏病毒而引發(fā)相關(guān)疾病[5]。

作者單位：530003南寧市 廣西壯族自治區(qū)婦幼保健院兒科

hCMV基因組DNA能夠編碼兩百余種蛋白，其中g(shù)H、gB、gcll是最重要的幾種膜糖蛋白，pp150、pp65、非毒力蛋白IE1是最重要的幾種結(jié)構(gòu)蛋白[6]。gH是hCMV薄膜上分布較多的糖蛋白，也是hCMV肝炎發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中誘導(dǎo)機(jī)體免疫應(yīng)答的重要抗原物質(zhì)，其能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生特異性gH抗體，從而發(fā)揮保護(hù)作用[7，8]。有學(xué)者對(duì)血清hCMV陽(yáng)性患者進(jìn)行了gH特異性Th細(xì)胞增殖反應(yīng)，結(jié)果顯示Th細(xì)胞與gH的作用位點(diǎn)均在 15～510位氨基酸之間，34～51表位與AD169株特異性B細(xì)胞抗原表位接近[9，10]。還有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究顯示，CMV gH基因復(fù)制缺陷型腺病毒鼻內(nèi)感染小鼠血清檢測(cè)到特異性抗hCMV gH抗體，說(shuō)明gH抗體可對(duì)hCMV感染發(fā)揮保護(hù)作用[11，12]。目前，國(guó)內(nèi)關(guān)于hCMV gH基因型的研究較少，且多針對(duì)器官移植患者，較少以嬰兒hCMV感染病例為對(duì)象[13-16]。

gH基因可分為gH1、gH2、gH1+gH2型，gH1型已經(jīng)成為嬰兒CMV肝炎的優(yōu)勢(shì)基因型[17，18]。因gH1型糖蛋白復(fù)合物具有一些特征，相對(duì)于gH2或gH1+gH2型，容易導(dǎo)致組織損傷。加之gH1型gH和gL介導(dǎo)的病毒會(huì)進(jìn)入成纖維細(xì)胞，而不是進(jìn)入gH、gL、gO復(fù)合體，從而造成了gH1型hCMV肝炎患兒肝損傷更為嚴(yán)重[19]。

本研究將hCMVgH基因型分為 gH1型、gH2型、gH1+gH2型三種，其中g(shù)H1型hCMV肝炎患兒40例（50%），gH2型hCMV肝炎患兒32例（40%），gH1+gH2型hCMV肝炎患兒8例（10%），與現(xiàn)有研究結(jié)果基本吻合，且進(jìn)一步驗(yàn)證了gH1型為嬰兒hCMV肝炎的優(yōu)勢(shì)基因型。gH1型hCMV肝炎患兒尿hCMVDNA水平為（2.55±0.32）×105copies/ml，gH2型 hCMV 肝炎為（3.62±0.48）×103copies/ml，gH1+gH2 型為（3.05±0.50）×103copies/ml，三者相比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。此外，gH1型hCMV肝炎患兒血清ALT水平為（108.57±2.47）U/L，顯著高于其他兩型患兒。由此，可推測(cè)不同hCMV gH基因型可能與hCMV肝炎不同的臨床表現(xiàn)有關(guān)，并且gH1基因型hCMV更容易引起肝損害[20]。

綜上所述，hCMV gH基因型以gH1型和gH2型為主，其可能與嬰兒hCMV肝炎臨床特征有關(guān)，值得繼續(xù)深入研究。

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（收稿：2016-10-17）

（本文編輯：陳宗炳）

Urine hCMV gH genotype in hCMV-infectedinfants

Li Yun，Ning Huaijun，He Xiaoyin.Department of Pediatrics，Maternal and Child Health Care Hospital，Guangxi Zhuang Autonomous Region，Nanning 530003

Human cytomegalovirus hepatitis；Envelope glycoprotein H；Infant

10.3969/j.issn.1672-5069.2017.05.022

李云，女，35歲，碩士研究生，主治醫(yī)師。主要從事兒童消化與感染性疾病研究。E-mail-xiehuixhw@163.com