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(廣東海洋大學(xué)食品科技學(xué)院,廣東省水產(chǎn)品加工與安全重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,水產(chǎn)品深加工廣東普通高等學(xué)校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,廣東湛江 524088)

羅非魚-豆粕共沉淀蛋白的提取工藝及蛋白組成分析

齊慧紅,周春霞*,朱潘紅,李婷,洪鵬志

(廣東海洋大學(xué)食品科技學(xué)院,廣東省水產(chǎn)品加工與安全重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,水產(chǎn)品深加工廣東普通高等學(xué)校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,廣東湛江524088)

以羅非魚肉和脫脂豆粕為原料,采用pH調(diào)節(jié)法制備羅非魚-大豆共沉淀蛋白(Co-p),探討溶解pH、不同質(zhì)量比混合的原料、溶解時(shí)間對(duì)可溶性蛋白得率的影響及沉淀pH對(duì)蛋白沉淀得率的影響。結(jié)果表明,pH調(diào)節(jié)法回收羅非魚-豆粕共沉淀蛋白的最佳酸溶pH2.0、3.0,堿溶pH11.0、12.0,原料比1∶1,溶解時(shí)間30 min;SDS-PAGE分析顯示,可溶性共沉淀蛋白條帶深/淺(極端pH2.0蛋白降解),表明可溶性蛋白含量高/低,從分子量分布范圍可知,共沉淀蛋白主要由肌球蛋白重鏈、7 S抗原蛋白的三個(gè)亞基、肌動(dòng)蛋白、肌球蛋白輕鏈、11 S抗原蛋白的兩個(gè)亞基和小分子水溶性蛋白組成,表示可溶性共沉淀蛋白組成齊全;酸/堿可溶性共沉淀蛋白最佳沉淀pH為4.5,在此條件下,溶解、沉淀過程的蛋白得率分別為88.05%～94.70%。經(jīng)冷凍干燥得到共沉淀蛋白粉即Co-p(1∶1),其蛋白含量高于85%,脂肪含量在0.84%左右,灰分含量低于4.17%;可用pH調(diào)節(jié)法回收羅非魚-豆粕共沉淀蛋白。

羅非魚肉,脫脂豆粕,共沉淀蛋白,蛋白得率

Abstract:Co-precipitation protein was prepared from Tilapia muscle and defatted soybean meal by pH-shifting. Effect of pH value,mixing ratios of tilapia to defatted soybean meal,dissolving time on soluble protein yield was determined in the extraction process. And then effect of pH value on precipitated protein yield was examined as well. The results showed that the solubility of co-precipitation protein was best under the conditions of dissolution that the optimal pH value was 2.0,3.0,11.0,and 12.0,the tilapia to defatted soybean meal 1∶1,and the dissolving time of 30 min. The SDS-PAGE results showed that soluble co-precipitation protein bands of deep/shallow showed that the content of soluble co-precipitation protein of high/low(protein degradation at pH2.0). According to the distribution of molecular weight,it was found that the co-precipitation protein consisted mainly of myosin heavy chain,actin,myosin light chain,small molecule water soluble protein,three subunits of the antigen protein of 7 S and two subunits of the antigen protein of 11 S,which showed that the composition of soluble co-precipitation protein was complete. The precipitation condition of soluble co-precipitation protein was pH4.5. In the above four conditions,the recovered protein yields from tilapia muscle and soybean meal were 88.05%～94.70% by acid/alkaline solubilization and precipitation processing. The co-precipitated protein powder,Co-p(1∶1),was obtained by freeze-drying. The protein content was above 85%,the fat content was about 0.84%,and the ash content was less than 4.17%. The use of pH-shifting method was beneficial for the recovery of co-precipitated protein.

Keywords:tilapia muscle;defatted soybean meal;co-precipitate protein;protein yield

共沉淀蛋白(Co-precipitates protein,Co-p)是指采用等電點(diǎn)沉淀、酸-熱沉淀、或酸-熱誘導(dǎo)并輔以沉淀劑如CaCl2等方法,從一種或者多種原料中得到的一種混合蛋白[1],其提取工藝和其功能特性的研究，國外研究文獻(xiàn)報(bào)道較多,主要分為三大類[1]:用酸-熱誘導(dǎo)并輔以CaCl2制備乳制品共沉淀蛋白(乳清-酪蛋白共沉淀蛋白)[2]、等電點(diǎn)沉淀制備的植物共沉淀蛋白(大豆-花生共沉淀蛋白)[3]、酸-熱沉淀法制備的乳植物共沉淀蛋白(乳清-大豆共沉淀蛋白)[4]。不同來源的蛋白質(zhì)制備的共沉淀蛋白,不僅在營養(yǎng)上可以實(shí)現(xiàn)氨基酸的互補(bǔ)[5],而且具有良好的功能特性[2-4]和理想的感官特性[1,6]。添加1%乳蛋白共沉淀的豬肉香腸與未添加的豬肉香腸相比有較好的乳化性和風(fēng)味、多汁和較低的膽固醇含量[6];等電點(diǎn)沉淀法制備的鷹嘴豆-芝麻共沉淀蛋白與單個(gè)分離蛋白相比較,有較高的營養(yǎng)價(jià)值、較好的功能特性(如乳化性、持水性、發(fā)泡性等)和較好的必需氨基酸組成,含有較低水平的抗?fàn)I養(yǎng)因子,且易于人體消化吸收[5];用酸熱沉淀法制備的乳清-大豆共沉淀蛋白,其凝膠性和持水性均優(yōu)于兩種分離蛋白[4];牛乳與大豆組成的雙蛋白發(fā)揮各自的生理調(diào)節(jié)功效,且有混合消化吸收效率,混合蛋白與單一乳清蛋白相比,能夠持續(xù)性的激活mTORC1信號(hào)通路,有助于運(yùn)動(dòng)后肌肉蛋白的合成,從而改善人體肌肉健康[7]。

因此,共沉淀蛋白在食品工業(yè)中有巨大的潛在應(yīng)用。本研究結(jié)合羅非魚蛋白(fish protein isolate,FPI)的營養(yǎng)優(yōu)勢[8]和大豆蛋白(soybean protein isolate,SPI)的功能特性優(yōu)勢[9],以羅非魚肉和脫脂豆粕為原料,用pH調(diào)節(jié)法制備共沉淀蛋白,開發(fā)新型“雙蛋白”制品,擴(kuò)大優(yōu)質(zhì)動(dòng)物蛋白和優(yōu)質(zhì)植物蛋白相結(jié)合的健康型食品的應(yīng)用范圍。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

低溫脫脂豆粕(粗蛋白含量43.75%±0.06%) 購于湖北荊州三菱湖小漁村生產(chǎn),在實(shí)驗(yàn)室經(jīng)萬能粉碎機(jī)粉碎后過100目篩備用;羅非魚(粗蛋白含量15.76%±0.23%) 購于湛江水產(chǎn)市場,鮮活迅速運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室,取背部白肉,絞碎后分裝(500 g/袋),于-20 ℃冷凍備用;試劑 均為分析純。

PHSJ-4A型數(shù)顯pH計(jì) 上海雷磁儀器廠;JJ-1型電動(dòng)攪拌器 江蘇省金壇市環(huán)宇科學(xué)儀器廠;Avanti J-26sxp高效離心機(jī) 美國Beckman公司;ECP3000電泳儀、DYCZ-24DN雙垂直電泳槽 北京六一儀器廠;UVP凝膠成像系統(tǒng) 美國UVP公司;VAP-450凱氏定氮消化爐、凱氏定氮蒸餾器 德國Gerhardf公司;FDU-1100真空冷凍干燥機(jī) 日本托普儀器有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 羅非魚-豆粕共沉淀蛋白制備工藝 羅非魚魚肉(實(shí)驗(yàn)之前取樣,室溫解凍)和脫脂豆粕粉以不同的質(zhì)量比混合(干基計(jì))→加冰蒸餾水[物料∶水=1∶9 (g∶mL)]→均質(zhì)2 min→調(diào)pH→室溫溶解一定的時(shí)間→離心(10000 r/min,20 min,4 ℃)→過濾→上清液→調(diào)pH使其沉淀→離心(10000 r/min,20 min,4 ℃)→沉淀加少量冰水分散,調(diào)pH7.0→真空冷凍干燥(開啟制冷開關(guān),待溫度降至-30 ℃以下之后,放置樣品,開啟真空泵,真空降至10 Pa以下)→Co-p→真空包裝-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 羅非魚-豆粕共沉淀蛋白溶解曲線實(shí)驗(yàn) 按照上述制備工藝流程,羅非魚魚肉和脫脂豆粕粉分別按1∶1、1∶2和2∶1的質(zhì)量比混合(干基計(jì)),以不添加脫脂豆粕粉(1∶0)和不添加羅非魚肉(0∶1)為對(duì)照組,固定溶解時(shí)間30 min,調(diào)pH為2～12(變化區(qū)間為0.5或者1個(gè)pH單位),離心后收集上清液即為可溶性魚肉蛋白、大豆蛋白和共沉淀蛋白,采用自動(dòng)凱氏定氮法[10]測定上清液和原料中的粗蛋白含量(N×6.25),計(jì)算公式如下:

溶解得率(%)=上清液中粗蛋白含量(g)/所用原料中粗蛋白的含量(g)×100

式(1)

1.2.3 SDS-PAGE電泳 對(duì)不同pH和原料比溶解條件下(見1.2.2)的可溶性蛋白上清液進(jìn)行SDS-PAGE電泳分析。SDS-PAGE電泳采用分離膠濃度為12%、濃縮膠濃度為5%[11]的變性聚丙烯酰胺凝膠進(jìn)行還原電泳。樣品上清液與SDS-PAGE上樣緩沖液相混合(4∶1,v/v),加入電泳槽之前煮沸6 min,等體積即上樣體積均為10 μL,用R-250考馬斯亮藍(lán)進(jìn)行染色,脫色采用高甲醇的醋酸溶液,即加75 mL的醋酸,50 mL甲醇,然后用水定容至1 L。

1.2.4 羅非魚-豆粕共沉淀蛋白溶解時(shí)間實(shí)驗(yàn) 在最適酸溶pH2.0、3.0和堿溶pH11.0、12.0條件下,羅非魚魚肉和脫脂豆粕粉分別按1∶1、1∶2和2∶1的質(zhì)量比混合(干基計(jì)),考察溶解時(shí)間(10～60 min)對(duì)蛋白得率的影響。離心后收集上清液,采用自動(dòng)凱氏定氮法(N×6.25)[10]測定樣品中粗蛋白含量,計(jì)算參考公式(1)。

1.2.5 羅非魚-豆粕共沉淀蛋白沉淀pH實(shí)驗(yàn) 羅非魚魚肉和脫脂豆粕粉分別按1∶1、1∶2和2∶1的質(zhì)量比混合(干基計(jì)),在最適酸溶pH2.0、3.0和堿溶pH11.0、12.0,溶解30 min,制備羅非魚-豆粕共沉淀蛋白,考察沉淀pH對(duì)可溶性共沉淀蛋白沉淀得率的影響。沉淀和可溶性蛋白中粗蛋白含量采用自動(dòng)凱氏定氮法(N×6.25)[10]檢測,計(jì)算公式如下:

沉淀得率(%)=沉淀中粗蛋白含量(g)/可溶性蛋白中粗蛋白的含量(g)×100

式(2)

1.2.6 基本成分的測定 水分的測定:直接干燥法GB/T5009.3-2010《食品中水分的測定》[12];粗蛋白的測定:自動(dòng)凱氏定氮法GB/T5009.5-2010《食品中蛋白質(zhì)的測定》[10];粗脂肪的測定:索氏抽提法GB/T14772-2008《食品中脂肪的測定》[13];灰分的測定:干法灰化法GB/T5009.4-2010《食品中灰分的測定》[14]。

1.2.7 數(shù)據(jù)分析 采用SPSS 13.0軟件,以p<0.05為差異進(jìn)行顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 羅非魚-豆粕共沉淀蛋白溶解條件的確定

2.1.1 羅非魚-豆粕共沉淀蛋白溶解曲線的確定 不同pH和原料比對(duì)可溶性蛋白溶解性的影響,如圖1所示。在實(shí)驗(yàn)范圍內(nèi),可溶性魚肉蛋白、大豆蛋白及共沉淀蛋白溶解性隨pH的變化趨勢基本一致,溶解曲線均呈現(xiàn)U型,類似于羅非魚和大豆[15]、大豆[16]、魷魚[17]的溶解曲線。1∶1制備的可溶性蛋白在pH4.5～5.5范圍內(nèi),可溶性蛋白溶解得率最低,主要是在等電點(diǎn)pH范圍內(nèi),蛋白質(zhì)分子表面凈電荷幾乎為零,分子間的靜電斥力消失,水合作用最弱,分子容易聚集沉淀,溶解度降低[18]。偏離等電點(diǎn)的酸性和堿性pH范圍內(nèi),可溶性蛋白得率呈現(xiàn)上升趨勢,且在極端酸堿pH2.0、3.0、11.0、12.0條件下得率達(dá)到最大。這是因?yàn)樗嵝詶l件下,由于天門冬氨酸和谷氨酸的殘基的支鏈羧基所帶的負(fù)電荷被中和,所以蛋白分子帶有凈正電荷;堿性條件下,部分氨基酸的堿性基團(tuán),如精氨酸和賴氨酸的支鏈胍基或者氨基等發(fā)生了去質(zhì)子化反應(yīng),導(dǎo)致蛋白分子帶有凈負(fù)電荷,蛋白與水分子作用增加,蛋白溶解性也增大[19]。另外,在其他條件相同時(shí),不同質(zhì)量比混合得到的可溶性蛋白的溶解得率也不完全相同,在酸性范圍內(nèi),如極端pH2.0和3.0時(shí),可溶性魚肉蛋白的溶解得率最高,在73%左右,其次分別是羅非魚肉和脫脂豆粕粉以質(zhì)量比(干基計(jì))2∶1、1∶1和1∶2制備的可溶性共沉淀蛋白,但其溶解得率均低于70%;而在堿性范圍內(nèi),如極端pH11.0和12.0時(shí),2∶1制備的可溶性共沉淀蛋白的溶解得率在70%以上,可溶性魚肉蛋白與1∶1、1∶2制備的可溶性共沉淀蛋白溶解得率差異不大,溶解得率均在67%左右,可能是在酸性范圍內(nèi),魚肉蛋白的水合作用占主導(dǎo)地位,在堿性范圍內(nèi),則是大豆蛋白的水合作用占優(yōu)勢,以及魚肉蛋白與大豆蛋白的相互作用;由此設(shè)定進(jìn)一步研究的最適酸溶pH為2.0和3.0,堿溶pH為11.0和12.0,沉淀pH范圍為4.5～5.5。

圖1 pH和原料比對(duì)可溶性蛋白溶解得率的影響Fig.1 Effect of pH value and raw material ratio on the solubility of soluble protein

2.1.2 羅非魚-豆粕共沉淀蛋白的電泳分析 上述各pH和原料比條件下提取的可溶性蛋白上清液,(等體積)進(jìn)行SDS-PAGE電泳分析,結(jié)果見圖2。對(duì)于溶解得率較低的pH范圍,電泳結(jié)果顯示的只有輕鏈條帶,未見重鏈,蛋白條帶顏色較淺,說明在等電點(diǎn)范圍內(nèi),可溶性蛋白的溶解性比較低。在極端酸性條件(pH2.0)伴隨肌球蛋白重鏈發(fā)生降解[20],小分子蛋白有所形成。極端酸性pH3.0(除大豆蛋白)和極端堿性pH11.0、12.0處理下得到的電泳圖譜的蛋白條帶顏色較深,表明可溶性蛋白含量較高,這與圖1可溶性魚肉蛋白、大豆蛋白及不同共沉淀蛋白的溶解曲線相符合。

可溶性魚肉蛋白電泳圖譜顯示，分子量在200～6.5 kDa范圍內(nèi)是連續(xù)分布的,且在200、44.3、20.1、6.5 kDa處均出現(xiàn)比較明顯的蛋白條帶,分別對(duì)應(yīng)肌球蛋白重鏈、肌動(dòng)蛋白、肌球蛋白輕鏈和小分子水溶性蛋白,類似于不同pH條件下可溶性魚肉蛋白的電泳圖譜[18]。由圖1可知，可溶性大豆蛋白在堿性條件下較酸性溶解性好,堿性范圍大豆蛋白主要由大豆球蛋白(11 S球蛋白)和β-大豆伴球蛋白(7 S球蛋白)組成,可溶性大豆蛋白電泳圖譜也顯示,在pH11.0～12.0之間,蛋白條帶顏色較深,溶解性較好。分子量約為71、67、50 kDa分別對(duì)應(yīng)著大豆蛋白中7 S抗原蛋白的三個(gè)亞基,分子量約為32、20 kDa分別對(duì)應(yīng)著大豆蛋白中11 S抗原蛋白的兩個(gè)亞基?？扇苄怨渤恋淼鞍纂娪緢D譜與魚肉蛋白和大豆蛋白電泳圖譜不完全相同,SDS-PAGE電泳圖譜顯示其蛋白組成齊全,共沉淀蛋白主要由肌球蛋白重鏈、7 S抗原蛋白的三個(gè)亞基、肌動(dòng)蛋白、肌球蛋白輕鏈、11 S抗原蛋白的兩個(gè)亞基和小分子水溶性蛋白組成,且共沉淀蛋白對(duì)魚肉蛋白的肌動(dòng)蛋白和大豆蛋白的7 S抗原蛋白有一定的降解,還出現(xiàn)了其他的雜蛋白組分,可能是制備共沉淀蛋白時(shí),兩種蛋白相互作用形成新的蛋白。由此進(jìn)一步表明可溶性蛋白的最適酸溶pH為2.0和3.0,堿溶pH為11.0和12.0,而最佳沉淀pH范圍在4.0～6.0。

圖2 不同pH和原料比下可溶性蛋白的SDS-PAGE圖Fig.2 SDS-PAGE patterns of soluble proteins with different pH values and raw materials注:(a)、(b)、(c)、(d)、(e)分別表示可溶性魚肉蛋白、大豆蛋白和原料比1∶1、1∶2、2∶1可溶性共沉淀蛋白的電泳圖譜。

2.1.3 羅非魚-豆粕共沉淀蛋白溶解時(shí)間的確定 羅非魚與脫脂豆粕以不同質(zhì)量比混合,在pH2.0、3.0、11.0、12.0室溫溶解,實(shí)驗(yàn)溶解時(shí)間(10～60 min)對(duì)可溶性蛋白溶解得率的影響,結(jié)果如圖3所示。隨著溶解時(shí)間的延長,可溶性蛋白的溶解得率也略有增大;但不同pH條件下的大豆蛋白的溶解得率變化較大(p<0.05),且pH12.0時(shí)溶解30 min的蛋白溶解得率最高為55.28%左右;而不同pH條件下的魚肉蛋白的溶解得率有所差異,且pH12.0時(shí)溶解60 min的蛋白得率最高為83.36%左右;相同時(shí)間,可溶性蛋白在堿性條件下的溶解得率高于酸性條件,表明pH對(duì)可溶性蛋白的溶解影響作用較明顯。另外,在相同時(shí)間內(nèi)不同質(zhì)量比混合提取的可溶性共沉淀蛋白的溶解得率也有差別。在不同pH,30 min溶解時(shí),1∶1制備的可溶性共沉淀蛋白的溶解得率為54.57%～76.85%,與魚肉蛋白的蛋白溶解得率(66.97%～78.20%)較接近,而2∶1制備的可溶性共沉淀蛋白的溶解得率高于可溶性魚肉蛋白,可能是由于增加了一倍的魚肉才導(dǎo)致蛋白的溶解得率較高,但這會(huì)導(dǎo)致購買的原料及費(fèi)用增加?？扇苄缘鞍自跇O端酸性/堿性條件下的溶解及相應(yīng)蛋白質(zhì)分子的化學(xué)展開是在瞬間進(jìn)行的[18],進(jìn)一步說明pH及不同質(zhì)量比混合的原料對(duì)可溶性蛋白溶解過程影響最明顯?？紤]到溶解時(shí)間太短,大豆蛋白的溶出得率較低[21],時(shí)間太長,可溶性蛋白的水解程度變大,因此為了盡可能的避免可溶性共沉淀蛋白的水解變性,設(shè)定溶解時(shí)間為30 min。

圖3 溶解時(shí)間對(duì)可溶性蛋白溶解得率的影響Fig.3 Effect of extraction time on the solubility of soluble protein注:(a)、(b)、(c)、(d)、(e)分別表示不同溶解時(shí)間下可溶性魚肉蛋白、大豆蛋白、2∶1、1∶1及1∶2制備的可溶性共沉淀蛋白的溶解得率,每張圖的字母表示不同pH和不同時(shí)間下的所有溶解得率的顯著性差異,不同的字母表示差異顯著(p<0.05)。

表1 不同原料蛋白粉的基本成分(%)Table 1 Basic ingredients of different raw protein powder(%)

注:同列不同的字母表示差異顯著(p<0.05)。

2.2 羅非魚-豆粕共沉淀蛋白沉淀pH的確定

在最適酸溶pH2.0和3.0,堿溶pH11.0和12.0,溶解30 min,羅非魚和脫脂豆粕分別按1∶1、1∶2和2∶1的質(zhì)量比混合(干基計(jì))提取酸/堿可溶性共沉淀蛋白,結(jié)合上述溶解曲線,考查pH4.5～5.5范圍內(nèi)可溶性共沉淀蛋白的沉淀得率,結(jié)果如圖4所示。由圖4可知,在實(shí)驗(yàn)pH范圍內(nèi),三種可溶性共沉淀蛋白溶液在pH4.5～5.5沉淀,其沉淀蛋白的得率均在79.63%以上,原料比1∶1提取的可溶性蛋白溶液在pH2.0、3.0、11.0和12.0溶解,pH4.5沉淀時(shí),沉淀得率分別達(dá)到88.05%、89.25%、94.70%、94.01%,且三種不同原料比得到的可溶性蛋白液,均在pH4.5沉淀時(shí)的得率高于pH5.0和pH5.5的沉淀得率,由此表明酸/堿可溶性共沉淀蛋白的最適等電點(diǎn)為4.5。乳清-大豆共沉淀蛋白的最大得率是在40 ℃條件下提取,并在pH4.5、98 ℃沉淀[4],而對(duì)于植物蛋白酸沉等電點(diǎn)pH一般相對(duì)較低[22]。有可能羅非魚與豆粕混合后,酸沉等電點(diǎn)的pH偏向于豆粕的等電點(diǎn)。

圖4 沉淀pH對(duì)酸/堿可溶性共沉淀蛋白沉淀得率的影響Fig.4 Effect of pH value on precipitating yield of acid/alkali-soluble co-precipitates protein注:(a)、(b)、(c)分別表示1∶1、2∶1及1∶2制備的可溶性共沉淀蛋白的沉淀得率,每張圖的字母表示不同溶解pH和不同沉淀pH下的所有沉淀得率的顯著性差異,不同的字母表示差異顯著(p<0.05)。

2.3 不同原料比制備的分離蛋白粉基本成分分析

在圖1溶解曲線的基礎(chǔ)上,選取極端酸堿(pH2.0、12.0)條件下可溶性蛋白溶解得率差異比較大的幾種可溶性蛋白,然后可溶性魚肉蛋白(沉淀pH5.5)、大豆蛋白(沉淀pH4.5)[23]、共沉淀蛋白(沉淀pH4.5)在各自等電點(diǎn)沉淀,經(jīng)冷凍干燥得到羅非魚分離蛋白粉(FPI)、大豆分離蛋白粉(SPI)及共沉淀蛋白粉(Co-p)。Co-p、FPI、SPI的基本成分見表1。由表1可知,各分離蛋白粉粗蛋白含量比較高,均大于83.94%。與FPI和SPI粗蛋白含量相比,羅非魚與脫脂豆粕以質(zhì)量比2∶1混合,pH12.0溶解,pH4.5沉淀制備的Co-P(2∶1)的粗蛋白含量最高(89.55%);其次是pH2.0溶解,pH4.5沉淀制備的Co-P(1∶1),為88.05%,兩者無顯著性差異(p>0.05)。各蛋白粉樣品的粗脂肪均低于1.06%,且堿溶酸沉脂肪含量低于酸溶酸沉含量。另外,不同分離蛋白粉的灰分含量均低于6.73%,且Co-P(1∶2)和Co-P(2∶1)的灰分含量高于Co-P(1∶1),表明原料按1∶1采用pH調(diào)節(jié)法得到的共沉淀蛋白粉可以有效除去羅非魚肉和脫脂豆粕粉中含有的Mg、Fe等鹽類和其他不容性雜質(zhì)?？傮w而言,經(jīng)冷凍干燥得到共沉淀蛋白粉即Co-p(1∶1),其蛋白含量均在85%以上,脂肪含量在0.84%左右,灰分含量低于4.17%;考慮到原料的費(fèi)用及粗蛋白含量,選取原料1∶1制備共沉淀蛋白更為合理,所得蛋白粉的蛋白含量較高,適于做蛋白功能性質(zhì)的研究。

3 結(jié)論

采用pH調(diào)節(jié)法制備羅非魚-豆粕共沉淀蛋白的最佳溶解條件為羅非魚肉與脫脂豆粕以原料比1∶1混合(干基計(jì)),最適酸溶pH為2.0和3.0,堿溶pH為11.0和12.0,溶解時(shí)間30 min;SDS-PAGE分析顯示,可溶性共沉淀蛋白條帶深/淺(極端pH2.0蛋白降解),表明可溶性蛋白含量高/低,共沉淀蛋白主要由肌球蛋白重鏈、7 S抗原蛋白的三個(gè)亞基、肌動(dòng)蛋白、肌球蛋白輕鏈、11 S抗原蛋白的兩個(gè)亞基和小分子水溶性蛋白組成,表示可溶性共沉淀蛋白組成齊全;酸/堿可溶性共沉淀蛋白的最佳沉淀?xiàng)l件為pH4.5,在此條件下,溶解、沉淀過程的蛋白得率分別為88.05%、89.25%、94.70%和94.01%;經(jīng)pH2.0、4.5、pH12.0、4.5冷凍干燥得到Co-p(1∶1),蛋白含量均在85%以上,脂肪含量在0.84%左右,灰分含量低于4.17%。因此,采用pH調(diào)節(jié)法更適于回收羅非魚-豆粕共沉淀蛋白。

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Extractionprocessandcompositionanalysisofco-precipitatedproteinfromtilapiamuscleandsoybeanmeal

QIHui-hong,ZHOUChun-xia*,ZHUPan-hong,LITing,HONGPeng-zhi

(College of Food Science and Technology,Guangdong Ocean University,Guangdong Provincial Key Laboratory of Aquatic Product Processing and Safety,Key Laboratory of Advanced Processing of Aquatic Products of Guangdong Higher Education Institution,Zhanjiang 524088,China)

TS201.1

B

1002-0306(2017)18-0201-06

2017-02-07

齊慧紅(1992-),女,碩士研究生,研究方向:羅非魚-豆粕共沉淀蛋白,E-mail:13078279613@163.com。

*通訊作者:周春霞(1979-)，女,博士,副教授,研究方向:水產(chǎn)品加工與貯藏,E-mail:chunxia.zhou@163.com。

廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目(2015A020209168)。

10.13386/j.issn1002-0306.2017.18.038