周清清， 彭 建， 江 虹

(長(zhǎng)江師范學(xué)院化學(xué)化工學(xué)院，重慶 408100)

鹽酸格拉司瓊屬抗腫瘤類輔助藥，主要用于治療因放射治療及細(xì)胞毒類藥物化療引起的惡心和嘔吐，在臨床上廣泛應(yīng)用，是臨床上的首選藥物。目前測(cè)定格拉司瓊的方法主要是高效液相色譜法[1 - 5]，也有電化學(xué)法[6]和液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[7 - 8]等報(bào)道。高效液相色譜法前處理較麻煩、費(fèi)時(shí)，不能滿足急檢的需要。本工作采用儀器價(jià)廉，操作簡(jiǎn)單、并有較高靈敏度的分光光度法研究格拉司瓊的測(cè)定方法，迄今未見文獻(xiàn)報(bào)道。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在弱堿性條件下，酸性雙偶氮染料偶氮胂Ⅲ能與格拉司瓊發(fā)生顯色反應(yīng)生成離子締合物，新物質(zhì)的吸光度與一定濃度范圍的格拉司瓊的濃度呈線性關(guān)系，服從朗伯-比爾定律。方法用于鹽酸格拉司瓊藥物及人體血液中格拉司瓊的測(cè)定，回收率為99.2%～102%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.8%～2.3%。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

U-4100型紫外-可見-近紅外分光光度計(jì)(日本，日立公司)；pHS-3C精密酸度計(jì)(上海虹益儀器儀表有限公司)。

偶氮胂Ⅲ(AZO Ⅲ，麥卡希試劑有限公司)溶液：1.0×10-3mol/L。格拉司瓊(GRS，重慶藥檢所提供)標(biāo)準(zhǔn)溶液：312.4 mg/L，冰箱4 ℃保存，操作液為31.24 mg/L。pH=3.0～9.5的Tris-HCl緩沖溶液：0.10 mol/L的HCl和0.20 mol/L Tris溶液混合，用酸度計(jì)測(cè)定。所有試劑均為分析純，實(shí)驗(yàn)用水為二次蒸鎦水。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

于10 mL具塞比色管中，準(zhǔn)確加入適量的31.24 mg/L格拉司瓊標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣液，0.50 mL pH=7.76的Tris-HCl緩沖溶液和1.5 mL 1.0×10-3mol/L偶氮胂Ⅲ溶液，用水稀至10 mL，搖勻，10 min后，用1 cm 比色皿，以試劑空白為參比，于648 nm或602 nm處測(cè)定溶液的吸光度A。

2 結(jié)果與討論

2.1 光譜特征

圖1 吸收光譜Fig.1 The absorption spectra 1.3.12 mg/L GRS;2.1.5×10-4 mol/L AZO Ⅲ;1-2.against water;3-9.(0.625,1.25,1.87,2.50,3.12,3.75,4.37 mg/L)GRS-1.5×10-4 mol/L AZO Ⅲ,against reagent blank;pH=7.76.

從圖1可知，在400～700 nm范圍內(nèi)，格拉司瓊幾乎無吸收，偶氮胂Ⅲ有較強(qiáng)吸收，最大吸收波長(zhǎng)位于556 nm。當(dāng)在弱堿性的格拉司瓊?cè)芤褐屑尤肱嫉息笕芤汉螅涨€上出現(xiàn)兩個(gè)較大的吸收峰，最大吸收波長(zhǎng)位于648 nm，紅移92 nm，次大吸收波長(zhǎng)位于602 nm，紅移46 nm，表明格拉司瓊與偶氮胂Ⅲ反應(yīng)確實(shí)生成了新物質(zhì)。新物質(zhì)在648 nm和602 nm波長(zhǎng)處，其吸光度與一定濃度范圍內(nèi)的格拉司瓊的質(zhì)量濃度呈正比，服從朗伯-比爾定律，故可用于格拉司瓊的定量分析。

反應(yīng)機(jī)理：偶氮胂Ⅲ是酸性雙偶氮染料，磺酸根上的氫可離解，使自身帶負(fù)電荷，故可與質(zhì)子化的格拉司瓊以靜電引力結(jié)合生成離子締合物。

2.2 反應(yīng)條件的選擇

2.2.1溶液酸度室溫下，試驗(yàn)了不同pH的Tris-HCl緩沖溶液對(duì)體系靈敏度的影響。結(jié)果表明：在弱堿性溶液中，體系有較大靈敏度。實(shí)驗(yàn)用pH=7.76的Tris-HCl溶液，用量以0.5 mL 為宜。

2.2.2顯色劑的濃度室溫下，試驗(yàn)了不同濃度的偶氮胂Ⅲ溶液對(duì)體系靈敏度的影響。結(jié)果表明：偶氮胂Ⅲ溶液濃度為1.5×10-4mol/L時(shí)，體系有較大靈敏度。實(shí)驗(yàn)用1.0×10-3mol/L偶氮胂Ⅲ溶液，用量為1.5 mL。

2.2.3試劑加入順序室溫下，試驗(yàn)了偶氮胂Ⅲ、格拉司瓊及Tris-HCl溶液在不同加入順序時(shí)對(duì)體系靈敏度的影響。結(jié)果表明：按任意順序加入試劑，基本不改變體系的靈敏度。故實(shí)驗(yàn)時(shí)可以任意順序加入試劑。

2.2.4反應(yīng)時(shí)間室溫下，試驗(yàn)了不同反應(yīng)時(shí)間對(duì)體系靈敏度的影響。結(jié)果表明：偶氮胂Ⅲ與格拉司瓊的反應(yīng)在10 min內(nèi)即可完成，其穩(wěn)定時(shí)間至少1 h。實(shí)驗(yàn)選在10 min后測(cè)定。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線

在最佳條件下配制標(biāo)準(zhǔn)系列溶液并按實(shí)驗(yàn)方法掃描吸收光譜，作A-c工作曲線。該方法的一元線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)、線性范圍及表觀摩爾吸光系數(shù)等列于表1。

表1 標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)參數(shù)

2.4 共存物質(zhì)的影響

2.5 樣品的測(cè)定

取成都恒瑞制藥有限公司鹽酸格拉司瓊片10粒于小燒杯中，用水溶解并過濾，濾液轉(zhuǎn)入1 000 mL容量瓶中，定容至刻度，搖勻，得待測(cè)液1#。取成都普什制藥有限公司鹽酸格拉司瓊注射液1支，內(nèi)容物置于500 mL容量瓶中，用水稀至刻度，搖勻，得待測(cè)液2#。取重慶涪陵中心醫(yī)院提供的新鮮人體血樣適量，以4 000 r/min離心分離20 min，取上清液1.0 mL于離心管中，加入2.0 mL甲醇，搖勻，溶液離心分離10 min，將離心液用水定容至25.0 mL，得待測(cè)液3#。

取上述各待測(cè)液2.0 mL，分別按實(shí)驗(yàn)方法配制溶液并在602 nm處測(cè)定，各平行測(cè)定6份，同時(shí)作加標(biāo)回收試驗(yàn)(n=6)，結(jié)果見表2。

表2 樣品分析結(jié)果及回收試驗(yàn)(n=6)

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3 結(jié)論

在弱堿性條件下，用偶氮胂Ⅲ分光光度法可測(cè)定格拉司瓊的含量，方法簡(jiǎn)便、快速、有較高的的靈敏度和選擇性，可用于鹽酸格拉司瓊片劑、注射液及人血中格拉司瓊的準(zhǔn)確測(cè)定。