王 輝 王 恬

南陽(yáng)南石醫(yī)院，河南 南陽(yáng) 473002

·論著 臨床診治·

自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療腦出血

王 輝 王 恬

南陽(yáng)南石醫(yī)院，河南 南陽(yáng) 473002

目的 探討自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)移植治療對(duì)腦出血患者外周血中內(nèi)皮祖細(xì)胞活化度及神經(jīng)功能的影響。方法 選擇2014-06—2016-06南陽(yáng)南石醫(yī)院86例腦出血患者，依據(jù)治療方案不同分為2組各43例。對(duì)照組僅采取常規(guī)微創(chuàng)血腫清除術(shù)治療，觀察組在對(duì)照組基礎(chǔ)上聯(lián)合自體BMSCs移植治療，統(tǒng)計(jì)對(duì)比2組治療后1周、2周、3周、4周外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞活化度與治療后3周、4周神經(jīng)功能缺損評(píng)分、日常生活能力評(píng)分及神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子[神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)、腦源性神經(jīng)生長(zhǎng)因子(BDNF)]水平。結(jié)果 觀察組治療后1周、2周、3周、4周內(nèi)皮祖細(xì)胞活化度較對(duì)照組提高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；觀察組治療后3周、4周神經(jīng)功能缺損評(píng)分較對(duì)照組降低，日常生活能力評(píng)分均較對(duì)照組提高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；觀察組治療后3周、4周NGF、BDNF水平均較對(duì)照組提高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 對(duì)腦出血患者應(yīng)用自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療效果顯著，可明顯減輕患者神經(jīng)功能損傷，提高內(nèi)皮祖細(xì)胞與神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子水平，促進(jìn)其神經(jīng)功能恢復(fù)，提升其日常生活能力。

骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞；腦出血；內(nèi)皮祖細(xì)胞；神經(jīng)功能

腦出血(cerebral hemorrhage)為神經(jīng)系統(tǒng)常見(jiàn)疾病之一，其年發(fā)病率為(60～80)/10萬(wàn)，占全部腦卒中20%～30%，且急性期病死率為30%～40%，生存患者中大部分會(huì)遺留不同程度殘疾，日常生活能力降低甚至喪失，嚴(yán)重影響其生命健康及生活質(zhì)量[1-2]。微創(chuàng)血腫清除術(shù)為治療腦出血主要方法之一，可有效清除腦血腫、降低顱內(nèi)壓，但因血腫壓迫與血腫清除手術(shù)的創(chuàng)傷，患者術(shù)后常會(huì)遺留神經(jīng)功能損傷。王旭等[3]研究指出，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs)可通過(guò)向受損腦組織遷移及分化神經(jīng)細(xì)胞，有利于患者神經(jīng)功能恢復(fù)和重建。本研究為進(jìn)一步觀察自體BMSCs移植治療對(duì)腦出血患者外周血中內(nèi)皮祖細(xì)胞活化度及神經(jīng)功能的影響，選擇86例腦出血患者進(jìn)行分組比較，報(bào)道如下。

1 資料及方法

1．1 一般資料 選擇2014-06—2016-06南陽(yáng)南石醫(yī)院86例腦出血患者，依據(jù)治療方案不同分為2組各43例。入選患者均經(jīng)頭顱CT與MRI檢查確診為腦出血，入院時(shí)格拉斯哥昏迷評(píng)分為5～12分，血腫相對(duì)穩(wěn)定，均在腦出血后48 h之內(nèi)入院實(shí)施血腫清除術(shù)，生命體征穩(wěn)定，排除合并嚴(yán)重肝腎等其他臟器功能障礙者。其中觀察組男28例，女15例；年齡34～76(51.48±8.26)歲；出血部位：基底節(jié)區(qū)34例，腦橋5例，丘腦4例，合并高血壓27例，高血脂癥13例。對(duì)照組男26例，女17例；年齡35～78(52.18±8.37)歲；出血部位：基底節(jié)區(qū)33例，腦橋5例，丘腦5例，合并高血壓24例，高血脂癥14例。2組基本資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本研究經(jīng)我院倫理委員會(huì)審核通過(guò)，患者均簽署知情同意書。

1．2 方法

1．2．1 治療方法：對(duì)照組僅采取常規(guī)微創(chuàng)血腫清除術(shù)治療：依據(jù)CT血腫定位結(jié)果確定進(jìn)針位置，穿刺后對(duì)血塊進(jìn)行抽吸，首次抽取量為總體積20%，之后注射尿激酶(河北智同生物制藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字：H13020276)溶解血塊并經(jīng)由軟管吸出。觀察組在對(duì)照組基礎(chǔ)上聯(lián)合自體BMSCs移植治療：局部麻醉，實(shí)施骨穿操作，抽取10 mL骨髓，將粒細(xì)胞分離并以DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基實(shí)施培養(yǎng)，3 d后換液加入重組人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、表皮生長(zhǎng)因子，繼續(xù)培養(yǎng)2周，進(jìn)行傳代擴(kuò)增，之后以全反式維甲酸、膠質(zhì)源性神經(jīng)生長(zhǎng)因子、腦源性神經(jīng)生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)分化，成功后將細(xì)胞密度調(diào)節(jié)至1×109個(gè)/L；應(yīng)用分化后BMSCs分別于血腫清除治療后第1天、1周、2周、3周、4周時(shí)經(jīng)由腰椎穿刺輸注至蛛網(wǎng)膜下腔，輸注體積為1 mL；微創(chuàng)血腫清除術(shù)操作方法同對(duì)照組。

1．2．2 檢測(cè)方法：外周血中內(nèi)皮祖細(xì)胞活化度檢測(cè)方法：分別在治療前與治療后1周、2周、3周、4周采集2組6 mL外周血，分離單個(gè)核細(xì)胞并孵育CD34、CD133單克隆抗體之后檢測(cè)CD34+CD133+雙陽(yáng)性細(xì)胞所占比；神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子檢測(cè)方法：分別于治療前與治療后3周、4周采集2組5 mL外周血，離心獲得血清，以酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)NGF、BDNF水平。

1．3 觀察指標(biāo) (1)檢測(cè)對(duì)比2組治療前與治療后1周、2周、3周、4周外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞活化度。(2)分別在治療前與治療后3周、4周應(yīng)用美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院卒中量表(NIHSS)與Barthel指數(shù)量表評(píng)定2組神經(jīng)功能缺損狀況及日常生活能力，NIHSS得分越高表示神經(jīng)功能缺損程度越為嚴(yán)重；Barthel指數(shù)分值越高說(shuō)明日常生活能力越強(qiáng)[4]。(3)檢測(cè)比較2組治療前及治療后3周、4周神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(NGF、BDNF)水平。

2 結(jié)果

2．1 2組外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞活化度比較 2組治療前外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞活化度相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；觀察組治療后1周、2周、3周、4周內(nèi)皮祖細(xì)胞活化度較對(duì)照組提高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 2組外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞活化度比較

2．2 2組NIHSS、Barthel指數(shù)評(píng)分比較 2組治療前NIHSS、Barthel指數(shù)評(píng)分相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；觀察組治療后3周、4周神經(jīng)功能缺損評(píng)分將對(duì)照組降低，日常生活能力評(píng)分均較對(duì)照組提高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。

2．3 2組NGF、BDNF水平比較 2組治療前NGF、BDNF水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；觀察組治療后3周、4周NGF、BDNF水平均較對(duì)照組提高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表2 2組NIHSS、Barthel指數(shù)評(píng)分比較分)

表3 2組NGF、BDNF水平比較

3 討論

腦出血為一種臨床常見(jiàn)多發(fā)疾病，應(yīng)用微創(chuàng)血腫清除術(shù)雖能有效清除腦血腫、降低顱內(nèi)高壓癥狀，但術(shù)后由于血腫壓迫及手術(shù)創(chuàng)傷，患者常會(huì)遺留不同程度神經(jīng)功能損傷，如大小便障礙、失語(yǔ)、肢體運(yùn)動(dòng)障礙等。

BMSCs為處于骨髓網(wǎng)狀間質(zhì)內(nèi)的一種非造血干細(xì)胞，有多項(xiàng)分化潛能。研究[5]指出，其可橫向分化成神經(jīng)細(xì)胞，有助于修復(fù)由于出血、外傷、缺血等原因?qū)е碌纳窠?jīng)損傷，同時(shí)BMSCs還可加速神經(jīng)元生長(zhǎng)、防止細(xì)胞凋亡，可促進(jìn)神經(jīng)功能恢復(fù)及重建。此外，BMSCs分離純化與體外培養(yǎng)技術(shù)均較為成熟，具有良好均一性，且來(lái)源于自體組織的BMSCs不會(huì)產(chǎn)生排斥反應(yīng)。閆禹等[6]研究報(bào)道，BMSCs可下調(diào)血腫周圍髓鞘相關(guān)糖蛋白(MAG)、少突膠質(zhì)細(xì)胞髓鞘糖蛋白(OMgp)等軸突生長(zhǎng)抑制因子表達(dá)水平，促進(jìn)腦出血大鼠神經(jīng)功能恢復(fù)。胡煒等[7]研究報(bào)道，動(dòng)員BMSCs主要為單核細(xì)胞，可進(jìn)一步分化為內(nèi)皮祖細(xì)胞，內(nèi)皮祖細(xì)胞可大量動(dòng)員并且參與到病灶側(cè)支循環(huán)形成中，進(jìn)而加速局部血管形成，促進(jìn)患者神經(jīng)功能重建。本研究結(jié)果顯示，觀察組治療后3周、4周神經(jīng)功能、日常生活能力均優(yōu)于對(duì)照組，觀察組治療后內(nèi)皮祖細(xì)胞活化度均高于對(duì)照組(P<0.05)。提示采用自體BMSCs移植治療，可提高內(nèi)皮祖細(xì)胞水平，促進(jìn)患者神經(jīng)功能重建，提高患者日常生活能力。BMSCs對(duì)于神經(jīng)功能的重建主要依靠多種神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的生成及分泌，其中NGF可加速神經(jīng)元發(fā)育、促進(jìn)軸突形成及延長(zhǎng)；BDNF能促進(jìn)神經(jīng)元分化與成熟并加速軸突再生，且能減輕血腫中毒副產(chǎn)物對(duì)于神經(jīng)細(xì)胞的損害。本研究顯示，觀察組治療后3周、4周NGF、BDNF水平均較對(duì)照組提高(P<0.05)。提示采取自體BMSCs移植治療，可加速神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子生成及分泌，從而加速神經(jīng)功能重建。

綜上，對(duì)腦出血患者應(yīng)用自體BMSCs移植治療效果顯著，可明顯減輕患者神經(jīng)功能損傷，提高內(nèi)皮祖細(xì)胞與神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子水平，促進(jìn)其神經(jīng)功能恢復(fù)，提升其日常生活能力。

[1] 曹文鋒，謝旭芳，張洪連，等．自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療腦出血臨床研究[J]．中國(guó)實(shí)用神經(jīng)疾病雜志，2014，17(7)：10-12．

[2] 田少輝，許磊，李盼祥，等．老年腦出血血腫周圍組織T細(xì)胞免疫球蛋白黏蛋白分子-3表達(dá)及在腦出血發(fā)病中的意義[J]．中國(guó)老年學(xué)雜志，2016，36(6)：1 325-1 327．

[3] 王旭，張志彬，楊宏，等．自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞動(dòng)脈和靜脈移植治療急性腦梗死的療效對(duì)比[J]．中國(guó)老年學(xué)雜志，2015，35(6)：1 483-1 484．

[4] 譚支強(qiáng)．微創(chuàng)穿刺引流術(shù)聯(lián)合干細(xì)胞移植治療對(duì)高血壓腦出血患者恢復(fù)情況、神經(jīng)功能的影響[J]．海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2016，22(21)：2 512-2 515．

[5] 張化明，楊冰，楊海，等．自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植聯(lián)合康復(fù)治療高血壓腦出血的效果觀察[J]．中國(guó)綜合臨床，2014，30(9)：967-969．

[6] 閆禹，王燕琳，宋波，等．骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植腦出血模型大鼠血腫周圍軸突生長(zhǎng)抑制因子MAG及OMgp的表達(dá)[J]．中國(guó)組織工程研究，2012，16(19)：3 457-3 461．

[7] 胡煒，楊楓，唐尤佳．腦出血微創(chuàng)術(shù)后自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞動(dòng)員對(duì)神經(jīng)功能恢復(fù)的影響[J]．中國(guó)醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，43(5)：437-440．

(收稿2017-01-05)

責(zé)任編輯：張喜民

Autologous bone marrow mesenchymal stem cells transplantation in the treatment of patients with intracerebral hemorrhage

Wang Hui，Wang Tian

Nanshi Hospital of Nanyang City，Nanyang 473002，China

ObjectiveTo investigate the effect of autologous bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) transplantation on the activation of EPCs and Neurological function in peripheral blood of patients with cerebral hemorrhage．MethodsTotally 86 patients with cerebral hemorrhage were admitted to Nanshi Hospital from June 2014 to June 2016．They were divided into groups according to different treatment schemes，each with 43 cases．The control group received routine minimally invasive hematoma removal treatment，while the observation group was treated with autologous BMSCs transplantation on the basis of the control group．The activity of EPCs in peripheral blood between the two groups after 1 week，2 weeks，3 weeks and 4 weeks was compared with the neurological deficit scores，daily living ability scores and neurotrophic factors[nerve growth factor (NGF) and brain-derived neurotrophic factor (BDNF)]levels at 3 and 4 weeks after treatment．ResultsThe activation rate of EPCs in the observation group after 1，2，3 and 4 weeks was higher than that of the control group．The difference was statistically significant (P<0.05)．After 3 weeks and 4 weeks，the scores of neurological impairment in the observation group were lower than that in the control group，and the scores of daily living ability were improved compared with the control group，the difference was statistically significant (P<0.05)．The levels of NGF and BDNF in the observation group after 3 weeks and 4 weeks were higher than those in the control group，the difference was statistically significant (P<0.05)．ConclusionAutologous bone marrow mesenchymal stem cells transplantation is effective in the treatment of intracerebral hemorrhage．It can obviously alleviate the damage of nerve function，raise the level of EPCs and neurotrophic factors，promote the recovery of nerve function and enhance their daily living ability．

Bone marrow mesenchymal stem cells；Cerebral hemorrhage；Endothelial progenitor cells；Neurological function

R743.34

A

1673-5110(2017)17-0025-03

10.3969/j.issn.1673-5110.2017.17.008

王輝(1976-)，男，本科。Email：15093036622@163.com