歐陽文浩韓明梅云鵬飛云喜報王鵬飛

（1.內(nèi)蒙古師范大學(xué)化學(xué)與環(huán)境科學(xué)院，內(nèi)蒙古呼和浩特 010020；2.內(nèi)蒙古呼和浩特市托克托縣獸藥檢驗所監(jiān)察所，內(nèi)蒙古托縣 010200；3.金河生物科技股份有限公司，內(nèi)蒙古呼和浩特 010200）

鹽酸金霉素中氯乙烷的氣相色譜檢測方法

歐陽文浩1韓明梅1云鵬飛2云喜報3王鵬飛3

（1.內(nèi)蒙古師范大學(xué)化學(xué)與環(huán)境科學(xué)院，內(nèi)蒙古呼和浩特 010020；2.內(nèi)蒙古呼和浩特市托克托縣獸藥檢驗所監(jiān)察所，內(nèi)蒙古托縣 010200；3.金河生物科技股份有限公司，內(nèi)蒙古呼和浩特 010200）

目的：用氣相色譜法定量測定鹽酸金霉素中次生殘留氯乙烷的含量。方法：氣相色譜法，采用DB-624石英毛細管柱（30m×0.53mm×3um，固定液為聚乙二醇20-M）；FID檢測器；柱溫：40℃；進樣溫度：180℃；檢測器溫度：250℃；載氣為氮氣；添加標(biāo)準(zhǔn)為氯乙烷。結(jié)果：氯乙烷在3～25 μg/ml時線性良好，線性方程為得Y=9.653×103X-3.183×103（Y氯乙烷峰面積，X氯乙烷標(biāo)準(zhǔn)液濃度），相關(guān)系數(shù)為r=0.9997；RSD（%）=7.1%～11.6%，平均回收率為97.8%；檢測限為1.0ppm。結(jié)論：本方法簡便、準(zhǔn)確快速，可適用于對藥品質(zhì)量的監(jiān)控。

氣相色譜 鹽酸金霉素 氯乙烷 含量測定

鹽酸金霉素又名鹽酸氯四環(huán)素，屬廣譜抗生素，抗菌譜同四環(huán)素，對耐青霉素，金黃色葡萄球菌的療效比四環(huán)素稍強，對革蘭陽性菌和陰性菌均有抗菌作用。但是，在鹽酸金霉素產(chǎn)品提取、干燥加溫時，乙醇與鹽酸在一定溫度條件下反應(yīng)生成次生殘留氯乙烷。由于氯乙烷屬于一類殘留，接觸或攝取后會引起麻醉，出現(xiàn)中樞神經(jīng)和呼吸抑制，對禽畜或人體可造成傷害。

目前，氯乙烷常用的檢測方法是氣相色譜法不銹鋼填充柱檢測，操作煩瑣，且檢測時間長，靈敏度低，耗費人力、物力。為確保藥品質(zhì)量和對次生殘留溶劑殘留量的控制，特開發(fā)出本文介紹的方法：采用頂空進樣技術(shù)，用大口徑毛細管氣相色譜法進行測定，方法分離效果好，速度快、準(zhǔn)確度和精密度良好，并可有效規(guī)避以往測定方法存在的弊端。

1 儀器和試藥

島津 GC-2014 氣相色譜儀，帶頂空自動進樣器，DB-624石英毛細管柱（30m×0.53mm×3um，固定液為聚乙二醇20-M，F(xiàn)ID檢測器，島津GCSolution 2.3版。

氯乙烷來自SIGMA-ALORICH（批號：SHBB5265），色譜純；二甲基甲酰胺（DMF）：分析純以上；重蒸餾水。

鹽酸金霉素（批號：H20081201，H20081202，H20081203）為金河生物科技股份有限公司生產(chǎn)。

2 色譜條件

毛細管柱：DB-624石英毛細管柱（30m×0.53mm×3um，固定液為聚乙二醇20-M）；柱溫：40°C；FID檢測器；檢測器溫度：250°C；載氣：氮氣（99.999%）；進樣溫度：180°C；進樣體積：1.0ml；

3 方法與結(jié)果

3.1 溶液的制備

3.1.1 標(biāo)準(zhǔn)貯備液的制備 精密量取氯乙烷2M甲基叔丁基醚溶液0.97ml，置于50ml量瓶中，加N，N-二甲基甲酰胺溶解并稀釋至刻度，搖勻，繼續(xù)精密量取稀釋液1.0ml，置于50ml量瓶中，加N，N-二甲基甲酰胺稀釋至刻度，搖勻，繼續(xù)精密量二次稀釋液2.0ml，置于100ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，使溶液含氯乙烷為1.0014μg·ml-1（氯乙烷分子量64.5145）。

3.1.2 供試溶液的制備 取鹽酸金霉素約0.05g，精密稱定，置于20ml頂空瓶中，精密加入水10ml，封瓶，超聲并振搖使溶解，搖勻。

3.1.3 參比溶液的制備 取貯備液適量，加水稀釋成每1ml中含氯乙烷0.1μg的溶液。取參比溶液10ml，加入20ml頂空瓶中，再精密稱取鹽酸金霉素樣品約0.05g，封瓶，超聲并振搖使溶解。

3.1.4 空白溶液的制備 精密量取水10ml，置于20ml頂空瓶中，封瓶。

3.2 測定法

取裝有供試溶液的頂空瓶，在60℃平衡45min后進樣，在以上色譜條件下測定，記錄氯乙烷的保留時間和峰面積；取裝有參比溶液的頂空瓶，同法測定，記錄氯乙烷的保留時間和峰面積。

計算公式：

At：樣品溶液氯乙烷峰面積Ar：參比溶液氯乙烷峰面積 W：樣品稱樣量

3.3 專屬性

在本文方法色譜條件下，檢測標(biāo)準(zhǔn)溶液中的甲基叔丁基醚溶劑和二甲基甲酰胺稀釋劑、鹽酸金霉素中乙醇、乙醚、氯仿，以及空白對氯乙烷測定的干擾。

對各制備溶液和制備的混合溶液按上述測定法測定后，氯乙烷能與乙醇、乙醚、甲基叔丁基醚、氯仿和二甲基甲酰胺完全分離，且空白不干擾測定（見圖1～圖4）。

圖1 空白溶液圖譜

圖2 混合溶液圖譜

圖3 參比溶液圖譜

圖4 樣品溶液

3.4 線性實驗

精密量取標(biāo)準(zhǔn)儲備液10ml，置于50ml容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，得到1倍溶液。再精密量取稀釋液適量，加水依次稀釋得到2倍、4倍、8倍和16倍溶液。量取各倍溶液10ml，分別置于20ml頂空瓶中，封瓶，在該方法色譜條件下測定，記錄氯乙烷各濃度對應(yīng)的峰面積。每一濃度重復(fù)3次。以標(biāo)準(zhǔn)溶液各濃度為橫坐標(biāo)（X），對應(yīng)的平均峰面積為縱坐標(biāo)（Y）繪制曲線（圖5），并計算回歸方程和相關(guān)系數(shù)（r），其結(jié)果如下表1：

表1 氯乙烷線性實驗結(jié)果

Y= 9.653×103X-3.183×103

r=0.9997

氯乙烷濃度在3 ug/ml～25 ug/ml范圍線性良好。

3.5 精密度

3.5.1 儀器精密度

精密量取標(biāo)準(zhǔn)儲備液10ml，置于20ml頂空瓶中，封瓶，在該方法條件下連續(xù)測定5次，記錄氯乙烷峰面積（表2），計算RSD為7.5%。

3.5.2 方法精密度

不同日期，由不同化驗員采用該方法條件下對3批鹽酸金霉素分別平行測定，記錄氯乙烷峰面積（表3），計算RSD在7.1%～11.6%。

表2 氯乙烷儀器精密度實驗數(shù)據(jù)

3.6 準(zhǔn)確度實驗

按照該色譜條件和測定法，對H20081201進行檢測和氯乙烷標(biāo)準(zhǔn)含量計算，記錄計算結(jié)果（圖3、圖4和表4）與理論值比較，平均回收率為99.99%。

表3 氯乙烷方法精密度實驗數(shù)據(jù)

表4 氯乙烷準(zhǔn)確度實驗數(shù)據(jù)

計算說明：

已知At為5222，Ar為11330，樣品量為0.05g

樣品中含氯乙烷=[5222/（11330-5222）]×0.1 ug/ml×10 ml=0.8549ug

標(biāo)準(zhǔn)氯乙烷實測值=（11330-5222）×0.8549/5222=0.9999 ug

氯乙烷理論加入量=0.1 ug/ml×10 ml=1 ug

回收率%=0.9999/1×100%=99.99%

3.7 檢測限和定量限

3.7.1 定量限溶液的制備：取各溶劑貯備液適量，用水多次稀釋后配制成含氯乙烷1.50×10-5mg·ml-1的溶液。

3.7.2 檢測限溶液的制備：取各溶劑貯備液適量，用水多次稀釋后配制成含氯乙烷5.0×10-6mg·ml-1的溶液，即得。

3.7.3 取定量限和檢測限溶液各10ml，分別置于20ml頂空瓶中，封瓶，在該方法色譜條件下測定，記錄氯乙烷的峰高。當(dāng)S/N=10時，氯乙烷的定量限為3.0ppm；當(dāng)S/N=3時，氯乙烷的檢測限為1.0ppm（表5）。

表5 定量限與檢測限測試結(jié)果

4 結(jié)論

（1）專屬性強。氯乙烷能與乙醇、乙醚、甲基叔丁基醚、氯仿和二甲基甲酰胺完全分離，且空白不干擾測定

（2）氯乙烷在3～25μg/ml時線性良好。r=0.9997，相關(guān)系數(shù)滿足大于0.9的要求。

（3）精密度高。儀器精密度測試峰面積RSD平均為7.5%；方法精密度測試峰面積RSD在7.1%～11.6%。均滿足低于15%的要求。

（4）準(zhǔn)確度高。標(biāo)準(zhǔn)添加回收為99.99%，滿足回收率80%～120%的要求。

（5）定量限為3 ppm，檢測限1ppm，滿足常規(guī)測試要求。

5 討論

（1）受不同批的柱填充或不同的供應(yīng)商影響，可能導(dǎo)致運行時間會有一些變化。

（2）實驗中如果不是頂空自動進樣器，采用水浴一定控制好溫度和時間，以確保氯乙烷達到汽液平衡，減少試驗誤差。

[1]黃鈴，關(guān)敏.氣相色譜法測定氯乙烷的純度及雜質(zhì)含量[J].氯堿工業(yè)，2016，52（5）：31-35.

[2]周明霞，萬仁玲，于靖，等.歐洲藥典6.0版介紹[J].中國獸藥雜志，2010，44（7）：28-31.