尤英霞，閆莎莎，黃慶紅，?；蹫?/p>

(鄭州市第六人民醫(yī)院 呼吸三科，河南 鄭州450000)

肺結(jié)核患者肺泡灌洗液及外周血中T淋巴細胞亞群的表達

尤英霞，閆莎莎，黃慶紅，?；蹫?/p>

(鄭州市第六人民醫(yī)院 呼吸三科，河南 鄭州450000)

肺結(jié)核的發(fā)病原因與機體的免疫功能有著密切關(guān)系，結(jié)核患者外周血免疫功能檢測的報道較多，對于肺泡灌洗液的T淋巴細胞水平的研究相對較少[1]。本研究采用流式細胞儀對60例肺結(jié)核患者及40例健康體檢者肺泡灌洗液(BALF)及外周血中T細胞亞群表達水平進行檢測，現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

1 資料與方法

1.1臨床資料

選取本院2015年1月-2016年6月收治的60例肺結(jié)核患者及40例健康體檢者為研究對象，分為觀察組和對照組。觀察組中男37例，女23例，年齡23-72歲，平均年齡(43.23±14.34)歲?；颊呷脒x標(biāo)準(zhǔn)：(1) 入選者均符合《肺結(jié)核診斷和治療指南》中的診斷要求；(2) 有咳嗽、咳痰、低熱及痰中帶血等癥狀；(3) X光檢查可見肺部斑片狀陰影；(4) 患者入院前未接受過抗結(jié)核病的治療；(5) 患者均知情同意并簽署知情同意書。對照組40例為健康體檢者，其中男23例，女17例，年齡21-68歲，平均年齡(42.09±13.76)歲。入選標(biāo)準(zhǔn)：(1) 對照組患者無肺結(jié)核類相關(guān)癥狀；(2) 痰液結(jié)核分枝桿菌涂片及培養(yǎng)均陰性；(3) X胸片檢查無肺結(jié)核病灶出現(xiàn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1) 并發(fā)其他嚴重疾病的患者，包括心腦血管疾病、腫瘤癌癥等；(2) 患有精神類疾病的受試者；(3) 妊娠和哺乳期婦女。組間患者在基線資料比較無差異性，P>0.05。

1.2 方法

患者在入院當(dāng)天采集3 ml外周靜脈血，保存在肝素鈉抗凝管中。2 h內(nèi)處理外周血樣品，5 000 rpm離心10 min后，然后進行T細胞各項亞群細胞的檢測。肺泡灌洗采用纖支鏡在患者的肺部病變部位進行操作。操作前進行局部麻醉，采用奧林巴斯電子氣管鏡經(jīng)口插入，其頂端緊密鍥入病變段處(健康受試者統(tǒng)一灌洗右肺上葉)，由灌洗導(dǎo)管將30 ml生理鹽水分次快速注入肺泡內(nèi)，通過負壓吸引回收，其回收率應(yīng)不小于40%。除去肺泡灌洗液中的粘液并加入到硅塑瓶內(nèi)，兩小時內(nèi)送檢完畢。采用賽默飛Attune○RNxT 聲波聚焦流式細胞儀對收集的樣品進行T淋巴細胞亞群(CD3、CD4、CD8細胞)的檢測分析，相關(guān)的單抗試劑盒均購置于美國賽默飛公司，相關(guān)檢測操作均按照說明書嚴格進行。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

數(shù)據(jù)處理采用SPSS 20.0進行相關(guān)操作，組間計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，用t檢驗進行分析，P<0.05差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者BALF和外周T細胞對比

治療前兩組BALF和外周血中CD3、CD8比較無差別，P>0.05；觀察組BALF及外周血中CD4、CD4/CD8低于對照組，P<0.05，結(jié)果見表1。

2.2 觀察組不同治療時間BALF和外周血T淋巴細胞水平比較

觀察組治療1個月后 CD4細胞水平升高，3個月后BALF和外周血中CD4、CD4/CD8水平比治療前升高，P<0.05，結(jié)果見表2。

表1 兩組患者BALF和外周血T淋巴細胞水平比較

注：與對照組相比，*P<0.05

表2 觀察組不治療時間BALF和外周血T淋巴細胞水平比較

注：與治療前相比，*P<0.05。

3 討論

近幾年隨著分子免疫學(xué)和細胞生物學(xué)科的快速發(fā)展， T細胞亞群在結(jié)核病發(fā)病過程中的重要作用得到確認[2]。CD4T淋巴細胞是一種輔助性的亞細胞群體，在肺結(jié)核免疫機制中占據(jù)重要地位，其水平值的降低提示機體有患肺結(jié)核的可能[3]。CD8細胞與CD4細胞有著相反的免疫效應(yīng)，其水平值的增高提示疾病的病情加劇，治療周期延長、增加治療難度。對于肺結(jié)核患者T淋巴細胞的檢測，常規(guī)外周靜脈血的免疫細胞水平檢測特異性不強，肺泡灌洗液可以較為準(zhǔn)確的對患者的肺部免疫功能進行評價。丁士標(biāo)等人[4]采用肺結(jié)核患者的肺泡灌洗液進行T淋巴細胞免疫功能方面的研究，建立了良好的診斷指標(biāo)的相關(guān)性研究模型，提高了T淋巴細胞對肺結(jié)核診斷的特異性。Kumagai等[5]在研究中也表明肺泡灌洗液中T淋巴細胞的檢測更能有助于對肺結(jié)核疾病的確診。

本研究結(jié)果顯示肺結(jié)核患者免疫功能的檢測， BALF和外周血中CD4、CD4/CD8細胞水平值與正常組患者相比均有降低， BALF中CD4/CD8的數(shù)值下降是由CD4細胞減少和CD8細胞增多導(dǎo)致，外周血相應(yīng)比值的降低則是單純的CD4細胞減少導(dǎo)致，從而初步說明了患者的體內(nèi)CD4、CD4/CD8細胞水平值的上下波動變化與肺部疾病的出現(xiàn)有著明顯的相關(guān)性[6]。本研究中CD3在兩組患者中，BALF及外周血部位的水平值均相似，無統(tǒng)計學(xué)意義，提示CD3細胞水平可能與肺結(jié)核患者發(fā)病無必然聯(lián)系。再者，本研究對觀察組患者不同治療階段的T淋巴細胞水平檢測對比，發(fā)現(xiàn)在治療后1月、3月患者的CD4細胞、CD4/CD8細胞水平均有明顯增加，結(jié)合患者的臨床癥狀改善、肺部病變減輕等結(jié)果共同表明T淋巴細胞尤其是CD4、CD8、CD4/CD8等水平值檢測對肺結(jié)核的診斷和療效判斷有重要作用。

[1]中華醫(yī)學(xué)會結(jié)核病學(xué)分會.氣管支氣管結(jié)核診斷和治療指南(試行)[J].中華結(jié)核和呼吸雜志,2012,35(8):230.

[2]Jang H B,Lee A J,Kim M J,et al.Evaluation of CD3+CD4-CD8- (Double-negative) T Cells in Bronchoalveolar Lavage Fluid:an Effective Tool for Pulmonary Disease Diagnosis[J].Laboratory Medicine Online,2015,5(1):20.

[3]陳品儒,譚守勇.非結(jié)核分枝桿菌肺病患者外周血T淋巴細胞亞群與營養(yǎng)狀況相互關(guān)系的探討[J].實用醫(yī)學(xué)雜志,2014,10(11):1768.

[4]丁士標(biāo),陳愛鳳,潘亞萍,等.肺結(jié)核患者支氣管肺泡灌洗液病原菌分布與耐藥性分析[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2014(17):4203.

[5]Kumagai T,Tomita Y,Inoue T,et al.Pleural sarcoidosis diagnosed on the basis of an increased CD4/CD8 lymphocyte ratio in pleural effusion fluid:a case report[J].Journal of Medical Case Reports,2015,9(1):1.

[6]袁 媛，陳 驥.IL-18、OPN、INF-γ及 hs-CRP 在肺結(jié)核中的檢測意義[J].湖南師范大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版)，2016，13(2):117.

1007-4287(2017)09-1371-02

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