李琳，蘇娟，柴克霞，楊潔，秦雅婧，鄂維建，李玉玲

(1青海大學研究生院，西寧810000；2淄博第一醫(yī)院；3青海大學附屬醫(yī)院)

類風濕性關節(jié)炎合并血小板增多患者血清IL-11、sIL-11R水平變化

李琳1，2，蘇娟3，柴克霞3，楊潔3，秦雅婧3，鄂維建3，李玉玲3

(1青海大學研究生院，西寧810000；2淄博第一醫(yī)院；3青海大學附屬醫(yī)院)

目的觀察類風濕性關節(jié)炎(RA)合并血小板增多患者血清白細胞介素11(IL-11)、游離白細胞介素11受體(sIL-11R)水平的變化。方法將60例RA患者根據(jù)血小板計數(shù)(PLT)是否>300×109/ L，分為血小板升高組24例和血小板正常組36例，另選健康體檢者30例為對照組，采用ELISA法檢測三組患者血清IL-11、sIL-11R。分析RA患者血清IL-11、sIL-11R與PLT、平均血小板體積(MPV)、血小板分布寬度(PDW)、降鈣素原(PCT)、RA患者病情評分(DAS28評分)、血沉(ESR)、C反應蛋白(CRP)、類風濕因子(RF)、抗環(huán)氨酸肽抗體(ACCP)的相關性。結果血小板增多組血清IL-11、sIL-11R水平均高于血小板正常組和正常組(P均<0.05)。RA組患者血清IL-11水平與sIL-11R、PLT、PCT、DAS28、ESR、CRP呈正相關(P均<0.05)，與MPV、PDW、RF、ACCP無相關性(P均>0.05)；RA組血清sIL-11R水平與PLT、PCT、DAS28、ESR、CRP、RF、ACCP均呈正相關(P均<0.05)。結論RA合并血小板增多患者血清IL-11、sIL-11R水平明顯升高。

白細胞介素11；游離白細胞介素11受體;類風濕關節(jié)炎；血小板增多癥

類風濕關節(jié)炎(RA)患者疾病活動期多合并反應性血小板增多。血小板在RA患者的關節(jié)滑液及血漿中發(fā)生聚集、增強活化，血小板活化導致大量炎性介質釋放，與RA患者滑膜炎和血管翳密切相關[1,2]。所以關于RA合并反應性血小板增多的調控因素是一直研究的熱點。IL-11是IL-6家族細胞因子的新進成員，在促進血小板的增殖分化、調節(jié)免疫應答、調節(jié)骨代謝、誘導急性期反應蛋白合成等方面[3～6]具有重要作用，與多種組織的炎癥狀態(tài)相關。目前有研究表明 IL-11較高表達于 RA患者的滑膜組織、關節(jié)液及血清中，而IL-11是否與RA合并反應性血小板增多有關，國內尚未有相關報道。本研究觀察了RA合并血小板增多患者血清IL-11及游離白細胞介素11受體(sIL-11R)水平變化，探討其在 RA合并血小板增多發(fā)生的可能機制中的作用。現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2014年11月～2015年9月青海大學附屬醫(yī)院風濕科住院的RA患者60例，均符合2010 EULAR/ACR修訂并頒布的RA分類標準[7]，按照PLT是否>300×109/L分為血小板增多組24例和血小板正常組36例。血小板增多組男9例，女15例，年齡(48.79±7.87)歲。血小板正常組男14例，女22例，年齡(52.19±13.91)歲。所有患者均排除糖尿病、高血壓、高血脂、心腦血管疾病、感染、肝腎疾病、血栓性疾病、血小板疾病等其他疾病。另選30例年齡、性別與RA患者匹配的健康體檢人員為對照組。

1.2 血清IL-11、sIL-11R的檢測方法 受試者清晨空腹抽取肘靜脈血2 mL，2 h內室溫下3 000 r/min離心15 min，分離血清并于-80℃冰箱中保存待檢。血清IL-11、sIL-11R 檢測采用ELISA法，操作按試劑盒(購自武漢優(yōu)爾生商貿有限公司)說明書進行。

2 結果

2.1 各組血清IL-11、sIL-11R比較 三組受檢者血清IL-11、sIL-11R 見表1。血小板增多組血清IL-11、sIL-11R水平明顯高于血小板正常組及健康對照組(P均<0.05)。

表1 三組血清IL-11、sIL-11R水平比較

注：與血小板正常組比較，▲P<0.05；與對照組比較，*P<0.05。

2.2 RA患者血清IL-11、sIL-11R與PLT、PCT、DAS28、ESR、CRP、RF、ACCP的相關性 Pearson相關分析結果顯示RA患者血清IL-11水平與sIL-11R、PLT、PCT、DAS28、ESR、CRP均呈正相關(r=0.480，0.642，0.408，0.447，0.352，0.355，P均<0.05)，與MPV、PDW、RF、ACCP無相關性(P均>0.05)。血清sIL-11R水平與PLT、PCT、DAS28、ESR、CRP、Rf、ACCP均呈正相關(r=0.426、0.307、0.457、0.421、0.413、0.442、0.370，P均<0.05)。

以IL-11為因變量，PLT、PCT、CRP、ESR、sIL-11R為自變量，進行多元逐步回歸分析，結果顯示影響血清IL-11最顯著的因素是PLT(Beta=0.932，P<0.05)、PCT(Beta=-0.443，P<0.05)；以sIL-11R作為因變量，IL-11、PLT、RF、CRP、ESR、RF、ACCP為自變量，進行多元逐步回歸分析，結果影響血清sIL-11R最顯著的因素是IL-11(Beta=0.349，P<0.05)。

3 討論

本研究結果顯示RA合并血小板增多患者血清IL-11水平顯著升高，進一步分析發(fā)現(xiàn)RA組患者血清IL-11與PLT、PCT呈正相關，表明在RA中IL-11可能促進了血小板的增多。RA患者血清中IL-11水平增高，可能通過單獨作用或與血小板生成素(TPO)、干細胞因子(SCF)、IL-3等細胞因子協(xié)同作用的方式，參與促進血小板增多：在骨髓細胞的分化中IL-11可與SCF、IL-3協(xié)同作用，刺激造血干細胞和原始多能祖細胞的增殖，并促進其向巨核系分化[8]；IL-11可以作用于巨核系生長的各階段，促進幼稚巨核細胞的成熟，還可誘導成熟巨核細胞釋放血小板，增加血小板的生成[9]。因此，RA中IL-11水平升高可能為RA合并反應性血小板增多發(fā)生的機制之一。本研究未發(fā)現(xiàn)RA組血清IL-11與MPV、PDW存在相關性，提示RA中血清IL-11主要促進血小板數(shù)目的增多，可能并未直接參與血小板的活化。有關RA中血小板變化的機制復雜仍需要進行深入研究。

本研究結果顯示，RA患者血清IL-11水平與DAS28、CRP、ESR等反映RA活動的指標均呈正相關。RA活動期患者滑膜組織的巨噬細胞釋放TNF-α、IL-1、IL-6等炎性因子增多，加重滑膜組織的炎癥改變，誘導更多的IL-11生成。同時，產生的IL-11能誘導非RANKL依賴的循環(huán)單核細胞分化成破骨細胞[10]，進而產生更多的炎癥因子、基質金屬蛋白酶類，參與RA疾病活動。

IL-11通過與IL-11R特異性結合介導信號轉導，發(fā)揮生物學功能。IL-11R有膜型IL-11R和體液中sIL-11R兩種形式。sIL-11R與膜型IL-11R具有類似活性結構，也能與IL-11發(fā)生特異性結合。因此，我們假設sIL-11R與膜型IL-11R競爭性拮抗阻斷IL-11的作用，在RA患者合并反應性血小板增多時sIL-11R降低，促進了IL-11與膜型IL-11R結合，進而促進血小板生成增多。但本研究結果意外的發(fā)現(xiàn)，RA血小板增多組血清sIL-11R水平高于血小板正常組，RA患者血清sIL-11R與PLT、PCT呈正相關，表明sIL-11R可能在RA中同樣促進了血小板增多。既往關于sIL-11R對IL-11促血小板生成的調控作用的研究報道非常少。最近有研究發(fā)現(xiàn)IL-11與sIL-11R特異性結合形成IL-11/sIL-11R復合物，后者可能被膜型gp130捕捉，介導下游STAT信號轉導，還可對某些不含膜型受體的細胞發(fā)揮作用[11～13]，因此sIL-11R對IL-11的生物效應可能發(fā)揮激動作用。結合本研究結果，RA中血清sIL-11R水平與IL-11水平呈正相關，血清IL-11水平是影響血清sIL-11R的顯著因素。我們推測在RA活動時IL-11水平顯著升高，激活膜型IL-11R水解、釋放sIL-11R水平增高，這些可溶性受體可與IL-11形成免疫復合物，激動IL-11的促進巨核細胞及血小板的生成作用，可能是RA患者血小板增多的另一機制。本研究未能檢測膜型IL-11R，有關膜型IL-11R在RA中的變化及對于IL-11的調控作用，有待進一步研究。

本研究結果顯示RA患者血清sIL-11R水平與DAS28、ESR、CRP均呈正相關，說明在持續(xù)RA疾病狀態(tài)下，sIL-11R仍然有活化。ADAM10是sIL-11R形成過程中重要的金屬蛋白酶解離素[13]，隨著RA疾病活動，滑膜成纖維細胞在炎癥介質的刺激下表達ADAM10增多[14]，促進膜型IL-11R的水解及脫落，使血清sIL-11R增高。RA疾病活動機制復雜，sIL-11R可能僅為影響因素之一，相關機制仍需深入研究。

本研究結果顯示，RA患者血清sIL-11水平與RF、ACCP呈正相關，提示sIL-11R可能與RA患者自身抗體的產生有關。有學者[15]研究了ACCP陽性或陰性狀態(tài)的RA患者血漿sIL-6R與DAS28的相關性，認為自身抗體的表達或缺失是決定sIL-6R與疾病活動度相關性的必要因素。sIL-11R與sIL-6R在結構、功能上最為相近，因此我們推測本研究中RF、ACCP等自身抗體是決定sIL-11R與疾病活動度呈正相關的重要因素，可能是sIL-11R水平與自身抗體相關的原因。RA中自身抗體的產生機制復雜，sIL-11與自身抗體的作用仍需做進一步研究。

總之，本研究發(fā)現(xiàn)RA合并血小板增多患者血清IL-11、sIL-11R水平升高，血清IL-11、sIL-11R在RA合并血小板增多中發(fā)揮促進作用。RA炎癥反應中細胞因子網(wǎng)絡作用機制復雜，IL-11/sIL-11R可能在RA免疫調節(jié)中發(fā)揮作用，加強IL-11/sIL-11R在RA發(fā)生發(fā)展中的研究，有望進一步闡明RA的免疫機制，為探索RA治療的新靶點提供方向。

[1] Boilard E, Nigrovic P A, Larabee K, et al. Platelets amplify inflammation in arthritis via collagen-dependent microparticle production[J]. Science, 2010,327(5965):580-583.

[2] 楊秀麗,黃傳兵,賈建云,等.血小板微粒的釋放與類風濕關節(jié)炎的相關性研究現(xiàn)狀[J].風濕病與關節(jié)炎,2015,4(6):61-64.

[3] Dams-Kozlowska H, Kwiatkowska-Borowczyk E, Gryska K, et al. Designer cytokine hyper interleukin 11 (H11) is a megakaryopoietic factor [J]. International journal of medical sciences, 2013,10(9):1157-1165.

[4] Putoczki T, Ernst M. More than a sidekick: the IL-6 family cytokine IL-11 links inflammation to cancer[J]. J Leuk Biol, 2010,88(6):1109-1117.

[5] McCoy EM, Hong H, Pruitt HC, et al. IL-11 produced by breast cancer cells augments osteoclastogenesis by sustaining the pool of osteoclast progenitor cells [J]. BMC Cancer, 2013,13(1):16.

[6] Kheifetz Y, Elishmereni M, Agur Z. Complex pattern of interleukin-11-induced inflammation revealed by mathematically modeling the dynamics of C-reactive protein[J]. J Pharmacok pharmacod, 2014,41(5):479-491.

[7] Cader M Z, Filer A, Hazlehurst J, et al. Performance of the 2010 ACR/EULAR criteria for rheumatoid arthritis: comparison with 1987 ACR criteria in a very early synovitis cohort[J]. An Rheum Dis, 2011,70(6):949-955.

[8] 陳淑萍,陳慧菁,葉韻斌,等.TPO,PDGF,IL-11在臍血巨核細胞生長和分化中的作用[J].福建醫(yī)科大學學報,2006,40(4):330-333.

[9] Weich NS , Fitzgerald M , Wang A , et al . Recom binant human interleukin- 11 synergiz es w it h st eel factor and int erleukin-3 to promote directly the early stages of murine megakaryocy te development in vitro[ J] . Blood, 2000,95(2):503- 509.

[10] Sabokbar A, Mahoney D J, Hemingway F, et al. Non-canonical (RANKL-Independent) pathways of osteoclast differentiation and their role in musculoskeletal diseases[J]. Clin Rev Allerg Immunol, 2016,51(1):16-26.

[11] 段聚寶,王嘉璽.白細胞介素及其受體研究概況[J]. 國外醫(yī)學: 分子生物學分冊,1999,21(1):35-39.

[12] Dams-Kozlowska H, Gryska K, Kwiatkowska-Borowczyk E, et al. A designer hyper interleukin 11 (H11) is a biologically active cytokine[J]. BMC Biotechnol, 2012,12(1):8.

[13] Lokau J, Nitz R, Agthe M, et al. Proteolytic cleavage governs interleukin-11 trans-signaling[J]. Cell Rep, 2016,14(7):1761-1773.

[14] Isozaki T, Rabquer BJ, Ruth JH, et al. ADAM-10 is overexpressed in rheumatoid arthritis synovial tissue and mediates angiogenesis[J]. Arth Rheumatol, 2013,65(1):98-108.

[15] Rodriguez-Rodriguez L, Lamas JR, Varade J, et al. Plasma soluble IL-6 receptor concentration in rheumatoid arthritis: associations with the rs8192284 IL6R polymorphism and with disease activity[J]. Rheumatol Inter 2011,31(3):409-413.

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.35.031

R593.22

B

1002-266X(2017)35-0093-03

2017-03-21)

中西部高校綜合實力提升工程建設項目(4056051001)；青海省科技創(chuàng)新能力促進計劃項目(2015-HZ-810)

蘇娟(E-mail：sujuanqh@163.com)